一种基于表面增强拉曼光谱的快速检测尿中溴敌隆的方法技术

本发明专利技术涉及一种基于表面增强拉曼光谱的快速检测尿中溴敌隆的方法，本发明专利技术的方法只需将待测尿液加入纳米基底中，采用便携式拉曼光谱仪测试拉曼信号，根据校准曲线，可以测定待检测尿液中的溴敌隆的含量，测试方法高效、快速、简便，并且成本低、检测准确、灵敏度高，实现了现场快速分析，对病人实施有针对性的及时救治提供了保障，检测限低，尿中溴敌隆检出限为3.21ppb，重现性高。重现性高。

【技术实现步骤摘要】
一种基于表面增强拉曼光谱的快速检测尿中溴敌隆的方法

：
[0001]本专利技术涉及一种基于表面增强拉曼光谱的快速检测尿中溴敌隆的方法，属于分析化学


技术介绍
：
[0002]溴敌隆化学名是3
‑
(4
‑
羟基
‑3‑
香豆素)
‑3‑
苯基
‑1‑
(对溴联苯基)
‑
丙醇
‑
1，属4
‑
羟基双香豆素类抗凝血杀鼠剂。它通过竞争性地抑制维生素K的作用，抑制肝脏产生凝血酶原及凝血因子，提高毛细血管通透性和脆性，造成鼠内出血死亡。随着灭鼠剂的大量施用，鼠药不可避免地残留在食物中、被误服、自服或投毒。近年来，此类灭鼠剂造成中毒的事件时有发生，溴敌隆是生物样品中检出频次最高的抗凝血鼠药，严重危害人民身体健康与生命安全。
[0003]目前针对溴敌隆中毒的检测技术远不能满足临床及突发中毒事件处置的实际需求。现有的突发中毒应急处置配套仪器及方法主要针对空气、水和食品中部分毒物的检测，缺少针生物样品的快速检测方法，也无法实现快速检测溴敌隆等难挥发的有机类毒物。同时，多数医疗机构针对病人血尿样品中毒物的检测能力也非常有限，远不能满足实际需求。
[0004]目前对尿中溴敌隆的检测方法主要为液相色谱
‑
质谱联用法和液相色谱法，由于尿液基质复杂，需要繁琐、耗时的样品前处理过程，导致检测难度高、检测效率低、不能实现中毒物质的快速识别分析。现有检测方法的主要步骤包括：首先，将有机试剂与尿液按一定比例进行充分混合、静置或离心使混合液分层，将尿液中的溴敌隆提取至有机试剂中，然后吸取有机相转移至新的试管中进行氮吹，待氮吹至近干时，用液相色谱
‑
质谱联用法或液相色谱法的流动相溶解残留物，将溶解液过滤后用实验室配置的液相色谱
‑
质谱仪或液相色谱仪进行分析。整个前处理过程操作繁琐、耗时，检测设备不能兼顾现场，不能实现快速分析，阻碍了对病人实施有针对性的及时救治。
[0005]尿中毒物的快速识别是正确诊断和及时救治的重要参考依据，因此，建立高效、可靠、简便的生物样品中的毒物快速检测方法，为现场及院内实施临床治疗和判断预后具有十分重要的意义。

技术实现思路
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[0006]针对现有技术的不足，本专利技术提供一种基于表面增强拉曼光谱的快速检测尿中溴敌隆的方法。
[0007]本专利技术建立的高效、快速、简便的尿中溴敌隆的检测方法，能够解决目前检测方法面临的时效问题，对病人的及时救治具有重要意义。
[0008]本专利技术是通过如下技术方案实现的：
[0009]一种基于表面增强拉曼光谱的快速检测尿中溴敌隆的方法，包括步骤如下：
[0010]1)功能基底的制备：利用还原法制备纳米金包银(Au@Ag NPs)胶体溶液作为功能基底；
[0011]2)溴敌隆标准溶液的配制：将溴敌隆固体标准物质，用乙醇配制成浓度为2mg/mL的储备溶液，然后用水或尿液稀释配成不同浓度的溴敌隆标准溶液，溴敌隆标准溶液浓度为10ppb
‑
2000ppb；
[0012]3)标准曲线的测定：溴敌隆标准溶液与碘化钾溶液、聚沉盐溶液混合均匀进行聚沉反应1
‑
5min，得标准混合液，将标准混合液置于石英比色皿中，用便携式拉曼光谱仪进行检测，拉曼检测的激光波长为785nm，激光强度500mW,积分时间15s，扫描拉曼光谱并记录SERS的特征信号强度，将1001cm
‑1处的SERS信号强度与对应的溴敌隆标准溶液浓度的对数值作图，得到标准曲线；
[0013]4)将纳米金包银(Au@Ag NPs)胶体溶液与碘化钾溶液、聚沉盐溶液、待检测尿液混合均匀进行聚沉1
‑
5min，得待测混合液，将待测混合液转移至石英比色皿中，采用步骤3)的拉曼检测条件测试拉曼信号，通过1001cm
‑1处的SERS信号的大小，根据校准曲线，测定待检测尿液中的溴敌隆的含量。
[0014]根据本专利技术优选的，步骤1)中纳米金包银(Au@Ag NPs)的粒径为45
‑
55nm。
[0015]进一步优选的，步骤1)中纳米金包银(Au@Ag NPs)的粒径为50nm。
[0016]根据本专利技术优选的，步骤1)中，纳米金包银(Au@Ag NPs)按如下方法制备得到：
[0017]a、将质量浓度为0.1％的氯金酸溶液(w/v),在磁力搅拌下加热至沸腾；
[0018]b、在煮沸的氯金酸溶液中加入柠檬酸三钠溶液进行还原反应，持续煮沸20min，生成酒红色的纳米金，冷却至室温备用；氯金酸溶液与柠檬酸三钠溶液的体积比为：100：(1
‑
3)；
[0019]c、将25mL纳米金溶液与75mL水混合，加热至沸腾，然后迅速加入10mM的AgNO3溶液2.2mL和1％的柠檬酸三钠溶液1mL，持续加热45min，最终生成纳米银包金胶体溶液。
[0020]根据本专利技术优选的，步骤2)中，溴敌隆标准溶液浓度为10ppb、20ppb、50ppb、100ppb、200ppb、500ppb、1000ppb或2000ppb。
[0021]根据本专利技术优选的，步骤3)中，碘化钾溶液的浓度为0.5
‑
2mM。
[0022]进一步优选的，步骤3)中，碘化钾溶液的浓度为1mM。
[0023]根据本专利技术优选的，步骤3)中，聚沉盐溶液为浓度0.3
‑
0.6M的硝酸镁溶液。
[0024]进一步优选的，步骤3)中，聚沉盐溶液为浓度0.5M的硝酸镁溶液。
[0025]由于SERS信号的灵敏度高度依赖于聚沉作用，聚沉形成的“热点”数量和纳米颗粒的聚集程度决定了SERS信号强度，纳米颗粒的聚集不足或过度均可导致SERS检测灵敏度的降低，本专利技术聚沉盐的种类、浓度和聚沉时间实现了溴敌隆SERS信号最强，可以快速、准确、高灵敏检测待测品中溴敌隆。
[0026]根据本专利技术优选的，步骤3)中，溴敌隆标准溶液与碘化钾溶液、聚沉盐溶液的体积比为(1
‑
2)：(1
‑
2)：(1
‑
2)。
[0027]根据本专利技术优选的，步骤4)中，纳米金包银(Au@Ag NPs)胶体溶液与碘化钾溶液、聚沉盐溶液、待检测尿液的体积比为(95
‑
100)：(1
‑
2)：(1
‑
2)：(1
‑
2)。
[0028]本专利技术的技术特点及优点：
[0029]1、本专利技术的方法无需对样品进行繁琐、耗时的前处理，只需将尿液加入纳米基底中，采用便携式拉曼光谱仪测试拉曼信号，根据校准曲线，即可测定待检测尿液中的溴敌隆的含量，测试方法高效、快速、简便，并且成本低、检测准确、灵敏度高，实现了现场快速分
析，对病人实施有针对性的及时救治提供了保本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于表面增强拉曼光谱的快速检测尿中溴敌隆的方法，包括步骤如下：1)功能基底的制备：利用还原法制备纳米金包银(Au@Ag NPs)胶体溶液作为功能基底；2)溴敌隆标准溶液的配制：将溴敌隆固体标准物质，用乙醇配制成浓度为2mg/mL的储备溶液，然后用水或尿液稀释配成不同浓度的溴敌隆标准溶液，溴敌隆标准溶液浓度为10ppb
‑
2000ppb；3)标准曲线的测定：溴敌隆标准溶液与碘化钾溶液、聚沉盐溶液混合均匀进行聚沉反应1
‑
5min，得标准混合液，将标准混合液置于石英比色皿中，用便携式拉曼光谱仪进行检测，拉曼检测的激光波长为785nm，激光强度500mW,积分时间15s，扫描拉曼光谱并记录SERS的特征信号强度，将1001cm
‑1处的SERS信号强度与对应的溴敌隆标准溶液浓度的对数值作图，得到标准曲线；4)将纳米金包银(Au@Ag NPs)胶体溶液与碘化钾溶液、聚沉盐溶液、待检测尿液混合均匀进行聚沉1
‑
5min，得待测混合液，将待测混合液转移至石英比色皿中，采用步骤3)的拉曼检测条件测试拉曼信号，通过1001cm
‑1处的SERS信号的大小，根据校准曲线，测定待检测尿液中的溴敌隆的含量。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中纳米金包银(Au@Ag NPs)的粒径为45
‑
55nm，优选的纳米金包银(Au@Ag NPs)的粒径为50nm。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中，纳米金包银(Au@Ag NPs)按如下方法制备得到：a、将质量浓度为0.1％的氯金酸溶液(w/v),在磁力搅拌下加热至沸腾；b、在煮沸的氯金酸溶...

【专利技术属性】
技术研发人员：王翠娟，邵华，尚明，卫海燕，邹薇，李念露，张梦萍，陈雯雯，孟潇，
申请(专利权)人：王翠娟，
类型：发明
国别省市：