一种绿针假单胞菌及其在土壤微生态调控上的应用制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种绿针假单胞菌及其在土壤微生态调控上的应用。该菌株为绿针假单胞菌(Pseudomonas chlororaphis)P2

【技术实现步骤摘要】
一种绿针假单胞菌及其在土壤微生态调控上的应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种绿针假单胞菌及其在土壤微生态调控上的应用。

技术介绍

[0002]随着现代农业的快速发展，大多数的蔬菜以及一些高附加值的经济作物得到集约化发展，高复种指数以及化肥农药的过度使用，导致土壤肥力下降，病虫害发病日益严重。其中连作障碍问题尤为突出，已经严重影响了相关产业的发展。土壤中造成植物连作障碍的因素很多，其中包括大量土传病原菌的富集，其中最常见的主要包括镰孢菌(Fusarium spp.)、疫霉菌(Phytophthora spp.)、丝核菌(Rhizoctonia spp.)、灰霉菌(Botrytis spp.)、腐霉(Pythium spp.)和轮枝菌(Verticillium spp.)和链格孢菌(Alternaria spp.)等，这些病原真菌的富集，很容易造成植物的病害发生，协同危害严重。例如镰孢菌就是最常见的优势病原真菌，常会导致番茄等多种蔬菜的枯萎病、猝倒病等植物病害。研究显示，用PDA培养基分离番茄根际土壤中的真可培养真菌，80％以上是镰孢菌，虽然多数镰孢菌不会直接侵染发病，但大量的镰孢菌依然对其它有益微生物造成种群竞争压力，更有可能成为机会致病菌，加重危害。
[0003]设施蔬菜由于常年连作，不合理的肥水管理，造成土壤环境恶化，病害严重。不得不采取非常规措施进行病害控制。例如土壤消毒技术，采用物理、化学以及生物等技术手段对土壤中的微生物进行无选择性灭杀，造成土壤微生态失衡，病原真菌选择富集成为优势种群，造成设施蔬菜病害发生日益严重，不得不依靠化学农药进行预防和控制，导致抗药性，进一步导致病原真菌富集危害，加重连作障碍。利用微生物技术对土壤中的有害生物进行拮抗，降低其种群优势，改善微生态环境，是解决植物连作障碍，减少或替代化学农药的重要手段之一。例如芽孢杆菌、假单胞菌、链霉菌和酵母菌等用于病害防治均有一定的效果，但也存在防病效果不理想，防效不稳定，难以替代化学杀菌剂的困境。挖掘更广谱、更高效的生防菌，通过调整土壤微生物种群组成，降低有害微生物的种群优势，对于蔬菜土传病害控制具有重要的意义。

技术实现思路

[0004]针对国内设施蔬菜土壤中存在的微生态失衡，土传病害发病日益严重等实际问题，本专利技术提供了一种可调控土壤微生态环境的假单胞菌及应用技术，本专利技术的假单胞菌菌株分离筛选自设施蔬菜土壤，对土壤的理化环境具有更好的适应性，可对土壤中镰孢菌等多种常见病原真菌有强抑制作用，可有效降低其种群优势，达到预防和减少病害的效果。
[0005]第一方面，本专利技术提供的一种绿针假单胞菌，该菌株为绿针假单胞菌(Pseudomonas chlororaphis)P2
‑
1，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.23576，保藏日期为2021年10月12日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
[0006]本专利技术的绿针假单胞菌菌株P2
‑
1分离自山东设施蔬菜大棚土壤，将该菌株16S rDNA序列提交NCBI BlAST进行相似性比较，与绿针假单胞菌(Pseudomonas chlororaphis)模式菌株2A(GenBank:GQ906975)相似性达99.86％，结合形态学特征，鉴定该细菌菌株为绿针假单胞菌(Pseudomonas chlororaphis)，16S rDNA序列已经提交到了Genbank数据库，登录号：OK626337。
[0007]另一方面，本专利技术提供的一种绿针假单胞菌P2
‑
1在设施蔬菜土壤微生态调控上的应用。
[0008]所述的对土壤微生态调控，是对土壤中镰刀菌(Fusarium spp.)、疫霉菌(Phytophthora spp.)、丝核菌(Rhizoctonia spp.)、灰霉菌(Botrytis spp.)、腐霉(Pythium spp.)和轮枝菌(Verticillium spp.)及链格孢菌(Alternaria spp.)中的一种或多种病原真菌种群进行种群调控。绿针假单胞菌能改变土壤微生物种群组成，降低土壤中镰孢菌等有害病原真菌的种群优势，实现对土传病害的生物预防和控制。
[0009]本专利技术将绿针假单胞菌P2
‑
1制成可湿性粉剂，可湿性粉剂中有效活菌数≥20
×
108cfu/g。
[0010]所述可湿性粉剂的制备包括以下步骤：
[0011]a.将绿针假单胞菌P2
‑
1接种到培养基中活化；
[0012]b.制备液体发酵培养基：玉米粉60g、豆饼粉10g、葡萄糖15g、硫酸铵2g、碳酸钙2g、磷酸氢二钠2g、硫酸亚铁0.5g、硫酸镁0.5g，水1000mL，pH 7.2
‑
7.4，121℃湿热灭菌60min，冷却备用；
[0013]c.将步骤a活化后的种子液接种到步骤b的液体发酵培养基上培养；
[0014]d.将步骤c培养后的发酵液用灭菌的硅藻土或草炭土吸附，即得可湿性粉剂。
[0015]进一步的，所述步骤a中，使用NA培养基活化绿针假单胞菌P2
‑
1，NA培养基组成：牛肉膏3.0g，蛋白胨10g，NaCl 5g，琼脂粉15g，水1000mL，pH 7.2
‑
7.4；或使用LB培养基活化绿针假单胞菌P2
‑
1，LB培养基组成：蛋白胨10g，酵母粉5g，NaCl 5g，水1000mL，pH 7.2
‑
7.4。
[0016]进一步的，所述步骤a中，活化条件：28
‑
30℃，180r/min振荡培养24h，得种子液。
[0017]进一步的，所述步骤c中，种子液接种到液体发酵培养基的接种比例为5％。
[0018]进一步的，所述步骤c中，培养条件：罐压0.04
‑
0.06Mpa，温度28
‑
30℃，搅拌转速120
‑
150r/min，通气量按1：0.8
‑
1：1.2，培养36
‑
48h。
[0019]进一步的，所述步骤d中，将发酵液用灭菌的硅藻土或草炭土按15
‑
20％的比例吸附。
[0020]本专利技术将绿针假单胞菌P2
‑
1制成发酵液，将发酵液稀释500倍，对蔬菜植株进行灌根处理，间隔7天施用一次，连续2
‑
3次。
[0021]本专利技术的有益效果在于：
[0022]本专利技术提供的生防假单胞菌，具体为绿针假单胞菌(Pseudomonas chlororaphis)P2
‑
1，该菌株在土壤中有较高的分离频率，其对集约化设施栽培土壤环境具有很强的适应性，通过对镰刀菌(Fusarium spp.)、疫霉菌(Phytophthora spp.)、丝核菌(Rhizocto本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种绿针假单胞菌，其特征在于，为绿针假单胞菌(Pseudomonas chlororaphis)P2
‑
1，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.23576，保藏日期为2021年10月12日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。2.如权利要求1所述的绿针假单胞菌在设施蔬菜土壤微生态调控上的应用。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，将绿针假单胞菌P2
‑
1制成可湿性粉剂，可湿性粉剂中有效活菌数≥20
×
108cfu/g。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述可湿性粉剂的制备包括以下步骤：a.将绿针假单胞菌P2
‑
1接种到培养基中活化；b.制备液体发酵培养基：玉米粉60g、豆饼粉10g、葡萄糖15g、硫酸铵2g、碳酸钙2g、磷酸氢二钠2g、硫酸亚铁0.5g、硫酸镁0.5g，水1000mL，pH 7.2
‑
7.4，121℃湿热灭菌60min，冷却备用；c.将步骤a活化后的种子液接种到步骤b的液体发酵培养基上培养；d.将步骤c培养后的发酵液用灭菌的硅藻土或草炭土吸附，即得可湿性粉剂。5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述步骤a中，使用NA培养基活化绿针假单胞菌P2
‑
1，NA培养基组成：牛肉膏3.0g，蛋白胨1...

【专利技术属性】
技术研发人员：张广志，谢雪迎，赵晓燕，范素素，周红姿，张新建，吴晓青，周方园，
申请(专利权)人：山东省科学院生态研究所山东省科学院中日友好生物技术研究中心，
类型：发明
国别省市：