一种自体静脉血细胞激活剂的制备方法技术

本申请提供了一种自体静脉血细胞激活剂的制备方法，通过将血液细胞离心、浓缩，分离，在人血小板裂解物的基础上，通过优化的静脉自体血细胞激活剂激活，能够产生获得高浓度、高活性的外泌青春素，具有细胞粘合功能的蛋白质、含有高浓度生长因子、免疫调节因子、细胞激活因子、细胞活化因子、细胞迁移因子、细胞增殖因子、血管新生因子、细胞再生修复抗衰因子、纤维蛋白、纤连蛋白和玻连蛋白等粘附因子，细胞再生修复抗衰因子，细胞信号转导和协同调节因子等。子等。

【技术实现步骤摘要】
一种自体静脉血细胞激活剂的制备方法


[0001]本申请涉及医药
，尤其涉及到一种自体静脉血细胞激活剂的制备方法。

技术介绍

[0002]Platelet
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rich plasma中文名为“高浓度血小板血浆”，每立方毫米高浓度血小板血浆里含有约一百万单位的血小板。人体的血小板在高浓度的状态下，能够产出具有细胞粘合功能的蛋白质，并且当pH值从7.0
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7.2降到6.5
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6.7时，添加适当的氯化钙，可以促进血小板大量分泌有促进伤口、组织愈合及细胞再生的9种生长因子，所以高浓度血小板血浆也叫做富含生长因子血浆。
[0003]人血小板裂解物是人细胞培养中胎牛血清的替代补充物。其通常出于实验和临床目的而用于补充人间充质干细胞培养中的基础培养基。与传统使用的胎牛血清相比，人血小板裂解物是有利的，因为其不含异源物，并因此适合于细胞治疗的治疗性产品。人血小板裂解物呈现为浑浊的浅黄色液体，其获自通过冷冻/解冻循环对人血小板进行的裂解。凭借血小板的生理组织修复功能，血小板是多种生物活性分子的丰富来源，所述生物活性分子例如生长因子、细胞因子、其他代谢物和细胞外囊泡。在储存和裂解期间，血小板释放大量生长因子和尺寸为约40至1000nm的细胞外囊泡。这些分泌的囊泡被称为人血小板裂解物来源细胞外囊泡。
[0004]在洁净室条件下获得的人血小板裂解物被认为是用于药物制造的“人源原料”。虽然人血小板裂解物在干细胞培养中的价值是公认的，但人血小板裂解物中单因子的特性尚未得到详细分析。虽然来自人血小板裂解物的细胞外囊泡尚未被认为具有临床意义，但来源于不同干细胞的细胞外囊泡越来越多地成为临床和治疗兴趣的焦点，通常称为干细胞外泌体。已知细胞外囊泡在细胞之间、器官之间和甚至生物体之间传递信息，并且已经在多种体液中检测到。外排体和微泡构成最显著描述的细胞外囊泡种类。其被磷脂膜包围，并且包含以下的细胞类型特异性组合：蛋白质，包括酶、生长因子、受体和细胞因子；以及脂质；编码和非编码RNA、mRNA、微RNA或甚至少量DNA；以及代谢物。外排体由于平均尺寸为100至1000nm，微泡代表通过质膜向外出芽形成的一类较大细胞外囊泡。
[0005]神经干细胞来源细胞外囊泡被认为与宿主的免疫系统相互作用以介导神经保护和免疫调节，神经保护和神经再生也可由从神经系统的驻留胶质细胞释放的细胞外囊泡介导。从诱导多能干细胞分离的细胞外囊泡，其将RNA和蛋白质转移到缺血性心肌中的心脏细胞中产生治愈能力。因此，诱导多能干细胞和细胞外囊泡技术的结合可能在未来提供新的临床治疗途径。

技术实现思路

[0006]本申请采用的技术方案如下：
[0007]一种自体静脉血细胞激活剂的制备方法，由第一部分、第二部分和第三部分组成，第一部分是淋巴细胞和干细胞分离液、血小板保护剂，用于防止血液自溶和抗凝、离心分离
和滤除红细胞；第二部分是血小板激活剂，包括氯化钙终浓度为40m/m,牛凝血酶终浓度为100Uml，蛋白激酶A微量；将第一部分和第二部分按1：10加入准备好的样本中；第三部分是酸性溶液，用于将样本pH值降至6.5～6.7。
[0008]进一步地，一种自体静脉血细胞激活剂的制备方法，自体血细胞激活剂能够最大限度富集淋巴细胞、免疫细胞、干细胞和血小板，通过自体血细胞激活剂刺激产生大量外泌体，富集细胞外囊泡的尺寸为10～1000nm，细胞外囊泡包含生物因子、遗传物质、mRNA、微RNA、少量DNA、脂质以及蛋白质。
[0009]进一步地，一种自体静脉血细胞激活剂的制备方法，自体血细胞激活剂保存在37℃培育10～30分钟，使自体血细胞外泌青春素。
[0010]进一步地，一种自体静脉血细胞激活剂的制备方法，自体血细胞激活剂适于静脉内施用或输注、腹膜内注射、皮下注射、骨内注射、脑室内注射、肌内注射、眼内注射，自体血细胞激活剂也适于表面施用。
[0011]本申请的有益效果在于：
[0012]我们采用血小板激活剂，可以大大延长血小板的作用时间，依托国内外基因与细胞治疗研究多年的临床经验和科研成果，采用自体血液，经过自主知识产权外泌素青春制备和纯化技术，获得高浓度、高活性的外泌青春素，并通过基因检测、功能医学检测、皮肤检测、量子检测、面诊等了解个人体质和皮肤状况，使其更具有靶向性和个性化，通过调节人体细胞内环境将外泌青春素的功能性和作用进一步加强，达到快速修复衰老皮肤和恢复器官活力的作用。
[0013]来自于自体的细胞活性和青春素活性成份，能够强力修复、再生、抗衰、抗老化等发挥关键且重要作用，强力除皱、填充祛疤、优化肤质、深层抗衰、淡化色斑、安全抗敏、胸部细胞填充、臀部细胞填充、私密抗衰、器官组织修复、让皮肤细嫩滑、白透亮，重建青春状态。
具体实施方式
[0014]下面将结合本申请实施例，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。
[0015]实施例1
[0016]一种自体静脉血细胞激活剂的制备方法，由第一部分、第二部分和第三部分组成，第一部分是淋巴细胞和干细胞分离液、血小板保护剂，防止血液自溶和抗凝，离心分离，滤除红细胞；第二部分是血小板激活剂，包括氯化钙终浓度为40m/m,牛凝血酶终浓度为100Uml，蛋白激酶A微量；将第一部分和第二部分按1：10加入准备好的样本中；第三部分是酸性溶液，用于将样本pH值降至6.5～6.7，在37℃培育10～30min。
[0017]自体血细胞激活剂可最大限度富集淋巴细胞、免疫细胞、干细胞和血小板，通过自体血细胞激活剂刺激产生大量外泌体，富集细胞外囊泡：尺寸为10至1000nm，特别地尺寸为50至200nm，优选70至140nm，细胞外囊泡包含生物因子、遗传物质、mRNA、微RNA、少量DNA、脂质以及蛋白质，包括转录因子、细胞因子、生长因子等。
[0018]抗凝剂选择天津灏洋最新抗凝剂及医用真空采血抗凝管15ml和50ml专用于血细
胞分离激活自体静脉血细胞，生长因子、细胞因子等浓度明显高于正常血液6
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10倍。
[0019]根据不同的临床问题调节激活时机、温度、激活时间，配合其他的激活方式，加入我们特制的细胞激活剂，对免疫系统无危害，无毒无害、安全性高。
[0020]激活剂保存在37℃培育10～30分钟，使自体血细胞外泌青春素，主要有免疫调节因子、细胞保护因子、细胞激活因子、细胞活化因子、细胞迁移因子、细胞增殖因子、血管新生因子、纤维蛋白、纤连蛋白和玻连蛋白等粘附因子，细胞再生修复抗衰因子，细胞信号转导和协同调节因子等。
[0021]淋巴细胞分离液，提高淋巴细胞浓度或自体干细胞浓度，治疗过敏性皮肤病和特殊皮肤问题。
[0022]自体血细胞激活剂适于静脉内施用或输本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种自体静脉血细胞激活剂的制备方法，其特征在于：由第一部分、第二部分和第三部分组成，第一部分是淋巴细胞和干细胞分离液、血小板保护剂，用于防止血液自溶和抗凝、离心分离和滤除红细胞；第二部分是血小板激活剂，包括氯化钙终浓度为40m/m,牛凝血酶终浓度为100Uml，蛋白激酶A微量；将第一部分和第二部分按1：10加入准备好的样本中；第三部...

【专利技术属性】
技术研发人员：张江平，
申请(专利权)人：张江平，
类型：发明
国别省市：