一种吡仑帕奈遗传毒性杂质的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种吡仑帕奈遗传毒性杂质的检测方法。本发明专利技术具有较高的系统适用性，同时在专属性、定量限、检测限、线性范围以及重复性上表现出无可拟比的优势，具有较高的精密度。度。

【技术实现步骤摘要】
一种吡仑帕奈遗传毒性杂质的检测方法


[0001]本专利技术属于化学药物分析检测领域，具体涉及一种吡仑帕奈遗传毒性杂质的检测方法。

技术介绍

[0002]吡仑帕奈(Perampanel)，化学名为3
‑
(2
‑
氰基苯基)
‑5‑
(2
‑
吡啶基)
‑1‑
苯基
‑
1，2
‑
二氢吡啶
‑2‑
酮四分之三水合物，是一种非竞争性AMPA谷氨酸盐受体拮抗剂，由Eisai公司开发，于2012年7月和10月分别由欧盟EMA和美国食品与药物管理局(FDA)批准用于对12岁以上、伴有或不伴有继发性全身大发作的部分发作癫痫病患者进行辅助治疗，商品名为FYCOMPA。片剂规格有2mg、4mg、6mg、8mg、10mg和12mg 6种规格，目前进口的吡仑帕奈片(卫康泰)2mg和4mg已在国内销售。吡仑帕奈目前已知的主要杂质为杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、中间体Ⅲ和中间体Ⅳ等，来自于中间体以及降解产物，结构式如下：
[0003][0004]其中杂质B为氮氧化物，具有遗传毒性警示结构。按ICH M7和中国药典2020年版四部通则9306遗传毒性杂质控制指导原则，按TTC 1.5μg/天计算，杂质B限度为125ppm。在吡仑帕奈中需对杂质B进行检测，以期达到标准要求。
[0005]遗传毒性杂质限度较低，检测方法大多还会使用LC
‑
MS或GC
‑
MS进行检测；由于LC
‑
MS或GC
‑
MS仪器较昂贵，大多药企QC部门不具备LC
‑
MS或GC
‑
MS的检测条件，故开发常规液相
色谱方法检测遗传毒性杂质更具有实用性。

技术实现思路

[0006]专利技术目的：本专利技术的目的是提供一种吡仑帕奈遗传毒性杂质检测方法，使其专属性、定量限、检测限、线性范围、重复性、准确度等方面完全符合标准并且具有较高的精密度。
[0007]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种吡仑帕奈遗传毒性杂质检测方法，通过液相色谱法检测吡仑帕奈中遗传毒性杂质的含量；
[0008]所述遗传毒性杂质为杂质B，化学名称为3
‑
(2
‑
氰基苯基)
‑5‑
(2
‑
N
‑
氧吡啶基)
‑1‑
苯基
‑
1,2
‑
二氢吡啶
‑2‑
酮，结构式如下：
[0009][0010]优选的，该检测方法最低能定量检测6.6ppm的吡仑帕奈遗传毒性杂质，杂质B。
[0011]具体地，本专利技术所提供的一种吡仑帕奈遗传毒性杂质检测方法，包括如下步骤：
[0012]1)配制供试品溶液
[0013]取吡仑帕奈样品50mg，精密称定，置于10ml量瓶中，加N，N
‑
二甲基甲酰胺1ml，振摇使溶解，加乙腈6ml后用水稀释至刻度，摇匀过滤，取续滤液；
[0014]2)配制对照品溶液
[0015]精密称取遗传毒性杂质适量，加入稀释液溶解并稀释成每1ml含12.5μg的溶液，作为对照品母液；精密量取对照品母液适量，置量瓶中，加空白溶液稀释成每1ml含遗传毒性杂质0.63μg的溶液。
[0016]3)分别精密量取供试品溶液和对照品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，采用外标法以峰面积计算供试品溶液中杂质B的含量。
[0017]具体地，所述步骤2)中的空白溶液配置方法为：量取N，N
‑
二甲基甲酰胺1ml，乙腈6ml，置同一10ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。
[0018]具体地，所述步骤2)中的稀释液为体积比50：50的乙腈和水的混合液。
[0019]具体地，所述步骤3)中计算公式为：
[0020][0021]其中：
[0022]式中：f—响应因子；m
S
—对照品溶液中杂质B的称样量；c
S
—杂质B的含量；V
S
—对照品溶液中杂质B总稀释体积；A
S
—对照品溶液色谱图中杂质B的峰面积f
平均
—响应因子的
平均值；A
i
—供试品中杂质B的峰面积；m
i
—供试品称样量；V
i
—供试品稀释体积。
[0023]优选的，所述液相色谱的检测条件为：
[0024]色谱柱：Agela C18色谱柱，规格为4.6mm*250mm，5μm；
[0025]流动相A：0.01mol/L磷酸二氢钾溶液，磷酸调节pH值为3.0；
[0026]流动相B：乙腈；
[0027]洗脱方式：梯度洗脱；
[0028]流速：1.0mL/min；
[0029]柱温：30℃；
[0030]检测波长：220nm；
[0031]进样量：20μL。
[0032]具体地，在梯度洗脱的过程中，洗脱程序为：
[0033]时间(min)流动相A(％)流动相B(％)08020155050202080302080318020408020
[0034]有益效果：(1)本专利技术采用乙腈
‑
磷酸二氢钾溶液梯度洗脱体系，使得杂质B和吡仑帕奈以及其他杂质均能有效分离，且峰型对称性较好，利于杂质B的检出，具有较高的系统适用性；(2)本专利技术在专属性、定量限、检测限、线性范围以及重复性上表现出无可拟比的优势，具有较高的精密度。
附图说明
[0035]图1是检查空白溶剂液相色谱图；
[0036]图2是检查混合溶液液相色谱图；
[0037]图3是检查对照品溶液液相色谱图；
[0038]图4是检查供试品溶液液相色谱图；
[0039]图5是检查总杂质混合溶液液相色谱图；
[0040]图6是对照品溶液中杂质B的标准曲线图。
具体实施方式
[0041]为了加深对本专利技术的理解，下面将结合实施例和附图对本专利技术作进一步详述，该实施例仅用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术保护范围的限定。
[0042]下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0043]依照本专利技术所述检测方法，主要针对杂质B的检测，用外标法进行计算。
[0044]本专利技术所述检测方法在实施方式中采用的仪器与试剂信息见下表：
[0045][0046]实施例1
[0047]本实施例提供一种吡仑帕奈遗传毒性杂质检测方法。
[0048]1、色谱条件：
[0049]仪器：Agilent 1100
[0050]色谱柱：Agela C18柱(4.6mm
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种吡仑帕奈遗传毒性杂质的检测方法，其特征在于，通过液相色谱法检测吡仑帕奈中遗传毒性杂质的含量；所述遗传毒性杂质为3
‑
(2
‑
氰基苯基)
‑5‑
(2
‑
N
‑
氧吡啶基)
‑1‑
苯基
‑
1,2
‑
二氢吡啶
‑2‑
酮，结构式如下：2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，该检测方法最低定量检测6.6ppm的吡仑帕奈遗传毒性杂质。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：1)配制供试品溶液取吡仑帕奈样品50mg，精密称定，置于10ml量瓶中，加N，N
‑
二甲基甲酰胺1ml，振摇使溶解，加乙腈6ml后用水稀释至刻度，摇匀过滤，取续滤液；2)配制对照品溶液精密称取遗传毒性杂质适量，加入稀释液溶解并稀释成每1ml含12.5μg的溶液，作为对照品母液；精密量取对照品母液适量，置量瓶中，加空白溶液稀释成每1m...

【专利技术属性】
技术研发人员：王君，庞俊霞，
申请(专利权)人：南京华威医药科技集团有限公司，
类型：发明
国别省市：