GABA激动剂和拮抗剂影响造血干细胞和巨核系祖细胞的分化制造技术

据证实，GABRR1在造血干细胞(HSC)和巨核系祖细胞(MkP)的亚群上表达。抑制GABRR1便能够抑制MkP分化和血液中血小板数量的减少。GABRR1过表达或用激动剂处理能显著促进MkP的生成和巨核细胞的生长。生成和巨核细胞的生长。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】GABA激动剂和拮抗剂影响造血干细胞和巨核系祖细胞的分化
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本专利申请案主张于2019年3月13日提交的编号为62/846,865的美国临时专利申请案的优先权，上述专利申请以引用方式全文并入本文中。

技术介绍

[0003]γ
‑
氨基丁酸(GABA)是脊椎动物中枢神经系统中主要的抑制性神经递质，在神经发生中发挥作用。此外，GABA还存在于各种外周组织和器官中，例如肠、胃等。然而，迄今为止，从未报告过GABA受体的细胞类型特异性表达，也未报告过其在造血干细胞和祖细胞(HSPC)中的解剖学分布和功能特性。
[0004]HSC能够逐步产生多种不同的细胞类型。HSC来源巨核系
‑
红系祖细胞(MEP)属于双能祖细胞，可分化为MkP(产生血小板)或红系祖细胞(EP；产生红细胞)。补充MkP是治疗严重血小板减少症以快速恢复患者凝血功能的颇有前景的治疗策略。因此，鉴定造血过程中促进MkP生成和分化的调节剂已成为一个重要课题。

技术实现思路

[0005]本专利技术提供了用于在体内和体外调节巨核细胞生成的组合物和方法。在一些实施例中，所述方法使得造血干细胞(HSC)和祖细胞来源巨核细胞和血小板的产生得到增强。HSC来源巨核系
‑
红系祖细胞(MEP)属于双能祖细胞，可分化为巨核系祖细胞(MkP；产生血小板)或红系祖细胞(EP；产生红细胞)。出人意料的是，MkP细胞表达GABAρ受体GABRR1，并通过增加骨髓中或体外祖细胞中MkP细胞的产生量来响应GABRR1激动剂。
[0006]在一些实施例中，提供了用于使MkP细胞、巨核细胞和血小板中的一种或更多种的产生得到增强的方法，所述方法包含：使包含造血干细胞(HSC)和祖细胞的细胞群体与能够有效增加MkP细胞、巨核细胞和/或血小板产生量的一定剂量的GABRR1激动剂接触。在一些实施例中，所述接触在体内进行。在一些此类实施例中，患有血小板减少症或易发展为血小板减少症的受试者与有效剂量和方案的GABRR1激动剂接触以增加巨核细胞以及巨核细胞来源血小板的产生量。给药后，可以监测所述个体的血小板减少症的临床指标。
[0007]在一些实施例中，提供了用于产生巨核谱系细胞的体外培养系统，例如，MEP、MkP、巨核细胞等。所述培养系统包含能够在包含有效浓度的GABRR1激动剂的培养基中产生巨核谱系细胞的造血干细胞或祖细胞，例如，HSC、MEP等。
[0008]用于本专利技术的方法中的GABRR1激动剂包括但不限于4
‑
氨基丁酸(GABA)、反式
‑4‑
氨基巴豆酸(TACA)和蝇覃醇。在一些实施例中，所述激动剂对GABA rho受体具有选择性，例如，GABRR1，例如TACA；顺式
‑4‑
氨基
‑
巴豆酸(CACA)、(+)
‑
顺式
‑2‑
(氨基甲基)环丙烷羧酸(CAMP)；(
±
)
‑
反式
‑2‑
(氨基甲基)环丙烷羧酸(TAMP)；反式
‑2‑
甲基
‑4‑
氨基巴豆酸(2
‑
MeTACA)；3
‑
(氨基甲基)
‑1‑
氧代
‑1‑
羟基
‑
磷杂环戊烷(3
‑
AMOHP)；3
‑
(氨基)
‑1‑
氧代
‑1‑
羟基
‑
磷杂环戊烷(3
‑
AOHP)；3
‑
(胍基)
‑1‑
氧代
‑1‑
羟基
‑
磷杂环戊烷(3
‑
GOHP)；4
‑
氨基环戊
‑1‑
烯甲酰胺(4
‑
ACPAM)；4
‑
氨基
‑
N
‑
羟基环戊
‑1‑
烯甲酰胺(4
‑
ACPHA)；等等。
[0009]应当理解，虽然已结合本专利技术的优选具体实施例描述了本专利技术，但上述描述以及后续示例仅用于说明之目的，而非限制本专利技术的范围。本专利技术范围内的其他方面、优点和修改对于本专利技术所属领域的技术人员来说是显而易见的。
附图说明
[0010]结合附图阅读以下详细说明，可获得对本专利技术最全面的理解。需要强调的是，根据惯例，附图的各种特征并非是按比例绘制的。相反，为了清楚起见，可任意扩大或缩小各个特征的尺寸。附图中包括以下图示：
[0011]图1A
‑
1K.图1A Gabrr1在小鼠造血系统中的表达和功能。Gabrr1在Gene Expression Commons不同小鼠造血群体中的表达。图1B Gabrr1在不同小鼠HSPC群体中的基因表达分析(通过实时PCR进行)。显示的数据是同一组三次平行测定得到的平均值
±
SD，并且是至少三项独立实验的代表性数据。图1C Gabrr1在小鼠骨髓来源HSPC中的表达分析(通过多色流式细胞术进行)。数字表示Gabrr1+细胞所占百分比。显示的数据是n＝6只小鼠的代表性数据。图1D用于利用膜片钳记录GABA诱发电流的GR+MkP的代表性图像。图1E通过在不同膜电位(起始膜电位为
‑
80mV，步长为20mV)下钳制的GR+和GR
‑
MkP中应用1mM GABA诱导的代表性电流迹线。图1F
‑
1G.GR+和GR
‑
MkP(F)以及GR+和GR
‑
HSC的最大电流密度和细胞电容的汇总图。图1G
‑
1H GR+MkP和GR+HSC峰值电流密度的I
‑
V曲线(x轴显示钳制电压；y轴显示电流密度(峰值电流/细胞电容))。图1I.免疫染色分析显示GAD65+GAD67、GABA、vGAT、H2和突触素(SP4)在生长板/骨骺中的表达。J).不同部位的小鼠组织切片用五色染法染色。图1K.通过实时PCR分析纯化小鼠GR+和GR
‑
HSC和MkP中的HSC和MkP相关基因。图1F和1G中所示数据是平均值
±
SEM。已分析的细胞数目请见条形图。**P<0.01。比例尺，20μM(图1D)，50μM(I中图)，100μM(图1I左图和右图、图1J下图)，200μM(J上图)。
[0012]图2A
‑
2G.Gabrr1活化或失活对小鼠HSPC分化的影响。图2A将GR+HSC(n＝8只小鼠)或GR
‑
HSC(n＝7只小鼠)移植到原代受体体内后16周时的嵌合百分比。每一列代表一只单独的小鼠。图2B骨髓细胞、B细胞、T细胞和NK细胞在原代移植中的平均供体谱系贡献。误差条表示S.D.。图2C来自供体小鼠本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于调节造血干细胞或祖细胞来源巨核谱系细胞的产生的方法，所述方法包含：使造血干细胞或祖细胞与有效剂量的γ
‑
氨基丁酸rho受体(GABRR)调节剂接触。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述GABRR受体是GABRR1。3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述巨核谱系细胞是巨核系祖细胞(MkP)、巨核细胞和血小板中的一种或更多种。4.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的方法，其中所述造血干细胞或祖细胞是造血干细胞(HSC)、多能祖细胞(MPP)、共同髓系祖细胞(CMP)和巨核系
‑
红系祖细胞(MEP)中的一种或更多种。5.根据权利要求1
‑
4中任一项所述的方法，其中所述调节剂是激动剂，并且所述巨核谱系细胞的产生得到增强。6.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱芳芳，欧文，
申请(专利权)人：小利兰，
类型：发明
国别省市：