抗体药物缀合物纯化制造技术

本发明专利技术涉及具有基于氨基酸的端基的离子交换分离材料。该材料特别适用于分离和纯化ADC。ADC。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗体药物缀合物纯化


[0001]本专利技术涉及具有基于氨基酸的端基的离子交换分离材料。该材料特别适用于分离和纯化ADC。

技术介绍

[0002]抗体药物缀合物(ADC)是一类新的高效药物，通常专用于癌症治疗。在这些缀合物中，抗体分子专用于癌细胞的特异性识别，由抗体分子携带的毒性有效载荷破坏它们。可商购获得的ADC的实例是Adcetris
®
和Kadcyla
®
。
[0003]这些新药是通过将毒性分子(有效载荷)缀合在抗体分子上而制造。这通常通过用暴露于抗体表面上的特定氨基酸残基(例如：赖氨酸或半胱氨酸键还原后的半胱氨酸)受控的化学缀合方法来实现。两种方法都产生具有可变的药物与抗体比率(DAR)的ADC物类的异质混合物。赖氨酸缀合途径产生超过100种可能性，并将导致不同DAR (0、1、2、3、4
…
、>10)的异质群体。半胱氨酸缀合的途径将导致利用抗体的4个二硫键的偶数DAR (例如0、2、4、6和8)的群体。为了使ADC物类的异质性最小化，可以使用位点特异性缀合方法。这些方法对与抗体连接的有效载荷分子的精确数目和位置具有更好的控制，但是由于缀合的毒性分子的量有限(例如通常仅2个)和缀合位点的选择有限而具有挑战性，因为其可能影响药物的功效。为了克服ADC异质性中的制造挑战，一些色谱技术可以用于去除不期望的低DAR和高DAR物类。低DAR物类是不期望的，因为它们与抗体药物缀合物竞争并降低药物的功效。携带DAR物类的高毒性有效载荷(>6)也是不期望的，因为它们对药物效率和寿命有作用(K.J. Hamblett等人, Clinical Cancer Research 10 (2004) 7063
‑
7070)。关于ADC的进一步信息可以在Rachel S. Zolot, Satarupa Basu, Ryan P. Million. Antibody
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drug conjugates. Nature reviews Drug Discovery. 2013, 12：259
‑
260中找到。关于示例性ADC的细节可以在WO 2011/139985，尤其是实施例8中找到。
[0004]疏水相互作用色谱法有时应用于ADC物类缀合后方法的纯化(US15104359)。不幸的是，由于在高盐浓度溶液中ADC稳定性低和结合能力低(约10 mg/ml)，引起纯化成本高和纯化效率低，该方法受到限制。因此，在工业上越来越需要增强ADC药物的效率，主要获得DAR2和DAR4物类，并能够获得最佳的药物动力学、功效、半衰期和耐受性。
[0005]因此，找到提供稳健和可靠的抗体药物缀合物纯化步骤的方法将是有利的，该方法可有效地应用于广泛的条件，其中不同的DAR物类被有效地分离。这对于降低纯化成本也是有益的。

技术实现思路

[0006]已经发现，携带共价附着的亮氨酸残基或类似残基的离子交换材料可以用于纯化ADC，能够在>10 mg ADC/ml材料容量下进行有效的DAR (药物抗体比率)物类分离，其中在更优选的实施方案中，所述容量在10
‑
80 mg/ml之间。此外，这种创新的离子交换材料可以以>10 mS/cm的高电导率使用，其中在更优选的实施方案中，电导率在10
‑
40 mS/cm之间。令
人惊奇的是，可以使用溶剂pH梯度分离每个单独的DAR物类，而不管它们的缀合程序如何。此外，与疏水相互作用或羟基磷灰石材料相比，应用这种创新的离子交换材料显示显著的经济优势，确保>90%的产物回收率。
[0007]因此，本专利技术涉及用于离子交换色谱法的分离材料，其基于含羟基的基础基质，聚合物链通过共价键合接枝到所述基础基质的表面，其特征在于a)基础载体含有羟基，b)所述聚合物链共价键合到所述载体，c)所述聚合物链包含氨基酸端基
‑
N(Y)
‑
R3，其中Y彼此独立地为H或CH3，优选H，和R3为
‑
CHCOOMR4其中R4为C1
‑
C4烷基(如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基，优选异丙基和异丁基，非常优选异丁基)或C1
‑
C4全氟烷基并且M为H、Na、K或NH4+。
[0008]优选地，所述聚合物链的单体单元以线性方式连接，并且每个单体单元包含端基
‑
N(Y)
‑
R3。
[0009]优选地，离子密度在10
‑
1200 μeq/g之间。
[0010]在优选的实施方案中，Y为H并且R4为异丙基和/或异丁基。
[0011]在优选的实施方案中，所述含羟基的基础基质包含脂族羟基。
[0012]在优选的实施方案中，所述基础基质是通过至少一种选自a)和b)的化合物的共聚形成的共聚物，其中a)至少一种式I的亲水取代的烷基乙烯基醚其中R1、R2、R3彼此独立地可以是H或C1
‑
C6烷基，优选H或
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CH3，并且R4为携带至少一个羟基的基团和b)至少一种符合式II和/或III和/或IV的交联剂，其中X为具有2
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5个C原子，优选2或3个C原子的二价烷基，其中一个或多个不相邻的且不位于N直接邻近的亚甲基可以被O、C=O、S、S=O、SO2、NH、NOH或N代替，并且亚甲基的一个或多个H原子可以彼此独立地被羟基、C1
‑
C6
‑
烷基、卤素、NH2、C5
‑
C10
‑
芳基、NH
‑
(C1
‑
C8)
‑
烷基、N
‑
(C1
‑
C8)
‑
烷基2、C1
‑
C6
‑
烷氧基或C1
‑
C6
‑
烷基
‑
OH取代，和
其中在式III和IV中的Y1和Y2彼此独立地为C1
‑
C10烷基或环烷基，其中一个或多个不相邻的亚甲基或不位于N直接邻近的亚甲基可以被O、C=O、S、S=O、SO2、NH、NOH或N代替，并且亚甲基的一个或多个H可以彼此独立地被羟基、C1
‑
C6
‑
烷基、卤素、NH2、C5
‑
C10
‑
芳基、NH(C1
‑
C8)烷基、N(C1
‑
C8)烷基2、C1
‑
C6
‑
烷氧基或C1
‑
C6
‑
烷基
‑
OH取代，或C6
‑
C18芳基，其中芳基系统中的一个或多个H可以彼此独立地被羟基、C1
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C6
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1. 分离材料，其包含含羟基的基础基质，聚合物链通过共价键合接枝到所述基础基质的表面，其特征在于所述聚合物链包含氨基酸端基
‑
N(Y)
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R3，其中a. Y彼此独立地为H或CH3，优选H，和b. R3为
‑
CHCOOMR4其中R4为C1‑
C4烷基或C1‑
C4全氟烷基并且M为H、Na、K或NH4。2.根据权利要求1所述的分离材料，其中所述聚合物链的单体单元以线性方式连接，并且每个单体单元包含端基
‑
N(Y)
‑
R3。3.根据权利要求1
‑
2中一项或多项所述的分离材料，其中离子密度在400
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900μeq/g之间。4.根据权利要求1
‑
3中一项或多项所述的分离材料，其中Y为H并且R4为异丙基和/或异丁基。5.根据权利要求1
‑
4中一项或多项所述的分离材料，其中所述含羟基的基础基质包含脂族羟基。6. 根据权利要求1
‑
5中一项或多项所述的分离材料，其中所述基础基质通过亲水取代的烷基乙烯基醚与作为交联剂的二乙烯基亚乙基脲(1,3
‑
二乙烯基咪唑啉
‑2‑
酮)的共聚而形成，所述亲水性取代的烷基乙烯基醚选自1,4
‑
丁二醇单乙烯基醚、1,5
‑
戊二醇单乙烯基醚、二甘醇单乙烯基醚或环己烷二甲醇单乙烯基醚。7.根据权利要求1
‑
6中一项或多项所述的分离材料，其中所述分离材料可通过使所述含羟基的基础...

【专利技术属性】
技术研发人员：R，
申请(专利权)人：默克专利股份公司，
类型：发明
国别省市：