气相色谱-四极杆质谱定量分析烟叶11种酰胺生物碱方法技术

本发明专利技术涉及气相色谱

【技术实现步骤摘要】
气相色谱
‑
四极杆质谱定量分析烟叶11种酰胺生物碱方法


[0001]本专利技术属于分析化学
，具体涉及基于气相色谱
‑
四极杆质谱的烟叶中11种酰胺生物碱的同时定量分析方法。

技术介绍

[0002]由于烟叶中的安全和品质与人类的健康息息相关，因此烟草中各类成分的研究一直深受人们的重视，但由于烟草的生产加工和储存中化学反应比较复杂，其中的化学物质的变化复杂多样，因此很多成分并没有清楚的认识。目前已有研究发现烟草中与去甲基尼古丁相关的化合物酰胺生物碱，但其定量分析方法和应用尚没有开发。

技术实现思路

[0003]为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种气相色谱
‑
四极杆质谱定量分析烟叶中11种酰胺生物碱方法，通过氢氧化钠溶液浸泡使酰胺生物碱从样品基质中游离出来，通过加入甲基叔丁基醚的萃取将目标化合物转入醚层，取甲基叔丁基醚层浓缩后进行气相色谱
‑
四极杆质谱分析，可同时测定烟叶中11种酰胺生物碱的含量，进而通过酰胺生物碱的含量对烟叶进行分析。
[0004]本专利技术的技术方案：
[0005]一种气相色谱
‑
四极杆质谱定量分析烟叶中11种酰胺生物碱方法，通过氢氧化钠溶液浸泡使酰胺生物碱从烟末样品基质中游离出来，通过甲基叔丁基醚的萃取将目标化合物转入醚层，取甲基叔丁基醚萃取液浓缩后进行气相色谱
‑
四极杆质谱分析，将仪器获得的色谱峰面积输入对应的酰胺生物碱的标准校准曲线拟合方程，得到对应的目标化合物浓度，通过换算得到对应的酰胺生物碱在烟叶中的含量。
[0006]该方法可按照以下步骤实现：
[0007]步骤一、样品前处理：通过氢氧化钠溶液浸泡释放所述烟末样品基质中的酰胺生物碱，采用甲基叔丁基醚多次萃取释放的酰胺生物碱，通过对所述甲基叔丁基醚萃取液进行浓缩使目标酰胺生物碱能被仪器检测到；
[0008]步骤二、确定仪器分析条件，包括色谱条件和质谱条件；
[0009]步骤三：标准曲线定量，分别绘制11种酰胺生物碱的标准曲线拟合方程和线性相关系数，将步骤一中的所述甲基叔丁基醚萃取液的浓缩液按照步骤二的条件进行气相色谱
‑
四极杆质谱分析，得到实际烟叶样品中所含酰胺生物碱的色谱峰面积，输入对应的所述校准曲线拟合方程，得到对应的目标化合物浓度，通过换算得到对应的酰胺生物碱在烟叶中的含量。
[0010]所述标准曲线拟合方程和线性相关系数通过如下方式获得：
[0011]S31、标准溶液配制：分别配置11种酰胺生物碱的梯度浓度的工作溶液，溶剂为甲基叔丁基醚；
[0012]S32、按照步骤二所设定的条件采用气相色谱
‑
四极杆质谱进行分析，得到每个浓
度梯度样本对应的色谱质谱峰面积，并将得到的峰面积和其对应的浓度梯度进行线性拟合，得到校准曲线拟合方程和线性相关系数。
[0013]所述步骤三具体包括以下步骤：
[0014]S31、标准溶液配制：分别配置11种酰胺生物碱的梯度浓度的工作溶液，溶剂为甲基叔丁基醚；
[0015]S32、按照步骤二所设定的条件采用气相色谱
‑
四极杆质谱进行分析，得到每个浓度梯度样本对应的色谱质谱峰面积，并将得到的峰面积和其对应的浓度梯度进行线性拟合，得到校准曲线拟合方程和线性相关系数；
[0016]S33、将步骤一中的所述甲基叔丁基醚萃取液的浓缩液按照步骤二的条件进行气相色谱
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四极杆质谱分析，得到实际烟叶样品中所含酰胺生物碱的色谱峰面积，输入对应的所述校准曲线拟合方程，得到对应的物质浓度(ug/mL)；
[0017]S34、通过公式(1)换算得到对应的酰胺生物碱在烟叶中的含量：
[0018]X＝c/5(1)
[0019]式中：X代表样品中11种酰胺生物碱的含量，单位为微克每克(μg/g)；c代表标准曲线得出的被测组分的浓度，单位为微克每毫升(μg/mL)。
[0020]所述步骤一中，所述烟末样品的称样量为4
‑
6g，所述氢氧化钠溶液的用量为18
‑
22mL，所述氢氧化钠溶液的浓度为2
‑
8％，所述甲基叔丁基醚的萃取次数为3次，每次用量为18
‑
22mL，合并后的所述甲基叔丁基醚萃取液浓缩至1mL。
[0021]烟叶样品首先经烘干、粉碎和过筛处理，得到所述烟末样品，烘干温度30
‑
50℃，过筛尺寸为30
‑
60目。
[0022]所述步骤二中确定的仪器分析条件为：
[0023]色谱条件：色谱柱，DB
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5MS(30m
×
0.25mm
×
0.25μm)；进样量，1μL；分流比，20:1；进样口温度，250℃。升温程序条件：100℃开始，10℃/min升至300℃，保持5min。
[0024]质谱分析条件：传输线温度，260℃；离子源温度，230℃；电离模式：电子轰击电离(EI)，70eV；溶剂延迟时间:4min；数据采集模式：选择离子扫描(SIM)。
[0025]一种烟叶分析方法，其特征在于选取不同烟叶样品，定量分析烟叶酰胺生物碱含量，根据相同酰胺生物碱含量的样品与特定烟叶风味的对应性建立数据库，所述定量分析采用前述的一种气相色谱
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四极杆质谱定量分析烟叶中11种酰胺生物碱的方法。
[0026]本专利技术的有益技术效果：
[0027]本专利技术的一种气相色谱
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四极杆质谱定量分析烟叶中11种酰胺生物碱方法，通过对烟叶进行前处理方法和气相色谱
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四极杆质谱条件优化，建立了11种酰胺生物碱的同时定量分析方法。该方法具有简单、快速、稳定等优势。填补了目前不存在定量分析烟叶中11种酰胺生物碱的方法的空白。
[0028]进一步的，降烟碱去甲基尼古丁的仲胺氮原子具有一定的活性，易与有机酸结合，形成酰胺生物碱。由于具有致癌性的去甲基尼古丁亚硝胺(NNN)也来源于降烟碱，也即酰胺生物碱的生成消耗了烟叶中去甲基尼古丁的含量，因此本专利技术可实现通过酰胺生物碱的定量分析来进一步分析NNN的含量。另一方面，经研究发现，所形成的酰胺生物碱对烟叶的风格特征也会产生影响。因此，通过对相同酰胺生物碱含量的烟叶的风味分析，可以建立酰胺生物碱与风味的对应数据库，从而可以在原料选择、生产工艺设定中起到参考作用。因此，
本专利技术准确定量烟叶中去甲基尼古丁的酰基化产物对于评价烟叶的安全和品质，开展尼古丁相关代谢研究具有重要的意义。
附图说明
[0029]图1为11种酰胺生物碱的化学结构；
[0030]图2为11种酰胺生物碱的气相色谱
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四极杆质谱分离色谱图。
[0031]附图标记：1
‑
N
’‑
甲酰去甲基尼古丁；2
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种气相色谱
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四极杆质谱定量分析烟叶中11种酰胺生物碱方法，其特征在于通过氢氧化钠溶液浸泡使酰胺生物碱从烟末样品基质中游离出来，通过甲基叔丁基醚的萃取将目标化合物转入醚层，取甲基叔丁基醚萃取液浓缩后进行气相色谱
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四极杆质谱分析，将仪器获得的色谱峰面积输入对应的酰胺生物碱的标准校准曲线拟合方程，得到对应的目标化合物浓度，通过换算得到对应的酰胺生物碱在烟叶中的含量。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于包括以下步骤：步骤一、样品前处理：通过氢氧化钠溶液浸泡释放所述烟末样品基质中的酰胺生物碱，采用甲基叔丁基醚多次萃取释放的酰胺生物碱，通过对所述甲基叔丁基醚萃取液进行浓缩使目标酰胺生物碱能被仪器检测到；步骤二、确定仪器分析条件，包括色谱条件和质谱条件；步骤三、标准曲线定量，分别绘制11种酰胺生物碱的标准曲线拟合方程和线性相关系数，将步骤一中的所述甲基叔丁基醚萃取液的浓缩液按照步骤二的条件进行气相色谱
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四极杆质谱分析，得到实际烟叶样品中所含酰胺生物碱的色谱峰面积，输入对应的所述校准曲线拟合方程，得到对应的目标化合物浓度，通过换算得到对应的酰胺生物碱在烟叶中的含量。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述标准曲线拟合方程和线性相关系数通过如下方式获得：S31、标准溶液配制：分别配置11种酰胺生物碱的梯度浓度的工作溶液，溶剂为甲基叔丁基醚；S32、按照步骤二所设定的条件采用气相色谱
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四极杆质谱进行分析，得到每个浓度梯度样本对应的色谱质谱峰面积，并将得到的峰面积和其对应的浓度梯度进行线性拟合，得到校准曲线拟合方程和线性相关系数。4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于所述步骤三具体包括以下步骤：S31、标准溶液配制：分别配置11种酰胺生物碱的梯度浓度的工作溶液，溶剂为甲基叔丁基醚；S32、按照步骤二所设定的条件采用气相色谱
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四极杆质谱进行分析，得到每个浓度梯度样本对应的色谱质谱峰面积，并将得到的峰面积和其对应的浓度梯度进行线性拟合...

【专利技术属性】
技术研发人员：李勇，逄涛，师君丽，邓小鹏，
申请(专利权)人：云南省烟草农业科学研究院，
类型：发明
国别省市：