一种分离检测N-卤代琥珀酰亚胺的方法技术

本发明专利技术涉及一种分离检测N

【技术实现步骤摘要】
一种分离检测N-卤代琥珀酰亚胺的方法


[0001]本专利技术涉及分析化学领域，具体涉及一种分离检测N-卤代琥珀酰亚胺的方法。

技术介绍

[0002]基因毒性杂质(或遗传毒性杂质，Genotoxic Impurity，GTI)是指化合物本身直接或间接损伤细胞DNA，产生基因突变或体内诱变，具有致癌可能或者倾向。N-卤代琥珀酰亚胺，也称N-卤代丁二酰亚胺，包括N-氯代琥珀酰亚胺(英文名为N-Chlorosuccinimide，简称NCS)、N-溴代琥珀酰亚胺(英文名为N-Bromosuccinimide，简称NBS)或N-碘代琥珀酰亚胺(英文名为N-Iodosuccinimide，简称NIS)，是药物合成反应中常用的中间体，经预测软件DEREK和SARAH预测结果显示为阳性，即为Ⅱ类基因毒性杂质，该类杂质活性高、不稳定，会对药物安全性产生重要影响，故需要对其进行严格的质量控制。
[0003]目前《美国药典》USP、《欧洲药典》EP、《日本药典》JP及《中国药典》Ch.P.均没有收载相应的分离检测方法，也无现有技术公开其检测方法。为了更好更准确地控制产品中的杂质，保证药品的质量，需要研究适合于药物中N-卤代琥珀酰亚胺的分析检测方法。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种分离检测药物中基因毒性杂质N-卤代琥珀酰亚胺的方法，从而实现药物中基因毒性杂质N-卤代琥珀酰亚胺的分离和测定。本专利技术提供的方法能够有效分离测定药物中基因毒性杂质N-卤代琥珀酰亚胺杂质的含量，方法的灵敏度高，专属性好，准确度可靠，可用于药物中基因毒性杂质N-卤代琥珀酰亚胺的质量控制。
[0005]一种分离检测N-卤代琥珀酰亚胺的方法，其包括：采用碱的水溶液与N-卤代琥珀酰亚胺进行水解反应，再以HPLC-MS检测其水解产物；检测时采用高强度硅胶颗粒为填料的色谱柱，流动相分为A相和B相，A相为乙腈，B相为酸的水溶液。
[0006]所述的N-卤代琥珀酰亚胺为N-氯代琥珀酰亚胺、N-溴代琥珀酰亚胺和N-碘代琥珀酰亚胺中的至少一种。
[0007]所述的碱选自NaOH、KOH或氨水中的一种。在一些实施例中，所述的碱选自NaOH或KOH，有利用水解反应的进行。
[0008]所述的碱的水溶液中，每1mL水可含所述碱0.5mg～5mg。
[0009]在一些实施例中，水解反应的时间可为0.5小时至12小时。在一些实施例中，水解反应的时间可为1小时至10小时。在一些实施例中，水解反应的时间可为2小时至8小时。
[0010]在一些实施例中，水解反应的温度可为5℃至100℃。在一些实施例中，水解反应的温度为15℃至90℃。在一些实施例中，水解反应的温度可为35℃至80℃。在一些实施例中，水解反应的温度为25℃至80℃。在一些实施例中，水解反应的温度为30℃，40℃，50℃，60℃，70℃或80℃。
[0011]所述色谱柱的填料为高强度硅胶颗粒(HSS)。
[0012]在一些实施例中，所述色谱柱可为Waters HSS T3。
[0013]在一些实施例中，B相中所述的酸的水溶液选自甲酸水溶液和乙酸水溶液中的至少一种。
[0014]在一些实施例中，B相中所述的酸与水的体积比(V/V)为1:1000至3:1000。在一些实施例中，B相中酸与水的体积比(V/V)为1:1000。
[0015]在一些实施例中，A相与B相的体积比为0:100至90:10。
[0016]在一些实施例中，A相与B相的体积比(V/V)为0-3min：流动相A:流动相B(V/V)＝0:100；3.1-10min：流动相A:流动相B(V/V)＝90:10。
[0017]在一些实施例中，所述的分离检测N-卤代琥珀酰亚胺的方法，可包括以下步骤或按以下步骤实现：
[0018]1)取含N-卤代琥珀酰亚胺的待测样品适量，加入溶剂溶解样品，再加入碱的水溶液，混匀，取上层溶液于室温至80℃下进行水浴，室温静置；
[0019]2)设置仪器参数：检测器、离子源、扫描模式、流动相的流速、柱温、样品盘的温度；
[0020]3)取一定量步骤1)的溶液，注入高效液相色谱质谱联用仪，完成N-卤代琥珀酰亚胺的分离测定。
[0021]步骤1)中所述的溶剂选自二氯甲烷、四氢呋喃和丙酮中的至少一种。
[0022]在一些实施例中，步骤1)中，所述的碱的水溶液中，每1mL水可含所述碱1.0mg～5mg。
[0023]步骤1)中，每1ml所述溶剂可含待测样品50mg～200mg。在一些实施例中，步骤1)中，每1ml所述溶剂含待测样品50mg。在一些实施例中，步骤1)中，每1ml所述溶剂含待测样品25mg，75mg，或100mg。
[0024]所述流动相的流速可为0.1ml/min～1.5ml/min。在一些实施例中，步骤2)中，流动相的流速为0.3ml/min。在一些实施例中，步骤2)中，流动相的流速为0.6ml/min。在一些实施例中，步骤2)中，流动相的流速为1.0ml/min。
[0025]步骤2)中，所述检测器为单重四极杆MS检测器。所述的离子源为ESI离子源。所述的扫描模式为SIM。
[0026]在一些实施例中，步骤2)中，离子源采用的离子极性为负离子模式，检测器选择离子为m/z＝116(-)。
[0027]步骤2)中，色谱柱柱箱温度为15℃～40℃。在一些实施例中，色谱柱柱箱温度为25℃；在一些实施例中，色谱柱柱箱温度为30℃；在一些实施例中，色谱柱柱箱温度为35℃。
[0028]步骤2)中，所述样品盘温度为4℃～30℃。在一些实施例中，样品盘温度为30℃。
[0029]步骤3)中，所述样品溶液进样量为2μl～20μl。在一些实施例中，所述样品溶液进样量为3μl。在一些实施例中，所述样品溶液进样量为5μl。
[0030]在一些实施例中，所述的分离检测N-卤代琥珀酰亚胺的方法，包括以下步骤或可按以下步骤实现：
[0031]1)取含N-卤代琥珀酰亚胺的待测样品适量，加入二氯甲烷溶解样品，再加入碱的水溶液，混匀，取上层溶液于室温至80℃条件下进行水浴，室温静置；
[0032]2)设置流动相的流速为0.1ml/min～1.5ml/min，检测器为MS(单重四极杆)检测器，离子源为ESI离子源，扫描模式为SIM，离子源的离子极性为负离子模式，检测器的选择离子为m/z＝116(-)，色谱柱柱箱温度为15℃至40℃，样品盘温度为4℃～30℃；
[0033]3)取步骤1)的样品溶液2μl～20μl，注入高效液相色谱质谱联用仪，完成N-卤代琥珀酰亚胺的分离测定。
[0034]高效液相色谱质谱联用仪可为美国Agilent 1260型高效液相色谱质谱联用系统及工作站或其他适宜可行的系统。
[0035]在一些实施例中，所述的一种分离检测N-卤代琥珀酰亚胺的方法，包括：采用碱的水溶液与N-卤代琥珀酰亚胺进行水解反应，再以HPLC-MS本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分离检测N-卤代琥珀酰亚胺的方法，其特征在于，包括：采用碱的水溶液与N-卤代琥珀酰亚胺进行水解反应，再以HPLC-MS检测其水解产物；检测时采用高强度硅胶颗粒为填料的色谱柱，流动相分为A相和B相，A相为乙腈，B相为酸的水溶液；所述的N-卤代琥珀酰亚胺选自N-氯代琥珀酰亚胺、N-溴代琥珀酰亚胺和N-碘代琥珀酰亚胺。2.根据权利要求1所述的方法，所述的碱为NaOH、KOH或氨水；和/或所述的碱的水溶液中每1mL水含碱0.5mg～5mg。3.根据权利要求1或2所述的方法，所述的水解反应温度为35℃至80℃；和/或所述的水解反应时间为0.5小时至12小时。4.根据权利要求1所述的方法，所述的色谱柱为Waters HSS T3。5.根据权利要求1所述的方法，所述的酸的水溶液选自甲酸水溶液和乙酸水溶液中的至少一种。6.根据权利要求1所述的方法，所述A相与B相的体积比为0:100至90:10。7.根据权利要求1或6所述的方法，所述A相与B相...

【专利技术属性】
技术研发人员：莫丽英，欧金玲，熊学武，巢燕芳，廖烘发，李艳华，王芳芳，黄芳芳，
申请(专利权)人：广东东阳光药业有限公司，
类型：发明
国别省市：