特异性识别神经生长因子的抗体及其用途制造技术

本申请涉及特异性地识别神经生长因子(NGF)的抗体或抗原结合片段，及其制备方法和用途。用途。用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】特异性识别神经生长因子的抗体及其用途
[0001]以ASCII TEXT文本文件提交序列表
[0002]以下提交的ASCII TEXT文本文件的内容通过整体引用并入本文中：计算机可读形式(CRF)的序列表(文本名称：抗NGF抗体_序列_表.txt，记录日期：2020.04.22，大小：33KB)


[0003]本申请提供特异性识别神经生长因子(NGF)的抗体，及其制备方法和用途，包括用其治疗神经生长因子相关疾病的方法。

技术介绍

[0004]神经生长因子(NGF)最初被认为是一种促进发育中的鸡胚神经元生长的蛋白质(Bueker 1948)。现已经知道NGF属于神经营养蛋白家族(neurotrophin，NT)，这是一组结构上相关的蛋白质，包括脑源性神经营养因子(BDNF)、神经营养蛋白
‑
3(NT
‑
3)和神经营养蛋白
‑
4/5(NT
‑
4/5)。它们都是分泌型蛋白质，对周围神经系统的正常发育、模式化和维护是至关重要的。所有的神经营养蛋白都有一个共同的受体，即p75，而每一种神经营养蛋白特异性地结合不同的Trk受体亚型(A、B和C)(Huang and Reichardt,2003；Kalb,2005)。NGF结合受体p75和TrkA。
[0005]在健康人中，皮下注射NGF可在几分钟内引起局部的疼痛和痛觉过敏(Petty等人，1994)。即使是低剂量系统性给予NGF也会导致肌痛。这表明NGF对伤害性感受器具有激活或敏化作用。在转基因小鼠中，慢性收缩性损伤后，由神经胶质蛋白启动子驱动的NGF体内过表达可导致神经病理性疼痛行为的增强和神经元的萌发，这证明了NGF与神经病理性疼痛和背根神经节(DRG)中交感神经萌发之间的联系。NGF促进交感神经元的萌发和伤害性感受神经元异常神经支配的形成，这被认为有助于慢性伤害性感受/疼痛状态的诱导和维持(Ramer等人，1998，1999)。在临床前研究发现，注射CFA和角叉菜聚糖的动物中，NGF水平局部升高(Ma等人，2000)。组织受损释放的NGF及其随后在外周的作用被认为在诱导热痛觉过敏方面起主要作用。这一过程被称为"外周敏化"(Mendell等人，2002)。NGF与其高亲和力受体TrkA结合，内化和反向输送到DRG的伤害性感受细胞体后，启动伤害性感受神经肽(如P物质、CGRP)的分泌，在脊髓的背角中激活PKC(Sah等人，2003)。这是一个与"中枢敏化"相关的过程。因此，中和NGF与其受体的结合是一种治疗NGF介导的疾病和病患的方法。因此，抗NGF抗体是一种治疗由NGF表达增加或对NGF敏感性增加引起的疾病的方法。针对NGF的抗体，Tanezumab(辉瑞，Pfizer)在美国专利U.S.Pat.No.7,449,616中描述以及Fulranumab(安进，Amgen)在PCT公开号WO 2005/019266中描述。
[0006]本文提及的所有出版物、专利、专利申请和已公开的专利申请中披露的内容，以引用方式全部并入本文中。
[0007]申请概述
[0008]本申请提供一种分离的能够特异性地与NGF结合的抗NGF抗体，及其用于治疗NGF相关疾病的方法。
[0009]在一些实施例中，如上所述任一种分离的抗NGF抗体，所述分离的抗NGF抗体包括重链可变域(V
H
)，所述V
H
包含：一个包含序列TYWIS(SEQ ID NO:1)的重链互补决定区(HC
‑
CDR)1；一个包含序列AIDPSDSDARYSPSFQG(SEQ ID NO:2)的HC
‑
CDR2；和一个包含序列SDPGYSGYSLLYGFDS(SEQ ID NO:3)的HC
‑
CDR3，或者在HC
‑
CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V
H
变体；以及轻链可变域(V
L
)，所述V
L
包含：一个包含序列RSSQSLVQRNX1NTYLS(SEQ ID NO:30)的轻链互补决定区(LC
‑
CDR)1，其中X1为任何氨基酸；一个包含序列QVSNRYS(SEQ ID NO:5)的LC
‑
CDR2；和一个包含序列GQGAHLPLT(SEQ ID NO:6)的LC
‑
CDR3，或者在LC
‑
CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V
L
变体。
[0010]在一些实施例中，如上所述任一种分离的抗NGF抗体，所述分离的抗NGF抗体包括重链可变域(V
H
)，所述V
H
包含：一个包含序列TYWIS(SEQ ID NO:1)的重链互补决定区(HC
‑
CDR)1；一个包含序列AIDPSDSDARYSPSFQG(SEQ ID NO:2)的HC
‑
CDR2；和一个包含序列SDPGYSGYSLLYGFDS(SEQ ID NO:3)的HC
‑
CDR3，或者在HC
‑
CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V
H
变体；以及轻链可变域(V
L
)，所述V
L
包含：一个包含序列RSSQSLVQRNX1NTYLS(SEQ ID NO:39)的轻链互补决定区(LC
‑
CDR)1，其中X1为G、A、S或T；一个包含序列QVSNRYS(SEQ ID NO:5)的LC
‑
CDR2；和一个包含序列GQGAHLPLT(SEQ ID NO:6)的LC
‑
CDR3，或者在LC
‑
CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V
L
变体。
[0011]在一些实施例中，如上所述任一种分离的抗NGF抗体，所述分离的抗NGF抗体包括重链可变域(V
H
)，所述V
H
包含：一个包含序列TYWIS(SEQ ID NO:1)的重链互补决定区(HC
‑
CDR)1；一个包含序列AIDPSDSDARYSPSFQG(SEQ ID NO:2)的HC
‑
CDR2；和一个包含序列SDPGYSGYSLLYGFDS(SEQ ID NO:3)的HC
‑
CDR3，或者在HC
‑
CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V
H
变体；以及轻链可变域(V
L
)，所述V
L
包含：一个包含序列RSSQSLVQRNGNTYLS(SEQ ID NO:4)或RSSQSLVQRNANTYLS(SEQ ID NO:7)的轻链互补决定区(LC
‑
CDR)1；一个包含序列QVSNRYS(SEQ ID NO:5)的LC
‑
CDR2；和一个包含序列GQGAHLPLT(SE本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种分离的抗NGF抗体，其中抗NGF抗体包括：重链可变域V
H
，所述重链可变域V
H
包含：一个包含序列TYWIS(SEQ ID NO:1)的重链互补决定区HC
‑
CDR1，一个包含序列AIDPSDSDARYSPSFQG(SEQ ID NO:2)的HC
‑
CDR2，和一个包含序列SDPGYSGYSLLYGFDS(SEQ ID NO:3)的HC
‑
CDR3，或者在HC
‑
CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V
H
变体；以及轻链可变域V
L
，所述轻链可变域V
L
包含：一个包含序列RSSQSLVQRNGNTYLS(SEQ ID NO:4)或RSSQSLVQRNANTYLS(SEQ ID NO:7)的轻链互补决定区LC
‑
CDR1，一个包含序列QVSNRYS(SEQ ID NO:5)的LC
‑
CDR2，和一个包含序列GQGAHLPLT(SEQ ID NO:6)的LC
‑
CDR3，或者在LC
‑
CDRs中包含至多5个氨基酸取代的V
L
变体。2.一种分离的抗NGF抗体，包括V
H
，其包含具有SEQ ID NOs:8
‑
13中任一氨基酸序列的V
H
中的HC
‑
CDR1、HC
‑
CDR2和HC
‑
CDR3；以及V
L
，其包含具有SEQ ID NOs:14
‑
24中任一氨基酸序列的V
L
中的LC
‑
CDR1、LC
‑
CDR2和LC
‑
CDR3。3.根据权利要求1
‑
2中任一项所述的分离的抗NGF抗体，其中所述抗NGF抗体与神经生长因子结合的Kd值为0.1pM至1nM。4.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的分离的抗NGF抗体，包括：V
H
，其包含SEQ ID NOs:8
‑
13中任一氨基酸序列或包含与SEQ ID NOs:8
‑
13中任一氨基酸序列具有至少90％序列同源性的变体序列；以及V
L
，其包含SEQ ID NOs:14
‑
24中任一氨基酸序列或包含与SEQ ID NOs:14
‑
24中任一氨基酸序列具有至少90％序列同源性的变体序列。5.根据权利要求4中所述的分离的抗NGF抗体，包括：(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:8的V
H
和包含氨基酸序列SEQ ID NO:17的V
L
；(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:8的V
H
和包含氨基酸序列SEQ ID NO:19的V
L
；(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:8的V
H
和包含氨基酸序列SEQ ID NO:23的V
L
；(iv)包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的V
H
和包含氨基酸序列SEQ ID NO:19的V
L
；(v)包含氨基酸序列SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：李萃，晏丽，黄群，
申请(专利权)人：舒泰神北京生物制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：