一种表达dsRNA的重组沙雷菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种表达dsRNA的重组沙雷菌及其应用。所述重组沙雷菌，通过向嗜线虫沙雷菌中外源转入dsRNA编码基因序列获得，其中，所述dsRNA能够对根结线虫分支酸变位酶进行基因沉默。本发明专利技术本发明专利技术利用土著细菌为载体，克服了外源微生物在肠道难以定植的劣势。本发明专利技术中dsRNA干扰对象是保守基因，既具有极高的靶向性又具有跨不同种属线虫的通用性，而且不容易产生抗药性。因此，本发明专利技术通过制备产dsRNA的重组沙雷菌用于植物根结线虫病的成功防治，对于开发新型生物农药具有重要的指导意义和应用价值。价值。价值。

【技术实现步骤摘要】
一种表达dsRNA的重组沙雷菌及其应用


[0001]本专利技术涉及微生物和遗传工程
，特别是涉及一种表达dsRNA的重组沙雷菌及其应用。

技术介绍

[0002]植物根结线虫(Meloidogyne属)会引起植物线虫病，植物线虫病对农业生产的危害连年加重，造成植物大量减产。全球因植物根结线虫以轮作和化学农药为主的传统防治难以满足现代农业生产的需要。
[0003]以常规的抗性育种和表达外源蛋白为主的抗线虫转基因育种主要受限于抗性基因的匮乏和病虫耐药性的不断增加。转基因植物抗性的实现都依赖于蛋白间的相互作用，外源蛋白通过与线虫病原物的识别和相互作用，引发复杂的抗病反应信号传导过程，由于病原物在不利的寄生条件下存在着频繁的遗传变异，因此，病原靶蛋白细微的结构变异都会使外源蛋白失去识别和相互作用，最终导致抗性的丧失。
[0004]以苏云金芽孢杆菌为代表的微生态制剂，也面临病虫耐药性的问题。Bt毒素由苏云金杆菌天然产生，被广泛用于控制害虫。毒素必须与害虫肠内的cadherin受体结合才有效力，害虫cadherin受体的突变产生了对Bt本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种表达dsRNA的重组沙雷菌，其特征在于，通过向嗜线虫沙雷菌中外源转入dsRNA的编码基因序列获得，其中，所述dsRNA能够对根结线虫分支酸变位酶进行基因沉默。2.如权利要求1所述的重组沙雷菌，其特征在于，嗜线虫沙雷菌基因敲除RNC和alr两个基因。3.如权利要求2所述的重组沙雷菌，其特征在于，RNC基因序列如SEQ ID NO.4所示；alr基因序列如SEQ ID NO.6所示。4.如权利要求1所述的重组沙雷菌，其特征在于，构建步骤如下：(1)构建无抗筛选标记沙雷菌表达载体，以pBBRmcs2载体为出发载体，分别插入用于表达所述dsRNA的编码基因和用于表达来自于大肠杆菌atcc25922的丙氨酸消旋酶基因alr和T7 RNA聚合酶基因的片段，构建得到重组质粒pBBR
‑
alr
‑
T7RP
‑
CM；(2)将嗜线虫沙雷菌中RNC和alr两个基因敲除，然后转入重组质粒pBBR
‑
alr

【专利技术属性】
技术研发人员：李海峰，
申请(专利权)人：杭州师范大学，
类型：发明
国别省市：