一种高效生产(2S,3S)-2,3-丁二醇的基因工程菌及其构建方法与应用技术

本发明专利技术涉及一种高效生产(2S,3S)

【技术实现步骤摘要】
一种高效生产(2S,3S)
‑
2,3
‑
丁二醇的基因工程菌及其构建方法与应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种高效生产(2S,3S)
‑
2,3
‑
丁二醇的基因工程菌及其构建方法与应用。

技术介绍

[0002]2,3
‑
丁二醇是分子式为(CH3CHOH)2的有机化合物，在常温下是一种无色无味的液体或者晶体。2,3
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丁二醇拥有两个手性碳原子，因此它有三种立体异构体，分别是meso
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2,3
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丁二醇、(2S,3S)
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2,3
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丁二醇和(2R,3R)
‑
2,3
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丁二醇。并且2,3
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丁二醇的三种立体异构体由于存在不同的手性基团而各自拥有不同的性质，这一特性使得光学纯2,3
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丁二醇在不对称合成中备受关注。
[0003]2,3
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丁二醇在航空燃料，医药，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高效生产(2S,3S)
‑
2,3
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丁二醇的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌同时表达金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯氏菌中的2,3
‑
丁二醇脱氢酶，或者同时表达金黄色葡萄球菌和谷氨酸棒杆菌中的2,3
‑
丁二醇脱氢酶，或者同时表达肺炎克雷伯氏菌和谷氨酸棒杆菌中的2,3
‑
丁二醇脱氢酶。2.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌为重组的大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)。3.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述2,3
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丁二醇脱氢酶为来自肺炎克雷伯氏菌，谷氨酸棒杆菌以及金黄色葡萄球菌的2,3
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丁二醇脱氢酶，其编码基因分别为KbudC，GbudC，LbudC，核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1，SEQ ID NO.2，SEQ ID NO.3所示。4.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌同时表达金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯氏菌中的2,3
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丁二醇脱氢酶时，基因工程菌构建所用的表达载体中编码基因LbudC位于pET28a质粒，KbudC位于pETDuet
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1质粒；所述基因工程菌同时表达金黄色葡萄球菌和谷氨酸棒杆菌中的2,3
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丁二醇脱氢酶时，基因工程菌构建所用的表达载体中编码基因LbudC位于pET28a质粒，GbudC位于pETDuet
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1质粒；所述基因工程菌同时表达肺炎克雷伯氏菌和谷氨酸棒杆菌中的2,3
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丁二醇脱氢酶时，基因工程菌构建所用的表达载体中编码基因KbudC位于pET28a质粒，GbudC位于pETDuet
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1质粒。5.权利要求1所述的基因工程菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将肺炎克雷伯氏菌，谷氨酸棒杆菌以及金黄色葡萄球菌中的2,3
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丁二醇脱氢酶基因KbudC，GbudC，LbudC分别插入pET28a，构建表达载体质粒pET28a
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KbudC，pET28a
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GbudC和pET28a
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LbudC；(2)将肺炎克雷伯氏菌和谷氨酸棒杆菌中的2,3
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丁二醇脱氢酶基因KbudC和GbudC分别插入pETDuet
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1质粒，构建表达载体质粒pETDuet
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KbudC和pETDuet
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GbudC；(3)将表达载体pET28a
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KbudC、pET28a
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GbudC、pET28a
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LbudC转化进大肠杆菌E.coliBL21(DE3)感受态细胞，挑选阳性重组子，得重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/pET28a
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KbudC、E.coli BL21(DE3)/pET28a
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GbudC和E.coli BL21(DE3)/pET28a
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LbudC；(4)将表达载体pETDuet
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KbudC转化进重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/pET28a
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LbudC，将表达载体pETDuet
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GbudC分别转化进重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/pET28a
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LbudC和重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/pET28a
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KbudC，挑选阳性重组子，得基因工程菌E.coli BL21(DE3)/pET28a
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LbudC/pETDuet
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KbudC、E.coli BL21(DE3)/pET28a
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KbudC/pETDuet
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GbudC和E.coli BL21(DE3)/pET28a
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LbudC/pETDuet
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GbudC。6.如权利要求5所述的基因工程菌的构建方法，其特征在于，具体包括如下步骤：(1)以肺炎克雷伯氏菌基因组为模板进行PCR扩增，扩增得到2,3
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丁二醇脱氢酶基因KbudC序列，PCR引物序列如下：Primer1:5
′‑
ATGGGTCGCGGATCCGAATTCATGAAAAAAGTCGCACTTGTTACC
‑3′
(含EcoRI酶切位点)，Primer2:5
′‑
GCAAGCTTGTCGACGGAGCTCTTAGTTAAATACCATCCCGCCG
‑3′
(含SacI酶切位点)；PCR扩增程序：预变性，95℃5min；变性，95℃30sec；退火，60℃30sec；延伸，72℃55sec(30个循环)；终止延伸，72℃10min；最后4℃保温；
将载体质粒pET28a，pETDuet
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：马春玲，邵明宇，王瑞明，李丕武，苏静，汪俊卿，
申请(专利权)人：齐鲁工业大学，
类型：发明
国别省市：