抗PD-L2抗体制造技术

本发明专利技术涉及抗PD

【技术实现步骤摘要】
抗PD
‑
L2抗体


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及特异性结合PD
‑
L2的抗体和其抗原结合片段，并且涉及使用这类抗体和抗原结合片段的方法。

技术介绍

[0002]肿瘤免疫治疗是一种重要的抗肿瘤治疗手段，其核心是激活肿瘤患者T淋巴细胞的抗肿瘤反应，提高其对肿瘤细胞的杀伤功能。程序性死亡受体1(PD
‑
1)是在免疫细胞(包括T细胞和B细胞)上表达的蛋白受体，具有两个配体，分别是程序性死亡
‑
1配体1(PD
‑
L1，B7
‑
H1或CD274)和程序性死亡
‑
1配体2(PD
‑
L2，B7
‑
DC或CD273)，PD
‑
1与配体结合后可以传导抑制信号，负调节T细胞免疫应答，抑制TCR介导的T细胞活化、细胞因子产生和T细胞增殖。因而，PD
‑
1/PD
‑
L1和PD
‑
1/PD
‑
L2信号通路在肿瘤免疫逃逸中的作用及肿瘤免疫治疗中的应用成为研究热点。
[0003]PD
‑
L2和PD
‑
L1都是由IgV样结构域、IgC样结构域、跨膜区和尾部胞质区组成的I型跨膜蛋白，编码人PD
‑
L2和PD
‑
L1的基因均定位于染色体9p24.2，但PD
‑
L2和PD
‑
L1的序列、组织分布、受体
‑
配体结合特异性和亲和力以及参与的信号通路都表现出较大的差异。PD
‑
L1在淋巴和非淋巴组织中的白细胞和非造血细胞以及各种癌细胞上广泛分布，在肿瘤发生时PD
‑
L1上调；PD
‑
L2一般在抗原呈递细胞上表达，包括树突状细胞，巨噬细胞和骨髓衍生的肥大细胞(Zhong等(2007)Eur.J.Immunol 37:2405
‑
2410)。在特定微环境的刺激下，PD
‑
L2在多种免疫细胞和非免疫细胞中均可被诱导表达，例如头颈部鳞状细胞癌、乳腺癌、胃癌等肿瘤细胞(Zou等(2015)Nat Rev Immunol 8:467
‑
477)。说明阻断PD
‑
1/PD
‑
L2相互作用，亦能增强肿瘤特异性T细胞免疫性，帮助免疫系统清除肿瘤细胞。更重要的是，在多种不表达或低表达PD
‑
L1的人类肿瘤样本中，检测到PD
‑
L2的高表达(Baptista等(2016)Human pathology 47:78
‑
84；Yearley等(2017)Clin cancer research 23:3158
‑
3167)。此外，在172例接受Keytruda治疗的复发或转移性颈部鳞状细胞癌患者中，PD
‑
L1和PD
‑
L2均表达为阳性患者的ORR为27.5％，而PD
‑
L1阳性PD
‑
L2阴性患者的ORR仅为11.4％，前者是后者的2倍(Yearley等(2017)Clin cancer research 23:3158
‑
3167)，说明同时抑制PD
‑
L1和PD
‑
L2可能会提高临床应答率，同时PD
‑
L2可以作为预测PD
‑
1抑制剂临床疗效的补充指标。
[0004]自2010年以来，多种针对PD
‑
1或PD
‑
L1的抗体已进入临床试验或获得上市批准，这些抗体在体外和体内均显示出显著的抗肿瘤活性，如Pembrolizumab，Atezolizumab，Durvalumab，但到目前为止还没有针对PD
‑
L2的抗体药物进入临床研究。因此，研制一种与人PD
‑
L2特异性结合的治疗性抗体具有重要的意义。此外，PD
‑
L2作为一种分子标志物在各种肿瘤的靶向治疗和预后诊断中发挥着重要的作用，因此有必要制备一种高特异性结合人PD
‑
L2的单克隆抗体，来指导肿瘤的诊断和治疗。

技术实现思路

[0005]一方面，本专利技术提供一种分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合程序性死
亡
‑
1配体2(PD
‑
L2)。在一些实施方案中，本专利技术的分离的抗体或其抗原结合片段是鼠类抗体、嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。在一些实施方案中，本专利技术的分离的抗体或其抗原结合片段是单克隆抗体、Fab片段、F(ab')2片段、Fd片段、Fv片段、dAb、分离的CDR、单链Fv分子，以及重组多肽、融合蛋白、双特异性分子或其组合。在一些实施方案中，本专利技术的分离的抗体或其抗原结合片段结合人PD
‑
L2；在另一些实施方案中，本专利技术的分离的抗体或其抗原结合片段结合人PD
‑
L2并结合食蟹猴(cynomolgous)PD
‑
L2。在另一个实施方案中，本专利技术的分离的抗体或其抗原结合片段阻断PD
‑
L2与其受体PD
‑
1的结合。
[0006]在一个实施方案中，本专利技术的分离的抗体或其抗原结合片段结合PD
‑
L2，并且包含重链CDR1，重链CDR2和重链CDR3，其中，(1)重链CDR1，重链CDR2和重链CDR3分别包含SEQ ID NOs：1，2，3所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs：1，2，3所示的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(2)重链CDR1，重链CDR2和重链CDR3分别包含SEQ ID NOs：7，8，9所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs：7，8，9所示的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(3)重链CDR1，重链CDR2和重链CDR3分别包含SEQ ID NOs：13，14，15所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs：13，14，15所示的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；或(4)重链CDR1，重链CDR2和重链CDR3分别包含SEQ ID NOs：19，20，21所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs：19，20，2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分离的抗PD
‑
L2抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：(i)重链CDR1，重链CDR2和重链CDR3，其中：(1)重链CDR1，重链CDR2和重链CDR3分别包含SEQ ID NOs：1，2，3所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs：1，2，3所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列；(2)重链CDR1，重链CDR2和重链CDR3分别包含SEQ ID NOs：7，8，9所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs：7，8，9所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列；(3)重链CDR1，重链CDR2和重链CDR3分别包含SEQ ID NOs：13，14，15所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs：13，14，15所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列；或(4)重链CDR1，重链CDR2和重链CDR3分别包含SEQ ID NOs：19，20，21所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs：19，20，21所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列；和/或(ii)轻链CDR1，轻链CDR2和轻链CDR3，其中：(1)轻链CDR1，轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs：4，5，6所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs：4，5，6所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列；(2)轻链CDR1，轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs：10，11，12所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs：10，11，12所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列；(3)轻链CDR1，轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs：16，17，18所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs：16，17，18所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列；或(4)轻链CDR1，轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs：22，23，24所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs：22，23，24所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列；其中，SEQ ID NO：2的氨基酸序列是RIDPSXSETH，X＝D或E；SEQ ID NO：8的氨基酸序列是MIDPSXSETR，X＝D或E；SEQ ID NO：14的氨基酸序列是VINPVXGGIS，X＝N或Q；SEQ ID NO：20的氨基酸序列是LISPYXGVTT，X＝N或Q；SEQ ID NO：22的氨基酸序列是KSSQSLLXSGNQKNYLT，X＝N或Q。2.如权利要求1所述的抗PD
‑
L2抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含重链CDR1，重链CDR2，重链CDR3，轻链CDR1，轻链CDR2和轻链CDR3，其中：(1)重链CDR1，重链CDR2和重链CDR3分别包含SEQ ID NOs：1，2，3所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs：1，2，3所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列；并且，轻链CDR1，轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs：4，5，6所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs：4，5，6所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列；其中，SEQ ID NO：2的氨基酸序列是RIDPSXSETH，X＝D或E；(2)重链CDR1，重链CDR2和重链CDR3分别包含SEQ ID NOs：7，8，9所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs：7，8，9所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列；并且，轻链CDR1，轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs：10，11，12所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs：10，11，12所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列；其中，SEQ ID NO：8的氨基酸序列是MIDPSXSETR，X＝D或E；(3)重链CDR1，重链CDR2和重链CDR3分别包含SEQ ID NOs：13，14，15所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs：13，14，15所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列；并且，轻链CDR1，轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs：16，17，18所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs：16，17，18所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列；其中，SEQ ID NO：
14的氨基酸序列是VINPVXGGIS，X＝N或Q；或(4)重链CDR1，重链CDR2和重链CDR3分别包含SEQ ID NOs：19，20，21所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs：19，20，21所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列；并且，轻链CDR1，轻链CDR2和轻链CDR3分别包含SEQ ID NOs：22，23，24所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs：22，23，24所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列；其中，SEQ ID NO：20的氨基酸序列是LISPYXGVTT，X＝N或Q；SEQ ID NO：22的氨基酸序列是KSSQSLLXSGNQKNYLT，X＝N或Q。3.如权利要求1
‑
2任一项所述的抗PD
‑
L2抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段是鼠类、嵌合或人源化的。4.如权利要求1
‑
3任一项所述的抗PD
‑
L2抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，其中：(1)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs：25和26所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs：25和26所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列，(2)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs：27和28所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs：27和28所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列，(3)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs：29和30所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs：29和30所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列，(4)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs：31和32所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs：31和32所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列，(5)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs：33和34所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs：33和34所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列，(6)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs：35和34所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs：35和34所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列，(7)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs：36和37所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs：36和37所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列，(8)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs：38和37所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs：38和37所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列，(9)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs：39和40所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs：39和40所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列，(10)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs：41和40所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs：41和40所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列，(11)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs：42和43所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs：42和43所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列，(12)重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs：44和43所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs：44和43所示的氨基酸序列具有...

【专利技术属性】
技术研发人员：桂秋，朱虹，王亮亮，徐宏江，杨玲，
申请(专利权)人：正大天晴药业集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：