一种氟虫腈快速定量检测试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术属于检测技术领域，具体公开了一种氟虫腈快速定量检测试剂盒及检测方法，其包括纳米等离子共振传感检测板和检测试剂；检测板是将纳米等离子共振传感芯片布置于无底孔板的孔中而制得，且检测板的每个样品孔包被有氟虫腈抗原；检测试剂包括氟虫腈标准母液、氟虫腈金标抗体、检测缓冲液和氟虫腈提取净化试剂。检测时，将已知浓度的氟虫腈标准溶液和经前处理的待测样品溶液，分别加入样品孔中；加入金标抗体反应；根据加入金标抗体前后，特定波长的OD变化值，绘制标准曲线，实现对氟虫腈的定量检测。本发明专利技术试剂盒可以实现对氟虫腈快速、准确、高通量地定量检测，提高检测效率，为食品安全生产、基层监管、大型活动保障等提供有力技术支撑。有力技术支撑。有力技术支撑。

【技术实现步骤摘要】
一种氟虫腈快速定量检测试剂盒及检测方法


[0001]本专利技术属于检测
，更具体地，涉及一种氟虫腈快速定量检测试剂盒及检测方法。

技术介绍

[0002]氟虫腈是一种含氟吡唑类广谱性杀虫剂，活性高，被世界卫生组织列为“对人类有中度毒性”的化学品。氟虫腈及其代谢物在农产品中超标情况较为严重。在食品安全领域，对氟虫腈这种农药小分子及其代谢物残留的检测，常用的标准方法一般为气相色谱
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质谱联用法或液相色谱
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质谱联用法。上述方法虽然稳定性好、重复性强、准确率高，但是需要昂贵的仪器设备、专业的操作人员以及复杂的前处理过程，对环境不友好且无法满足现场快检的要求。
[0003]目前针对氟虫腈应用较多的快检方法包括酶联免疫法、试纸条法等。它们各自的技术局限也很明显：酶联免疫法虽然检出限较低也较为准确，但是整个检测过程较为繁琐，耗时较长，大约需2小时；试纸条操作简单，但检出限较高，且一般只能定性，无法精确定量。

技术实现思路

[0004]针对现有技术的缺陷，本专利技术的目的在于提供一种氟虫腈快速定量检测试剂盒及检测方法，降低快检方法的检出限，提高灵敏度，实现对不同食品基质中小分子氟虫腈的快速、准确的定量检测。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供了一种氟虫腈快速定量检测试剂盒，其特征在于：包括具有多个样品孔的纳米等离子共振传感检测板和检测试剂；
[0006]所述纳米等离子共振传感检测板是将纳米等离子共振传感芯片布置于无底孔板的孔中而制得，且所述纳米等离子共振传感检测板的每个样品孔包被有氟虫腈抗原；
[0007]所述检测试剂包括氟虫腈标准母液、氟虫腈金标抗体、检测缓冲液和氟虫腈提取净化试剂。
[0008]优选地，所述纳米等离子共振传感芯片具有周期性纳米孔结构，且其表面依次沉积有2nm～20nm钛层和50nm～120nm金层。
[0009]优选地，所述氟虫腈金标抗体是由纳米金颗粒标记氟虫腈抗体而制得，所述纳米金颗粒的粒径为15nm～80nm。
[0010]优选地，所述检测缓冲液包含pH＝6.5～8.0的磷酸缓冲液。
[0011]进一步优选地，所述检测缓冲液还包含表面活性剂S9和EDTA。
[0012]进一步优选地，所述表面活性剂S9的质量百分比浓度为0.05％～1％，所述EDTA的摩尔浓度为0～2.5mM。
[0013]优选地，所述氟虫腈提取净化试剂包括乙腈、氯化钠、无水硫酸钠、无水硫酸镁、N
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丙基乙二胺(PSA)、HC
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C18型吸附剂(C18)和石墨化炭黑(GCB)。
[0014]按照本专利技术的另一方面，提供了一种氟虫腈快速定量检测方法，其包括如下步骤：
[0015]S1、用检测缓冲液稀释氟虫腈标准母液以制备梯度浓度的氟虫腈标准溶液，将待测样品经提取净化处理制备待测样品溶液；
[0016]S2、将所述梯度浓度的氟虫腈标准溶液和待测样品溶液分别加入纳米等离子共振传感检测板的样品孔中，检测各样品孔在特定波长下的光密度，将其设定为起点光密度；其中，所述纳米等离子共振传感检测板是将纳米等离子共振传感芯片布置于无底孔板的孔中而制得，且所述纳米等离子共振传感检测板的每个样品孔包被有氟虫腈抗原；
[0017]S3、向加有氟虫腈标准溶液和待测样品溶液的样品孔中分别加入氟虫腈金标抗体，振荡反应，检测反应后各样品孔在所述特定波长下的光密度，将其设定为终点光密度；
[0018]S4、获得各样品孔中所述起点光密度与所述终点光密度的差值，根据检测梯度浓度的氟虫腈标准溶液得到的光密度差值拟合标准曲线方程，将检测待测样品溶液得到的光密度差值代入所述标准曲线方程计算，获得待测样品中的氟虫腈含量。
[0019]优选地，所述提取净化处理过程为：向均质化的待测样品中加入乙腈，振荡混匀；加入氯化钠和无水硫酸钠，涡旋混合；离心后取上清液，再加入无水硫酸镁、N
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丙基乙二胺、HC
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C18型吸附剂和石墨化炭黑，涡旋混合；再次离心后取上清液，干燥，最后用所述检测缓冲液复溶。
[0020]优选地，所述特定波长为581nm和605nm中的至少一个。
[0021]优选地，各所述样品孔中氟虫腈抗原和氟虫腈金标抗体的质量比为(2～8):1。
[0022]按照本专利技术的另一方面，提供了所述氟虫腈快速定量检测试剂盒在检测氟虫腈中的应用。
[0023]优选地，所述氟虫腈为食品中的氟虫腈。
[0024]进一步优选地，所述食品包括蔬菜、水果、肉类、禽蛋中的至少一种。
[0025]总体而言，通过本专利技术所构思的以上技术方案与现有技术相比，具有以下有益效果：
[0026](1)本专利技术氟虫腈快速定量检测试剂盒将纳米等离子共振传感技术应用于检测氟虫腈，消耗试剂少，操作方法简单，省时省力，且检测具有高特异性、高灵敏度和高准确度，适合于大批量生产。
[0027](2)本专利技术试剂盒利用纳米金标记抗体可特异性结合氟虫腈抗原或待测样品中的氟虫腈分子，放大检测信号，提高检测的灵敏度。
[0028](3)本专利技术试剂盒通过对检测缓冲液酸碱度、成分的优化，增强阴性和阳性的信号差异，进一步降低检出限，提高氟虫腈检测的灵敏度和准确度。
[0029](4)本专利技术定量检测氟虫腈的方法，相比现有的酶联免疫法和试纸条法，检测过程更加简便易行，耗时短；同时与传统的表面等离子共振(surface plasmon resonance，SPR)技术检测需要较大型的特殊仪器(例如Biacore公司的仪器)相比较，本专利技术检测方法利用普通酶标仪即可实现，设备要求低，本专利技术检测方法大大降低了检测成本。
[0030](5)本专利技术通过对待测样品的提取净化处理设计，使得提取及净化待测样品中氟虫腈的效果好，且处理过程简单，适用于蔬菜、水果、肉类、禽蛋等多类食品，本专利技术检测方法应用范围广。
[0031](6)本专利技术应用纳米等离子共振传感技术检测氟虫腈，灵敏度高，检出限低至0.03μg/kg，可以实现对氟虫腈快速、准确、高通量地定量检测，对该项技术在食品安全中小分子
检测方面的推广应用具有创造性的意义。
附图说明
[0032]图1为本专利技术实施例1提供的基于纳米等离子共振传感芯片的氟虫腈快速定量检测方法的示意图；
[0033]图2为本专利技术实施例2中对检测缓冲液pH优化的实验结果图；
[0034]图3为本专利技术实施例2中对检测缓冲液中表面活性剂种类优化的实验结果图；
[0035]图4为本专利技术实施例2中对检测缓冲液中表面活性剂S9浓度优化的实验结果图；
[0036]图5为本专利技术实施例2中对检测缓冲液中EDTA浓度优化的实验结果图；
[0037]图6为本专利技术实施例2中对检测缓冲液中离子强度(NaCl浓度)优化的实验结果图；
[0038]图7为本专利技术实施例4中用梯度浓度的氟虫腈标准溶液检测的OD变化本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种氟虫腈快速定量检测试剂盒，其特征在于：包括具有多个样品孔的纳米等离子共振传感检测板和检测试剂；所述纳米等离子共振传感检测板是将纳米等离子共振传感芯片布置于无底孔板的孔中而制得，且所述纳米等离子共振传感检测板的每个样品孔包被有氟虫腈抗原；所述检测试剂包括氟虫腈标准母液、氟虫腈金标抗体、检测缓冲液和氟虫腈提取净化试剂。2.根据权利要求1所述的氟虫腈快速定量检测试剂盒，其特征在于：所述纳米等离子共振传感芯片具有周期性纳米孔结构，且其表面依次沉积有2nm～20nm钛层和50nm～120nm金层。3.根据权利要求1所述的氟虫腈快速定量检测试剂盒，其特征在于：所述氟虫腈金标抗体是由纳米金颗粒标记氟虫腈抗体而制得，所述纳米金颗粒的粒径为15nm～80nm。4.根据权利要求1所述的氟虫腈快速定量检测试剂盒，其特征在于：所述检测缓冲液包含pH＝6.5～8.0的磷酸缓冲液。5.根据权利要求4所述的氟虫腈快速定量检测试剂盒，其特征在于：所述检测缓冲液还包含表面活性剂S9和EDTA。6.根据权利要求5所述的氟虫腈快速定量检测试剂盒，其特征在于：所述表面活性剂S9的质量百分比浓度为0.05％～1％，所述EDTA的摩尔浓度为0～2.5mM。7.一种氟虫腈快速定量检测方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、用检测缓冲液稀释氟虫腈标准母液以制备梯度浓度的氟虫腈标准溶液，将待测样品经提取净化处理制备待测样品溶液；S2、将所述梯度浓度的氟虫腈标准溶...

【专利技术属性】
技术研发人员：冀威昊，刘钢，周陶鸿，黄丽萍，曾少奇，彭青枝，龚蕾，李诗瑶，冯灏，皮江一，
申请(专利权)人：量准武汉生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：