一种类蛇毒三肽的合成方法技术

本发明专利技术提供了一种类蛇毒三肽的合成方法，属于多肽制备方法技术领域，具体为：以Fmoc

【技术实现步骤摘要】
一种类蛇毒三肽的合成方法


[0001]本专利技术属于多肽制备方法
，具体涉及一种类蛇毒三肽的合成方法。

技术介绍

[0002]类蛇毒三肽(H
‑
β
‑
Ala
‑
Pro
‑
DAB
‑
NH
‑
Bzl)是一种模拟蛇毒毒素活性的小分子多肽，研究发现，类蛇毒三肽可通过松弛面部肌肉、减少肌肉收缩而达到平滑和祛皱的目的。目前欧美、韩国、泰国等国已经研发出含有类蛇毒三肽的化妆品，类蛇毒三肽作为化妆品新型的美容成分也越来越热门。
[0003]目前，常规合成类蛇毒三肽的方法大多为液相合成和固相合成，但是液相合成的方法步骤较多，比较繁琐，全部采用液相合成方法得到的类蛇毒三肽粗品的纯度不高，总产率也不高，后续纯化收率低；采用固相合成，纯化难度较大，收率也极低，采用固相合成或液相合成都不可避免各方法的局限性。因此开发工艺简便、成本较低、纯度高的类蛇毒三肽合成方法，对广泛使用于化妆品的类蛇毒三肽有重要意义。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于克服现有技术存在的不足，提供一种方法简单、收率高、产品纯度高的类蛇毒三肽的合成方法。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为：一种类蛇毒三肽的合成方法，包括下述步骤：S1、合成H
‑
Dab(Boc)
‑
NHBzl：在四氢呋喃中，Fmoc
‑
Dab(Boc)
‑
OH(Nα
‑
芴甲氧羰基
‑
Nγ
‑
叔丁氧羰基
‑
L
‑
2,4
‑
二氨基丁酸)、苄胺、NMM(N
‑
甲基吗啡啉)、EDCI(1
‑
乙基
‑
3(3
‑
二甲基丙胺)碳二亚胺)反应得到Fmoc
‑
Dab(Boc)
‑
NHBzl，然后用包含哌啶的四氢呋喃溶液脱除Fmoc保护基，得到H
‑
Dab(Boc)
‑
NHBzl；S2、合成Boc
‑
β
‑
Ala
‑
Pro
‑
OH：在四氢呋喃中，Boc
‑
β
‑
Ala
‑
OH(N
‑
叔丁氧羰基
‑
β
‑
丙氨酸)、H
‑
Pro
‑
OMe
·
HCl(L
‑
脯氨酸甲酯盐酸盐)、NMM、HOBT(1
‑
羟基苯并三唑)、EDCI反应得到Boc
‑
β
‑
Ala
‑
Pro
‑
OMe，然后用NaOH溶液水解得到Boc
‑
β
‑
Ala
‑
Pro
‑
OH；S3、合成Boc
‑
β
‑
Ala
‑
Pro
‑
Dab(Boc)
‑
NH
‑
Bzl：在四氢呋喃中，Boc
‑
β
‑
Ala
‑
Pro
‑
OH、H
‑
Dab(Boc)
‑
NHBzl、HOBT、EDCI反应得到Boc
‑
β
‑
Ala
‑
Pro
‑
Dab(Boc)
‑
NH
‑
Bzl；S4、合成类蛇毒三肽：将Boc
‑
β
‑
Ala
‑
Pro
‑
Dab(Boc)
‑
NH
‑
Bzl用三氟乙酸水溶液脱除Boc保护基，得到类蛇毒三肽粗品；S5、类蛇毒三肽粗品纯化：类蛇毒三肽粗品经粗品处理、高效液相色谱、阴离子交换色谱，得到高纯类蛇毒三
肽；其中，所述类蛇毒三肽粗品纯化过程中，阴离子交换色谱所用填料为改性聚甲基丙烯酸环氧丙酯
‑
三聚氰酸三烯丙酯(PGMA
‑
TCA)色谱填料。
[0006]本专利技术通过液相合成的方法，以Fmoc
‑
Dab(Boc)
‑
OH、苄胺、Boc
‑
β
‑
Ala
‑
OH和H
‑
Pro
‑
OMe
·
HCl为原料，经上述步骤合成类蛇毒三肽粗品，利用Fmoc
‑
Dab(Boc)
‑
OH与苄胺连接的方法消除了Dab的消旋问题，克服了CTC树脂的稳定性问题，合成工艺路线短，然后利用高效液相色谱、阴离子交换色谱相结合的方法对粗品进行纯化，得到纯度高于99％的类蛇毒三肽，同时也除去了三氟乙酸水溶液脱Boc保护基过程中带来的三氟乙酸，减少了类蛇毒三肽的损失，得率高，且未破坏类蛇毒三肽的生物活性，纯化效率高。
[0007]进一步地，所述步骤S1中，Fmoc
‑
Dab(Boc)
‑
OH、苄胺、NMM、EDCI的摩尔比为1:1.0～1.2:1.2～1.5:10～15。
[0008]进一步地，所述步骤S1中，四氢呋喃溶液中哌啶的体积分数为10～20％。
[0009]进一步地，所述步骤S2中，Boc
‑
β
‑
Ala
‑
OH、H
‑
Pro
‑
OMe
·
HCl、NMM、HOBT、EDCI的摩尔比为1:0.9～1.2:0.9～1.2:1.0～1.2:1.0～1.2。
[0010]进一步地，所述步骤S2中，NaOH溶液的质量分数为5～20%。
[0011]进一步地，所述步骤S3中，HOBT、EDCI的添加摩尔量分别为Boc
‑
β
‑
Ala
‑
Pro
‑
OH摩尔量的0.1～0.14倍、10～12倍。
[0012]进一步地，所述步骤S4中，三氟乙酸混合水溶液的质量分数为90～95%。
[0013]进一步地，所述步骤S1～S4中，反应温度均为室温。
[0014]进一步地，所述步骤S5中，粗品处理过程为：将类蛇毒三肽粗品加入到含有0.5～3vol%三氟乙酸的双蒸水中，用3.0～0.45μm的滤膜过滤，得到类蛇毒三肽粗品水溶液。
[0015]更进一步地，所述类蛇毒三肽粗品、含三氟乙酸的双蒸水的质量体积比为1g:20～50mL。
[0016]进本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种类蛇毒三肽的合成方法，其特征在于，包括下述步骤：S1、合成H
‑
Dab(Boc)
‑
NHBzl：在四氢呋喃中，Fmoc
‑
Dab(Boc)
‑
OH、苄胺、NMM、EDCI反应得到Fmoc
‑
Dab(Boc)
‑
NHBzl，然后用包含哌啶的四氢呋喃溶液脱除Fmoc保护基，得到H
‑
Dab(Boc)
‑
NHBzl；S2、合成Boc
‑
β
‑
Ala
‑
Pro
‑
OH：在四氢呋喃中，Boc
‑
β
‑
Ala
‑
OH、H
‑
Pro
‑
OMe
·
HCl、NMM、HOBT、EDCI反应得到Boc
‑
β
‑
Ala
‑
Pro
‑
OMe，然后用NaOH溶液水解得到Boc
‑
β
‑
Ala
‑
Pro
‑
OH；S3、合成Boc
‑
β
‑
Ala
‑
Pro
‑
Dab(Boc)
‑
NH
‑
Bzl：在四氢呋喃中，Boc
‑
β
‑
Ala
‑
Pro
‑
OH、H
‑
Dab(Boc)
‑
NHBzl、HOBT、EDCI反应得到Boc
‑
β
‑
Ala
‑
Pro
‑
Dab(Boc)
‑
NH
‑
Bzl；S4、合成类蛇毒三肽：将Boc
‑
β
‑
Ala
‑
Pro
‑
Dab(Boc)
‑
NH
‑
Bzl用三氟乙酸水溶液脱除Boc保护基，得到类蛇毒三肽粗品；S5、类蛇毒三肽粗品纯化：类蛇毒三肽粗品经粗品处理、高效液相色谱、阴离子交换色谱，得到高纯类蛇毒三肽；其中，所述类蛇毒三肽粗品纯化过程中，阴离子交换色谱所用填料为改性PGMA
‑
TCA色谱填料。2.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：王辉平，刘慧敏，傅小明，应佳伟，
申请(专利权)人：浙江湃肽生物有限公司深圳分公司，
类型：发明
国别省市：