一种赤水金钗石斛花指纹图谱构建及其含量测定方法技术

本发明专利技术公开了一种赤水金钗石斛花指纹图谱构建及其含量测定方法，包括以下步骤：取干燥的赤水金钗石斛花用70%甲醇提取，过滤，收集续滤液得到供试品溶液；取黄酮对照品，精密称定，加70%甲醇制成对照品溶液；将供试品溶液进行高效液相色谱分析，得到HPLC指纹图谱，根据与对照品的相对保留时间确定共有峰；利用标准品对照，计算待测成分的含量。本发明专利技术提供了一种可以同时检测赤水金钗石斛花中3个化学成分的指纹图谱方法，并可以对各成分的含量进行定量检测，提供了一种客观评价药品的质量水平方法；且该方法精密度、稳定性和重现性良好，可同时满足赤水金钗石斛花指纹图谱测定要求。时满足赤水金钗石斛花指纹图谱测定要求。时满足赤水金钗石斛花指纹图谱测定要求。

【技术实现步骤摘要】
一种赤水金钗石斛花指纹图谱构建及其含量测定方法


[0001]本专利技术涉及中药的质量检测方法领域，尤其涉及一种赤水金钗石斛花指纹图谱构建及其含量测定方法。

技术介绍

[0002]金钗石斛为兰科石斛属石斛（Dendrobium nobile Lindl.）的新鲜或干燥茎，是2020版中国药典石斛收载的3个主要品种之一，同时也是卫生部公布的药食两用的药材。《神农本草经》有记载“金钗石斛主治伤中，除痹，下气，补五脏虚劳赢瘦，强阴。久服厚肠胃。轻身延年。”认为其有益胃生津、滋阴清热等功效。
[0003]金钗石斛在我国主要分布于贵州、四川、云南、广西、海南和台湾等地，以贵州赤水所产为最佳，为“道地药材”。中国药材种植资源普查结果显示，目前国内只有贵州赤水符合金钗石斛的野外种植条件。贵州赤水是我国最早发展金钗石斛产业的主要城市，是金钗石斛药材及相关保健品的主要生产基地，并已通过国家GAP种植基地认证。赤水金钗石斛资源丰富，品质优良，但相关产品科技含量仍需提高，具有结合现代科技创新技术，深入开发的潜力。
[0004]目前，金钗石斛的主要应用部位是茎，而花的开发应用不够，大量资源被闲置浪费，阻碍了金钗石斛产业发展。赤水金钗石斛花现多被用作茶饮，且已被列为贵州食品地方标准，DBS52/049
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2021、DBS52/050
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2021。其标准包括了性状、感官要求、污染物限量及水分、灰色等理化检测，同时规定其所含石斛碱含量不得低于0.4%。然而目前对金钗石斛花所含具体化学成分的研究较少，质量控制方法目前也仅有一篇指纹图谱的专利，其仅指认出D
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无水葡萄糖这一种成分，特征性不强，尚不全面，有深入研究的必要。本专利技术将建立赤水金钗石斛花高效液相色谱（HPLC）的指纹图谱，并探索其化学成分，以期为赤水金钗石斛花质量控制方法的建立提供科学依据。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种赤水金钗石斛花指纹图谱的构建及其含量测定方法。该方法稳定可靠、重现性好、精密度高，弥补了现有质量控制方法的短缺，对赤水金钗石斛花质量检测和评价具有指导意义。
[0006]本专利技术所采取的技术方案为：一种赤水金钗石斛花指纹图谱构建及含量测定方法，包括以下步骤：（1）供试品溶液的制备：准确称取干燥的金钗石斛花0.5g于锥形瓶中，加入35 mL70%甲醇，称重，摇匀，超声60 min（45 kHz，90%），冷却至室温后再称重，用70%甲醇补足损失的质量，摇匀，过滤，取续滤液，得到样品溶液。进样前过0.22μm微孔滤膜；（2）对照品溶液的制备：包括单一对照品溶液和混合对照品溶液的制备，取黄酮对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成对照品溶液；（3）将供试品溶液进行高效液相色谱分析，得到HPLC指纹图谱，根据与对照品的相
对保留时间确定特征峰；进一步的，步骤（2）中所述单一对照品溶液的制备：单一对照品溶液的配制：分别准确称取适量甘草苷、山柰酚
‑3‑
葡萄糖鼠李糖苷、异槲皮苷于3个5mL容量瓶中，用70%甲醇定容至刻度，超声振荡、摇匀，得到浓度分别为0.209 mg/mL、0.105mg/mL、0.241mg/mL单一对照品贮备液，进样前过0.22μm微孔滤膜。
[0007]进一步的，步骤（2）中所述混合对照品溶液：分别准确称取甘草苷、山柰酚
‑3‑
葡萄糖鼠李糖苷、异槲皮苷0.21mg、0.66mg、0.20mg于5mL容量瓶中，用70%甲醇定容至刻度，超声振荡、摇匀，即得混合对照品贮备液，进样前过0.22 μm微孔滤膜。
[0008]进一步的，步骤（3）中所述高效液相色谱分析的条件为：色谱柱为Agilent Eclipse Plus C
18
，4.6 mm
×
150 mm，5 μm；流动相为0.06%醋酸
‑
水（A），乙腈（B）；流动相流速为1.0 mL/min；柱温为30℃；进样量：2μL；检测波长为280nm；所述的流动相为0.06%醋酸
‑
水（A），乙腈（B）。
[0009]进一步的，步骤（3）中所述的梯度洗脱步骤包括：按照体积分数计，0~4 min，95%A
→
87.5A；4~14 min，87.5%A
→
83%A；14~21 min，83%A
→
73%A；21~25 min，73%A
→
0%A。
[0010]所述高效液相色谱分析的条件包括：实验中考察了Agilent Eclipse Plus C
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柱（150 mm
×
4.6 mm，5 μm)、Thermo Acclaim
TM 120 C
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柱（150 mm
×
4.6 mm，5 μm）和Agilent Eclipse XDB
‑
C
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柱（150 mm
×
4.6 mm，5 μm）三个色谱柱与254、280、360 nm三种检测波长，结果表明，Agilent Eclipse Plus C
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柱（150 mm
×
4.6 mm，5 μm）柱效更好，且在280 nm时样品溶液具有较好的峰形；赤水金钗石斛花中化学成分种类较多，极性差异较大，因此考虑使用梯度洗脱。由于类似组方的成分分析报道较少，在流动相梯度摸索过程中考察醋酸水（A）
‑
甲醇（B）、醋酸水（A）
‑
乙腈（B）、磷酸水（A）
‑
甲醇（B）、磷酸水（A）
‑
乙腈（B）；结果表明，采用0.06%醋酸水（A）
‑
乙腈（B）流动相体系时，出峰时间最合适，特征峰能达到分离度要求，色谱图基线较平稳，峰对称性好。
[0011]因此，采用梯度洗脱，步骤包括：按照体积分数计，0~4min，95%A
→
87.5%A；4~14min，87.5%A
→
83%A；14~21min，83%A
→
73%A；21~25 min，73%A
→
0%A；本专利技术优选的技术方案，所述高效液相色谱分析流动相为：按体积分数计，0.06%醋酸水（A）
‑
乙腈（B）。所述梯度洗脱步骤包括：按体积分数计，0~4 min，95%A
→
87.5%A；4~14 min，87.5%A
→
83%A；14~21min，83%A
→
73%A；21~25min，73% A
→
0%A。
[0012]流速1.0 mL/min；柱温30℃；进一步的，步骤（3）中所述的根据与对照品的相对保留时间确定特征峰，精密度考察：取S1金钗石斛花样品溶液，在同样的的色谱条件下连续进样6次，考察色谱峰相似度的一致性，记录13个主要共有峰本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种赤水金钗石斛花指纹图谱构建及其含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）供试品溶液的制备：准确称取干燥的金钗石斛花0.5g于锥形瓶中，加入35 mL70%甲醇，称重，摇匀，超声60 min（45 kHz，90%），冷却至室温后再称重，用70%甲醇补足损失的质量，摇匀，过滤，取续滤液，得到样品溶液；进样前过0.22μm微孔滤膜；（2）对照品溶液的制备：包括单一对照品溶液和混合对照品溶液的制备，取黄酮对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成对照品溶液；（3）将供试品溶液进行高效液相色谱分析，得到HPLC指纹图谱，根据与对照品的相对保留时间确定特征峰；（4）根据标准品，计算待测成分的含量。2.根据权利要求1所述的一种赤水金钗石斛花指纹图谱构建及其含量测定方法，其特征在于，步骤（2）中所述单一对照品溶液的制备：单一对照品溶液的配制：分别准确称取适量甘草苷、山柰酚
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葡萄糖鼠李糖苷、异槲皮苷于3个5mL容量瓶中，用70%甲醇定容至刻度，超声振荡、摇匀，得到浓度分别为0.209 mg/mL、0.105mg/mL、0.241mg/mL单一对照品贮备液，进样前过0.22μm微孔滤膜。3.根据权利要求1所述的一种赤水金钗石斛花指纹图谱构建及其含量测定方法，其特征在于，步骤（2）中所述混合对照品溶液：分别准确称取甘草苷、山柰酚
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葡萄糖鼠李糖苷、异槲皮苷0.21mg、0.66mg、0.20mg于5mL容量瓶中，用70%甲醇定容至刻度，超声振荡、摇匀，即得混合对照品贮备液，进样前过0.22 μm微孔滤膜。4.根据权利要求1所述的一种赤水金钗石斛花指纹图谱构建及其含量测定方法，其特征在于，步骤（3）中所述高效液相色谱分析的条件为：色谱柱为Agilent Eclipse Plus C
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，4.6 mm
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150 mm，5 μm；流动相为0.06%醋酸
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水（A），乙腈（B）；流动相流速为1.0 mL/min；柱温为30℃；进样量：2μL；检测波长为280nm；所述的流动相为0.06%醋酸
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水（A），乙腈（B）。5.根据权利要求1所述的一种赤水金钗石斛花指纹图谱构建及其含量测定方法，其特征在于：步骤（3）中所述的梯度洗脱步骤包括：按照体积分数计，0~4 min，95%A
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87.5A；4~14 min，87.5%A
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【专利技术属性】
技术研发人员：段灿灿，田鑫，张建永，李尧，冯文忠，
申请(专利权)人：遵义医科大学，
类型：发明
国别省市：