通过以限定的组织形式靶向整合多个表达盒来产生多价双特异性抗体表达细胞的方法技术

本文报道了一种用于产生多价双特异性抗体的方法，所述方法包括以下步骤：培养包含编码所述多价双特异性抗体的脱氧核糖核酸的哺乳动物细胞，并从所述细胞或培养基中回收所述多价双特异性抗体，其中编码所述多价双特异性抗体的所述脱氧核糖核酸稳定地整合到所述哺乳动物细胞的基因组中，并在5'至3'方向上包含编码第一重链的第一表达盒、编码第一轻链的第二表达盒、编码第一轻链的第三表达盒、编码第二重链的第四表达盒、编码第一轻链的第五表达盒和编码第一轻链的第六表达盒，其中所述第一重链从N末端到C末端包含第一重链可变结构域、CH1结构域、第一重链可变结构域、CH1结构域、铰链区、CH2结构域、CH3结构域和第一轻链可变结构域，所述第二重链从N末端到C末端包含第一重链可变结构域、CH1结构域、第一重链可变结构域、CH1结构域、铰链区、CH2结构域、CH3结构域和第二重链可变结构域，并且所述第一轻链从N末端到C末端包含第二轻链可变结构域和CL结构域，其中所述第一重链可变结构域和所述第二轻链可变结构域形成第一结合位点，并且所述第二重链可变结构域和所述第一轻链可变结构域形成第二结合位点。成第二结合位点。成第二结合位点。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】通过以限定的组织形式靶向整合多个表达盒来产生多价双特异性抗体表达细胞的方法


[0001]本专利技术属于细胞系产生和多肽生产领域。更准确地说，本文报道了重组哺乳动物细胞，其已通过双重组酶介导的盒式交换反应获得，导致特异性表达盒序列整合到哺乳动物细胞的基因组中。所述细胞可以用于产生多价双特异性抗体的方法中。

技术介绍

[0002]分泌的和糖基化的多肽(诸如抗体)通常通过在真核细胞中重组表达(稳定表达或瞬时表达)而产生。
[0003]用于产生表达目的外源性多肽的重组细胞的一种策略涉及随机整合编码目的多肽的核苷酸序列，随后是选择步骤和分离步骤。然而，这种方法具有若干缺点。第一，核苷酸序列照此功能性整合到细胞基因组中不仅是罕见的事件，而且考虑到核苷酸序列整合的随机性，这些罕见事件导致多种基因表达表型和细胞生长表型。此类变化称为“位置效应变化”，至少部分地源于真核细胞基因组中存在的复杂基因调控网络以及用于整合和基因表达的某些基因组基因座的可及性。第二，随机整合策略通常无法提供对整合到细胞基因组中的核苷酸序列拷贝数的控制。事实上，通常采用基因扩增方法本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于产生多价双特异性抗体的方法，其包括以下步骤：a)培养包含编码所述多价双特异性抗体的脱氧核糖核酸的哺乳动物细胞，以及b)从所述细胞或培养基中回收所述多价双特异性抗体，其中编码所述多价双特异性抗体的所述脱氧核糖核酸稳定地整合到所述哺乳动物细胞的基因组中并且在5'至3'方向上包含(1)
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编码第一重链的第一表达盒，
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编码第一轻链的第二表达盒，
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编码第一轻链的第三表达盒，
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编码第二重链的第四表达盒，
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编码第一轻链的第五表达盒，和
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编码第一轻链的第六表达盒，或者(2)
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编码第一重链的第一表达盒，
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编码第一轻链的第二表达盒，
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编码第一轻链的第三表达盒，
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编码第一轻链的第四表达盒，
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编码第二重链的第五表达盒，
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编码第一轻链的第六表达盒，
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编码第一轻链的第七表达盒，和
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编码第一轻链的第八表达盒。2.一种编码多价双特异性抗体的脱氧核糖核酸，其在5'至3'方向上包含(1)
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编码第一重链的第一表达盒，
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编码第一轻链的第二表达盒，
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编码第一轻链的第三表达盒，
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编码第二重链的第四表达盒，
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编码第一轻链的第五表达盒，和
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编码第一轻链的第六表达盒，或者(2)
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编码第一重链的第一表达盒，
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编码第一轻链的第二表达盒，
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编码第一轻链的第三表达盒，
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编码第一轻链的第四表达盒，
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编码第二重链的第五表达盒，
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编码第一轻链的第六表达盒，
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编码第一轻链的第七表达盒，和
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编码第一轻链的第八表达盒。3.脱氧核糖核酸用于在哺乳动物细胞中表达多价双特异性抗体的用途，所述脱氧核糖核酸在5'至3'方向上包含
(1)
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编码第一重链的第一表达盒，
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编码第一轻链的第二表达盒，
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编码第一轻链的第三表达盒，
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编码第二重链的第四表达盒，
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编码第一轻链的第五表达盒，和
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编码第一轻链的第六表达盒，或者(2)
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编码第一重链的第一表达盒，
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编码第一轻链的第二表达盒，
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编码第一轻链的第三表达盒，
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编码第一轻链的第四表达盒，
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编码第二重链的第五表达盒，
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编码第一轻链的第六表达盒，
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编码第一轻链的第七表达盒，和
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编码第一轻链的第八表达盒。4.一种重组哺乳动物细胞，其包含编码整合在细胞的基因组中的多价双特异性抗体的脱氧核糖核酸，其中编码所述多价双特异性抗体的所述脱氧核糖核酸在5'至3'方向上包含(1)
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编码第一重链的第一表达盒，
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编码第一轻链的第二表达盒，
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编码第一轻链的第三表达盒，
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编码第二重链的第四表达盒，
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编码第一轻链的第五表达盒，和
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编码第一轻链的第六表达盒，或者(2)
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编码第一重链的第一表达盒，
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编码第一轻链的第二表达盒，
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编码第一轻链的第三表达盒，
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编码第一轻链的第四表达盒，
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编码第二重链的第五表达盒，
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编码第一轻链的第六表达盒，
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编码第一轻链的第七表达盒，和
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编码第一轻链的第八表达盒。5.一种包含两种脱氧核糖核酸的组合物，所述两种脱氧核糖核酸进而包含三种不同的重组识别序列以及六个或八个表达盒，其中
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第一脱氧核糖核酸在5'至3'方向上包含，(1)
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第一重组识别序列，
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编码第一重链的第一表达盒，
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编码第一轻链的第二表达盒，
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编码第一轻链的第三表达盒，和
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第三重组识别序列的第一拷贝，或者(2)
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第一重组识别序列，
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编码第一重链的第一表达盒，
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编码第一轻链的第二表达盒，
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编码第一轻链的第三表达盒，
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编码第一轻链的第四表达盒，和
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第三重组识别序列的第一拷贝，并且
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第二脱氧核糖核酸在5'至3'方向上包含(1)
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第三重组识别序列的第二拷贝，
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编码第二重链的第四表达盒，
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编码第一轻链的第五表达盒，
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编码第一轻链的第六表达盒，和
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第二重组识别序列，或者(2)
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第三重组识别序列的第二拷贝，
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编码第二重链的第五表达盒，
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编码第一轻链的第六表达盒，
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编码第一轻链的第七表达盒，
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编码第一轻链的第八表达盒，和
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第二重组识别序列。6.一种用于产生包含编码多价双特异性抗体的脱氧核糖核酸并分泌所述多价双特异性抗体的重组哺乳动物细胞的方法，其包括以下步骤：a)提供包含整合在哺乳动物细胞的基因组的基因座内的单个位点处的外源核苷酸序列的所述哺乳动物细胞，其中所述外源核苷酸序列包含侧接至少一个第一选择标志物的第一重组识别序列和第二重组识别序列，以及位于所述第一重组识别序列与所述第二重组识别序列之间的第三重组识别序列，并且所有的所述重组识别序列都不同；b)向a)中所提供的细胞中引入两种脱氧核糖核酸的组合物，所述两种脱氧核糖核酸包含三种不同的重组识别序列以及六或八个表达盒，其中
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第一脱氧核糖核酸在5'至3'方向上包含，(1)
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【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：豪夫迈，
类型：发明
国别省市：