可溶性人源IL-6Rα蛋白的制备方法技术

本发明专利技术提供了一种可溶性人源IL

【技术实现步骤摘要】
可溶性人源IL
‑
6R
α
蛋白的制备方法


[0001]本专利技术涉及分子生物学以及生物工程领域，具体涉及一种可溶性人源IL
‑
6Rα蛋白的制备方法。

技术介绍

[0002]早期研究发现IL
‑
6可以作为B细胞刺激分化因子，诱导B细胞分泌免疫球蛋白。目前已公认IL
‑
6是一种多效性的细胞因子，参与多种细胞的生长与分化，且可以有效调节机体的免疫反应，尤其在急性期反应中有重要作用。IL
‑
6的多效性作用主要体现在以下几个方面：在肝急性期反应中，IL
‑
6可以诱导C反应蛋白、补体蛋白、血清淀粉样蛋白生成，促使肝转移，其次在血管中IL
‑
6可以导致血管内皮生长因子过量生成，从而使血管渗透性增强。在适应性免疫应答中，IL
‑
6参与了CD4+T细胞的特异性分化，包括Th17细胞分化增强，Treg细胞分化减弱，导致这两者的比例失调，引起自身免疫性疾病。正是由于IL
‑/>6的多效性，IL本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种可溶性人源IL
‑
6Rα蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：A.以人的cDNA文库为模板，克隆扩增出含有线性化pTT5载体同源序列的可溶性人源IL
‑
6Rα基因片段；B.利用Gibson assembly将所述可溶性人源IL
‑
6Rα基因片段组装到线性化pTT5载体，构建载体pTT5
‑
H
‑
IL
‑
6Rα
‑
Fc；C.将所述载体pTT5
‑
H
‑
IL
‑
6Rα
‑
Fc利用PEI瞬时转染入HEK293F细胞，之后大量悬浮培养HEK293F细胞；D.收集培养基上清，利用蛋白A柱亲和层析提取培养基上清中的融合蛋白H
‑
IL
‑
6Rα
‑
Fc，0.1M乙酸梯度洗脱下来，进行TEV酶切过夜，再经蛋白A
‑
Ni
‑
NTA流穿得到可溶性人源IL
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6Rα蛋白。2.根据权利要求1所述可溶性人源IL
‑
6Rα蛋白的制备方...

【专利技术属性】
技术研发人员：李博峰，钱娇娇，金腾川，魏华兴，
申请(专利权)人：中国科学技术大学，
类型：发明
国别省市：