一种新冠RBD蛋白荧光微球复合制剂制造技术

本发明专利技术提供了一种新冠RBD蛋白荧光微球复合制剂，该复合制剂由包括如下质量百分比的原料制成：偶联蛋白0.5

【技术实现步骤摘要】
一种新冠RBD蛋白荧光微球复合制剂


[0001]本专利技术属于饱和竞争领域，尤其是涉及一种新冠RBD蛋白荧光微球复合制剂。

技术介绍

[0002]免疫学中直接竞争法，标记抗原与待测抗原均是液相，与抗体的结合机会是一样的，标记抗原的相对结合率为50%。饱和竞争法，固相抗原与抗体的接触面积较小，只有与待测抗原结合剩余的抗体才会与固相抗原结合，固相抗原的相对结合率为0%。因此，间接法的抑制曲线斜率会大于直接竞争法。饱和竞争法的高灵敏度有时在ELISA中较难实现，更高效率的时间分辨荧光层析法是个更好的选择，使用饱和竞争法检测新型冠状病毒中和抗体，可以提高检测灵敏度。荧光微球的稳定性对后续的检测步骤起着关键的作用，如果荧光微球保存不当，就会导致后续检测无法进行，影响到最终检测试剂的效能。时间分辨荧光微球标记新型冠状病毒RBD蛋白(以下简称新冠RBD蛋白荧光微球复合物)保存液可维持复合物在液体中的稳定，使其不产生聚集，保持抗原活性与性能。
[0003]针对大规模疫苗接种后的人群，使用简单、快速的时间分辨荧光微球免疫层析法，可快速评估每个接种者体内的抗RBD抗体及中和抗体的水平。饱和竞争法检测中和抗体原理是，将待测样本与新冠RBD蛋白荧光微球复合物结合10
‑
20min后，再和固定在硝酸纤维素膜上的ACE2蛋白结合，反应10
‑
15min后使用荧光分析仪读取结果，待测样本中中和抗体含量越高荧光信号越弱。使用饱和竞争法时间分辨荧光免疫层析法可快速评估每个接种者体内的抗RBD抗体及中和抗体的水平，检测灵敏度高，检测时间短。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术旨在克服现有技术中的缺陷，提出一种新冠RBD蛋白荧光微球复合制剂。
[0005]为达到上述目的，本专利技术的技术方案是这样实现的：一种新冠RBD蛋白荧光微球复合制剂，该复合制剂由包括如下质量百分比的原料制成：偶联蛋白0.5
‑
1%，糖类2.5
‑
5%，离子0.9
‑
1.3%，大分子物质0.05
‑
0.07%，表面活性剂0.05
‑
0.1%，缓冲液0.24
‑
1.21%，防腐剂0.02
‑
0.05%。
[0006]进一步，所述的偶联蛋白为牛血清白蛋白与卵清蛋白（OVA）、血蓝蛋白（KLH）或丝素蛋白（SF）的至少一种通过EDC偶联而成。牛血清白蛋白分子中含有大量的反应基团，如氨基、羧基等，能在水相或有机溶剂中充分溶解，结构中有17个二硫键和一个巯基，巯基的化
学反应很活泼，二硫键有抗氧化还原的作用，因此可与多种阳离子，阴离子和小分子结合。与OVA、KLH、SF之间形成肽键，可减轻不利环境因素引起的RBD蛋白变性，还可防止RBD蛋白对杂质的吸附；可提高溶液中蛋白质的浓度，对RBD蛋白起保护作用，防止RBD单边的分解和非特异性反应，保持新冠RBD蛋白荧光微球复合物在2
‑
8℃的活性，增强测试的灵敏度，可以降低由于运输条件和储存条件变化而造成的变异性，降低CV。
[0007]进一步，所述的偶联蛋白为牛血清白蛋白与聚赖氨酸通过EDC偶联而成，偶联顺序为聚赖氨酸
‑
牛血清白蛋白。
[0008]所述的偶联蛋白为牛血清白蛋白和血蓝蛋白通过EDC偶联而成。
[0009]所述的偶联蛋白为牛血清白蛋白和丝素蛋白通过EDC偶联而成。
[0010]所述的偶联蛋白为牛血清白蛋白和卵清蛋白通过EDC偶联而成。
[0011]使用EDC活化聚赖氨酸末端的羧基后，与牛血清白蛋白的氨基脱水缩合形成肽键，可得到唯一产物。聚赖氨酸是一类具有较好生物相容性、可生物降解、含有丰富侧链官能团的仿生功能高分子，在蛋白质修饰方面具有突出的优势，偶联牛血清白蛋白后可使蛋白性质均一、重复性好，保留蛋白质活性。
[0012]所述的偶联蛋白的制备方法具体为：（1）称取10mg聚赖氨酸加入到磷酸盐缓冲液（0.02
‑
0.1M PBS，pH 7.2
‑
7.4）中，再加入10
‑
50mg/mL 1
‑
乙基
‑
(3
‑
二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺（EDC），避光反应15
‑
30min；（2）称取10mg牛血清白蛋白加入到活化后的聚赖氨酸溶液中；（3）用磷酸盐缓冲液（0.02
‑
0.1M PBS，pH 7.2
‑
7.4）透析，去除EDC；（4）经过亲和纯化后收集蛋白浓度较高的产物，得到偶联蛋白（ε
‑
PL
‑
BSA）。
[0013]所述的偶联蛋白的制备方法具体为：（1）称取10mg卵清蛋白加入到磷酸盐缓冲液（0.02
‑
0.1M PBS，pH 7.2
‑
7.4）中，再加入10
‑
50mg/mL 1
‑
乙基
‑
(3
‑
二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺（EDC），避光反应15
‑
30min；（2）称取10mg牛血清白蛋白和10mg血蓝蛋白加入到活化后的卵清蛋白溶液中；（3）使用磷酸盐缓冲液（0.02
‑
0.1M PBS，pH 7.2
‑
7.4）透析，去除EDC；（4）经过亲和纯化后收集分子量为三种蛋白分子量之和的产物，得到偶联蛋白（BSA
‑
OVA
‑
KLH）。
[0014]所述的偶联蛋白的制备方法具体为：（1）称取10mg牛血清白蛋白加入到磷酸盐缓冲液（0.02
‑
0.1M PBS，pH 7.2
‑
7.4）中，再加入10
‑
50mg/mL 1
‑
乙基
‑
(3
‑
二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺（EDC），避光反应15
‑
30min；（2）称取10mg丝素蛋白加入到活化后的牛血清白蛋白溶液中；（3）使用磷酸盐缓冲液（0.02
‑
0.1M PBS，pH 7.2
‑
7.4）透析，去除EDC；（4）经过亲和纯化后收集分子量为两种蛋白分子量之和的产物，得到偶联蛋白（BSA
‑
SF）。
[0015]进一步，所述的糖类为蔗糖、海藻糖或葡萄糖中的至少一种。糖类为多羟基亲水化合物，可以与偶联蛋白形成氢键，对温度和湿度变化具有固有的稳定性和机械强度，能够在蛋白表面形成保护膜，避免了RBD蛋白受温度影响或酶的降解作用，保护RBD蛋白不变质失活，提高RBD蛋白的稳定性。
[0016]进一步，所述的离子为Na
+
、K
+
或Mg
2+
中的至少一种。检测样本类型包含全血，保存液中添加Na<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种新冠RBD蛋白荧光微球复合制剂，其特征在于：该复合制剂由包括如下质量百分比的原料制成：偶联蛋白0.5
‑
1%，糖类2.5
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5%，离子0.9
‑
1.3%，大分子物质0.05
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0.07%，表面活性剂0.05
‑
0.1%，缓冲液0.24
‑
1.21%，防腐剂0.02
‑
0.05%。2.根据权利要求1所述的新冠RBD蛋白荧光微球复合制剂，其特征在于：所述的偶联蛋白为牛血清白蛋白与聚赖氨酸、血蓝蛋白、丝素蛋白或卵清蛋白的至少一种通过EDC偶联而成。3.根据权利要求2所述的新冠RBD蛋白荧光微球复合制剂，其特征在于：所述的偶联蛋白为牛血清白蛋白与聚赖氨酸通过EDC偶联而成，偶联顺序为聚赖氨酸
‑
牛血清白蛋白。4.根据权利要求1所述的新冠RBD蛋白荧光微球复合...

【专利技术属性】
技术研发人员：王丽娇，彭洁，张变强，于迪，盛长忠，粟艳，周泽奇，
申请(专利权)人：丹娜天津生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：