一种类蛇毒三肽的合成方法技术

技术编号:31814866 阅读:19 留言:0更新日期:2022-01-08 11:18
本发明专利技术提供了一种类蛇毒三肽的合成方法,属于多肽制备方法技术领域,具体为:以Fmoc

【技术实现步骤摘要】
一种类蛇毒三肽的合成方法


[0001]本专利技术属于多肽制备方法
,具体涉及一种类蛇毒三肽的合成方法。

技术介绍

[0002]类蛇毒三肽(H

β

Ala

Pro

DAB

NH

Bzl)是一种模拟蛇毒毒素活性的小分子多肽,研究发现,类蛇毒三肽可通过松弛面部肌肉、减少肌肉收缩而达到平滑和祛皱的目的。目前欧美、韩国、泰国等国已经研发出含有类蛇毒三肽的化妆品,类蛇毒三肽作为化妆品新型的美容成分也越来越热门。
[0003]目前,常规合成类蛇毒三肽的方法大多为液相合成和固相合成,但是液相合成的方法步骤较多,比较繁琐,全部采用液相合成方法得到的类蛇毒三肽粗品的纯度不高,总产率也不高,后续纯化收率低;采用固相合成,纯化难度较大,收率也极低,采用固相合成或液相合成都不可避免各方法的局限性。因此开发工艺简便、成本较低、纯度高的类蛇毒三肽合成方法,对广泛使用于化妆品的类蛇毒三肽有重要意义。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于克服现有技术存在的不足,提供一种方法简单、收率高、产品纯度高的类蛇毒三肽的合成方法。
[0005]为了实现上述目的,本专利技术采用的技术方案为:一种类蛇毒三肽的合成方法,包括下述步骤:S1、合成H

Dab(Boc)

NHBzl:在四氢呋喃中,Fmoc

Dab(Boc)

OH(Nα

芴甲氧羰基



叔丁氧羰基

L

2,4

二氨基丁酸)、苄胺、NMM(N

甲基吗啡啉)、EDCI(1

乙基

3(3

二甲基丙胺)碳二亚胺)反应得到Fmoc

Dab(Boc)

NHBzl,然后用包含哌啶的四氢呋喃溶液脱除Fmoc保护基,得到H

Dab(Boc)

NHBzl;S2、合成Boc

β

Ala

Pro

OH:在四氢呋喃中,Boc

β

Ala

OH(N

叔丁氧羰基

β

丙氨酸)、H

Pro

OMe
·
HCl(L

脯氨酸甲酯盐酸盐)、NMM、HOBT(1

羟基苯并三唑)、EDCI反应得到Boc

β

Ala

Pro

OMe,然后用NaOH溶液水解得到Boc

β

Ala

Pro

OH;S3、合成Boc

β

Ala

Pro

Dab(Boc)

NH

Bzl:在四氢呋喃中,Boc

β

Ala

Pro

OH、H

Dab(Boc)

NHBzl、HOBT、EDCI反应得到Boc

β

Ala

Pro

Dab(Boc)

NH

Bzl;S4、合成类蛇毒三肽:将Boc

β

Ala

Pro

Dab(Boc)

NH

Bzl用三氟乙酸水溶液脱除Boc保护基,得到类蛇毒三肽粗品;S5、类蛇毒三肽粗品纯化:类蛇毒三肽粗品经粗品处理、高效液相色谱、阴离子交换色谱,得到高纯类蛇毒三
肽;其中,所述类蛇毒三肽粗品纯化过程中,阴离子交换色谱所用填料为改性聚甲基丙烯酸环氧丙酯

三聚氰酸三烯丙酯(PGMA

TCA)色谱填料。
[0006]本专利技术通过液相合成的方法,以Fmoc

Dab(Boc)

OH、苄胺、Boc

β

Ala

OH和H

Pro

OMe
·
HCl为原料,经上述步骤合成类蛇毒三肽粗品,利用Fmoc

Dab(Boc)

OH与苄胺连接的方法消除了Dab的消旋问题,克服了CTC树脂的稳定性问题,合成工艺路线短,然后利用高效液相色谱、阴离子交换色谱相结合的方法对粗品进行纯化,得到纯度高于99%的类蛇毒三肽,同时也除去了三氟乙酸水溶液脱Boc保护基过程中带来的三氟乙酸,减少了类蛇毒三肽的损失,得率高,且未破坏类蛇毒三肽的生物活性,纯化效率高。
[0007]进一步地,所述步骤S1中,Fmoc

Dab(Boc)

OH、苄胺、NMM、EDCI的摩尔比为1:1.0~1.2:1.2~1.5:10~15。
[0008]进一步地,所述步骤S1中,四氢呋喃溶液中哌啶的体积分数为10~20%。
[0009]进一步地,所述步骤S2中,Boc

β

Ala

OH、H

Pro

OMe
·
HCl、NMM、HOBT、EDCI的摩尔比为1:0.9~1.2:0.9~1.2:1.0~1.2:1.0~1.2。
[0010]进一步地,所述步骤S2中,NaOH溶液的质量分数为5~20%。
[0011]进一步地,所述步骤S3中,HOBT、EDCI的添加摩尔量分别为Boc

β

Ala

Pro

OH摩尔量的0.1~0.14倍、10~12倍。
[0012]进一步地,所述步骤S4中,三氟乙酸混合水溶液的质量分数为90~95%。
[0013]进一步地,所述步骤S1~S4中,反应温度均为室温。
[0014]进一步地,所述步骤S5中,粗品处理过程为:将类蛇毒三肽粗品加入到含有0.5~3vol%三氟乙酸的双蒸水中,用3.0~0.45μm的滤膜过滤,得到类蛇毒三肽粗品水溶液。
[0015]更进一步地,所述类蛇毒三肽粗品、含三氟乙酸的双蒸水的质量体积比为1g:20~50mL。
[0016]进本文档来自技高网
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种类蛇毒三肽的合成方法,其特征在于,包括下述步骤:S1、合成H

Dab(Boc)

NHBzl:在四氢呋喃中,Fmoc

Dab(Boc)

OH、苄胺、NMM、EDCI反应得到Fmoc

Dab(Boc)

NHBzl,然后用包含哌啶的四氢呋喃溶液脱除Fmoc保护基,得到H

Dab(Boc)

NHBzl;S2、合成Boc

β

Ala

Pro

OH:在四氢呋喃中,Boc

β

Ala

OH、H

Pro

OMe
·
HCl、NMM、HOBT、EDCI反应得到Boc

β

Ala

Pro

OMe,然后用NaOH溶液水解得到Boc

β

Ala

Pro

OH;S3、合成Boc

β

Ala

Pro

Dab(Boc)

NH

Bzl:在四氢呋喃中,Boc

β

Ala

Pro

OH、H

Dab(Boc)

NHBzl、HOBT、EDCI反应得到Boc

β

Ala

Pro

Dab(Boc)

NH

Bzl;S4、合成类蛇毒三肽:将Boc

β

Ala

Pro

Dab(Boc)

NH

Bzl用三氟乙酸水溶液脱除Boc保护基,得到类蛇毒三肽粗品;S5、类蛇毒三肽粗品纯化:类蛇毒三肽粗品经粗品处理、高效液相色谱、阴离子交换色谱,得到高纯类蛇毒三肽;其中,所述类蛇毒三肽粗品纯化过程中,阴离子交换色谱所用填料为改性PGMA

TCA色谱填料。2.根...

【专利技术属性】
技术研发人员:王辉平刘慧敏傅小明应佳伟
申请(专利权)人:浙江湃肽生物有限公司深圳分公司
类型:发明
国别省市:

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