重组猪α干扰素/白介素2融合蛋白的编码基因和制备方法技术

本发明专利技术涉及基因工程技术领域，具体涉及重组猪α干扰素/白介素2融合蛋白的编码基因和制备方法。本发明专利技术提供重组猪α干扰素/白介素2融合蛋白的编码基因，所述编码基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。该重组猪α干扰素/白介素2融合蛋白的编码基因能够在大肠杆菌中实现高效、可溶性表达，制得可溶性的重组猪α干扰素/白介素2融合蛋白；经纯化的重组猪α干扰素/白介素2融合蛋白在不同细胞系上都具有较高的生物学活性，其抑制病毒增殖活性显著高于包涵体蛋白，且其抗PEDV病毒效果显著，能够有效保护仔猪抵抗PEDV的攻击。效保护仔猪抵抗PEDV的攻击。

【技术实现步骤摘要】
重组猪
α
干扰素/白介素2融合蛋白的编码基因和制备方法


[0001]本专利技术涉及基因工程
，尤其涉及重组猪α干扰素/白介素2融合蛋白的编码基因和制备方法。

技术介绍

[0002]随着养猪业的快速发展，猪病毒性传染病造成的发病率和死亡率不断增加；尤其是免疫抑制性疾病对猪体免疫系统损伤严重，造成疫苗免疫失败，给养猪业带来较大损失；针对猪的某些病毒病目前仍无疫苗可用，这些因素增加了猪病毒病的防控的难度。另外，抗生素的不合理使用甚至滥用导致猪肉药残超标、病原菌耐药严重以及环境污染等问题。
[0003]干扰素(interferon，IFN)是一类在同种细胞上具有广谱抗病毒、抗肿瘤和免疫激活功能活性的细胞因子。哺乳动物的干扰素分为I型和II型2大类，IFN
‑
α属于I型干扰素，α干扰素可以通过抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞的凋亡等途径发挥抗肿瘤的效应，此外还可以调节免疫细胞(包括巨噬细胞、DC细胞、B细胞、T细胞、固有免疫NK细胞等)的活性，如促进CD4
+
T细胞、CD8
+
T细胞的活化、增殖、相应细胞因子的分泌，促进NK细胞的杀伤活性和增殖，下调抑制型T细胞(Treg)作用。
[0004]白细胞介素
‑
2(interleukin
‑
2，IL
‑
2)又称T细胞生长因子(TCGF)，可诱导机体T淋巴细胞生长与分化，激活细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和NK细胞，刺激细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNF
‑
α)、γ干扰素(IFN
‑
γ)等细胞因子，提高机体的细胞免疫能力；IL
‑
2也可激活B淋巴细胞，促进抗体分泌，增强巨噬细胞对抗原的递呈能力、杀菌力及细胞毒性，从而发挥抗病毒和抗肿瘤作用。因此，基因工程IL
‑
2蛋白制剂不仅可作为抗病毒性疾病、自身免疫病与抗肿瘤方面的治疗药剂，还可作为佐剂增强疫苗的免疫效果，具有广阔的应用前景。开发兼具α干扰素和白介素2功能的重组猪α干扰素/白介素2融合蛋白能够为猪疫病的防控提供一种高效的基因工程抗病毒制剂，对于猪疫病防控具有重要意义。

技术实现思路

[0005]本专利技术提供重组猪α干扰素/白介素2融合蛋白的编码基因、重组载体和重组菌，以及重组猪α干扰素/白介素2融合蛋白的制备方法。
[0006]在前期研究中申请人构建了PoIFN
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α
‑
linker
‑
PoIL
‑
2嵌合基因，并在原核表达系统中以包涵体形式进行表达，初步证明其在细胞上具有PoIFN
‑
α和PoIL
‑
2蛋白的双重生物学活性。但是，由于包涵体蛋白经过复杂的变性复性后会造成大量蛋白损失，且生物学活性较低，这使得重组猪α干扰素/白介素2融合蛋白的制备效率和应用价值明显降低，极大地限制了其应用。本专利技术通过对PoIFN
‑
α
‑
linker
‑
PoIL
‑
2嵌合基因进行可溶性改造，实现重组猪α干扰素/白介素2融合蛋白的可溶性表达。经测定重组猪α干扰素/白介素2融合蛋白在不同细胞上对多种病毒均具有抑制作用，表明该重组蛋白具有广谱抗病毒活性，可对猪病毒性疾病起到很好的预防作用。
[0007]具体地，本专利技术提供以下技术方案
[0008]第一方面，本专利技术提供重组猪α干扰素/白介素2融合蛋白的编码基因，所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0009]SEQ ID NO.1所示序列具体如下：
[0010]TGTGACCTGCCTCAGACCCACTCCCTGGCCCACACCCGCGCCCTGAGACTGCTGGCCCAGATGAGAAGGATTTCCCCATTTAGCTGCCTGGATCACAGAAGAGACTTCGGCAGCCCTCACGAAGCCTTCGGCGGAAACCAGGTGCAGAAGGCCCAGGCCATGGCCCTGGTGCACGAGATGCTGCAGCAGACGTTCCAGCTGTTTAGCACTGAGGGATCCGCCGCCGCCTGGAACGAAAGCCTCCTGCACCAGTTCTGCACCGGCCTGGACCAGCAGCTGCGCGATCTGGAGGCCTGCGTGATGCAGGAGGCCGGACTGGAGGGGACGCCCCTGCTGGAGGAGGATTCCATTCTGGCCGTGAGGAAATATTTCCACCGGCTGACCTTATACCTGCAGGAGAAGTCCTACTCCCCTTGCGCGTGGGAGATCGTGAGGGCCGAAGTGATGAGATCCTTCAGCAGCAGCACCAACCTCCAGGACAGACTGAGAAAAAAGGAGGGCGGCGGCGGCAGCGGAGGCGGCGGCTCCGGCGGCGGGGGCAGCGCCCCCACCAGCTCCAGTACCAAAAACACCAAGAAGCAGCTGGAGCCCCTGCTGCTGGATCTGCAGCTCCTGCTGAAGGAAGTGAAAAACTACGAGAACGCCGATCTGTCTCGCATGCTGACTTTCAAGTTCTATATGCCTAAGCAGGCCACAGAGCTGAAGCATCTGCAGTGCCTGGTGGAGGAGCTGAAGGCCCTGGAGGGCGTCCTGAACCTGGGCCAGAGTAAAAACTCTGACTCCGCCAACATCAAAGAAAGCATGAACAACATCAACGTGACCGTGCTGGAGCTGAAGGGCAGCGAGACCTCCTTCAAGTGCGAGTATGACGACGAGACCGTGACCGCCGTGGAATTCCTGAACAAGTGGATCACCTTTTGCCAGTGCATCTACTCAACACTGACT。
[0011]核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的编码基因为本专利技术经特异的密码子优化得到的编码重组猪α干扰素/白介素2融合蛋白的基因，该编码基因能够实现在大肠杆菌中高效、可溶性地表达重组猪α干扰素/白介素2融合蛋白，表达的重组猪α干扰素/白介素2融合蛋白具有PoIFN
‑
α和PoIL
‑
2蛋白的双重生物学活性，且生物学活性较包涵体蛋白明显提高。
[0012]本专利技术中，重组猪α干扰素/白介素2融合蛋白是由猪α干扰素与猪白介素2经柔性linker连接得到，其中，柔性linker为(G4S)3。
[0013]第二方面，本专利技术提供一种表达盒，所述表达盒含有启动子和以上所述的重组猪α干扰素/白介素2融合蛋白的编码基因。
[0014]对于启动子的种类和序列，本专利技术没有特别限制，所有能够启动基因转录的启动子均可选用。
[0015]第三方面，本专利技术提供一种重组载体，所述载体含有以上所述的重组猪α干扰素/白介素2融本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.重组猪α干扰素/白介素2融合蛋白的编码基因，其特征在于，所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.一种表达盒，其特征在于，所述表达盒含有启动子和权利要求1所述的重组猪α干扰素/白介素2融合蛋白的编码基因。3.一种重组载体，其特征在于，所述载体含有权利要求1所述的重组猪α干扰素/白介素2融合蛋白的编码基因。4.根据权利要求3所述的重组载体，其特征在于，所述载体为含有权利要求1所述的重组猪α干扰素/白介素2融合蛋白的编码基因的pET
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32a载体。5.一种重组菌，其特征在于，所述重组菌含有权利要求1所述的重组猪α干扰素/白介素2融合蛋白的编码基因或权利要求2所述的表达盒或权利要求3或4所述的重组载体。6.根据权利要求5所述的重组菌，其特征在于，所述重组菌为大肠杆菌。7.权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：闫若潜，班付国，杨海波，冯桂丹，柴茂，刘影，刘梅芬，王淑娟，马震原，赵雪丽，谢彩华，郭育培，王东方，王翠，王华俊，朱前磊，刘敏，
申请(专利权)人：河南省动物疫病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：