一种JO蛋白锚定的载药免疫细胞及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种JO蛋白锚定的载药免疫细胞及其制备方法和应用，具体公开了一种JO蛋白锚定的免疫细胞，所述免疫细胞表面上通过化学键偶联JO蛋白，和或者在免疫细胞表面引入偶联JO蛋白的连接剂，将JO蛋白插嵌在免疫细胞上；其中所述的连接剂为具有磷脂或磷脂类似物、聚乙二醇和活性基团的缀合物；所述免疫细胞中包含活性药物，所述的免疫细胞选自T细胞、B细胞或巨噬细胞。本发明专利技术证明JO蛋白对免疫细胞的促渗效果，将JO蛋白连接到免疫细胞，在实现JO促渗效果的同时，减少化药与JO蛋白连用时的给药次数。次数。次数。

【技术实现步骤摘要】
一种JO蛋白锚定的载药免疫细胞及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物领域，具体涉及一种JO蛋白锚定到脂质膜成份颗粒比如T细胞、巨噬细胞等细胞以及脂质体的制备方法和应用。

技术介绍

[0002]由于细胞间连接的存在，如紧密连接，中间连接和桥粒，限制了分子量大于400道尔顿的药物在细胞间的渗透，这是实体瘤化疗效果差的一个重要原因。同时由于细胞间的连接进一步限制了免疫细胞如效应T细胞，NK细胞在实体瘤的杀伤效果，导致了CAR
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T细胞疗法始终无法在实体瘤的治疗上取得突破。JO蛋白(junction opener)是在腺病毒感染上皮细胞的机制中被发现并优化的，其可以与桥粒的DSG2结合，从而重塑细胞间的紧密连接，在细胞间打开一个通道，便于药物及免疫细胞的进一步渗透。其被用于促渗剂可以显著提高金纳米粒在A549实体瘤中的聚集，提高化疗药物如顺铂，DOxil的治疗效果，克服肿瘤细胞的耐药性。同时Ines等人证明JO蛋白可以提高多克隆抗体药物对肿瘤的治疗效果。在上述应用中，JO蛋白被当作一种辅助剂，需要在正式开始化疗之前静脉注射，这些研究均集中在血液相关肿瘤或淋巴瘤中，还没有将其应用于实体瘤的渗透方面的报道。

技术实现思路

[0003]本专利技术所要解决的技术问题是，提供一种简便的促渗策略，利用了细胞膜的磷脂双分子及多氨基的特点，通过EDC法或者一步法将JO蛋白修饰到T细胞及其他类型的细胞表面，实现了免疫细胞的渗透性能增加，同时化疗药物给药频次降低。
[0004]本专利技术一个方面提供了一种JO蛋白锚定的载药免疫细胞，所述免疫细胞表面上通过化学键偶联JO蛋白，或者在免疫细胞表面引入偶联JO蛋白的连接剂，将JO蛋白插嵌在免疫细胞上；
[0005]其中所述的连接剂为包含磷脂或磷脂类似物和活性基团的缀合物，所述免疫细胞中包含活性药物。
[0006]进一步地，所述活性药物在免疫细胞使用前，通过与免疫细胞共同孵育后内吞至免疫细胞内。
[0007]进一步地，所述的免疫细胞选自T细胞、B细胞或巨噬细胞。
[0008]进一步地，所述T细胞为人源性T细胞。
[0009]进一步地，所述化学键偶联JO蛋白的方法为将JO蛋白表面的羧基活化后与免疫细胞表面上的氨基或羟基进行偶联。
[0010]进一步地，引入连接剂的方法为将连接剂与JO蛋白偶联后，将偶联物通过相似相容插嵌在免疫细胞的细胞膜上。
[0011]进一步地，所述羧基活化所使用的活化剂选自1
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(3
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二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)、N
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羟基琥珀酰亚胺(NHS)中的至少一种。
[0012]进一步地，所述连接剂选自DMPE
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COOH以及类似的脂质中间体。
[0013]进一步地，所述活性药物为具有抗肿瘤作用的化学药物、蛋白、多肽、细胞因子或放疗制剂，例如、紫杉醇、多西他赛、阿霉素、顺铂、喜树碱、柔红霉素、对甲氨喋呤、肿瘤坏死因子、多烯紫杉醇、丝裂霉素、氟尿嘧啶、吉西他滨、环磷酰胺、长春碱、白介素18。
[0014]本专利技术另一个方面提供了一种JO蛋白锚定的载药脂质体或纳米颗粒，所述脂质体或纳米颗粒表面上通过化学键偶联JO蛋白，或者在脂质体或纳米颗粒表面引入偶联JO蛋白的连接剂，将JO蛋白插嵌在脂质体或纳米颗粒上；
[0015]其中所述的连接剂为包含磷脂或磷脂类似物和活性基团的缀合物。
[0016]进一步地，所述脂质体或纳米颗粒负载有活性成分。
[0017]进一步地，所述活性成分为具有抗肿瘤作用的化学药物、蛋白、多肽、细胞因子或放疗制剂。
[0018]进一步地，所述化学键偶联JO蛋白的方法为将JO蛋白表面的羧基活化后与脂质体或纳米颗粒表面上的氨基或羟基进行偶联。
[0019]进一步地，引入连接剂的方法为将连接剂与JO蛋白偶联后，将偶联物通过相似相容插嵌在脂质体或纳米颗粒表面或双分子层中。
[0020]进一步地，所述羧基活化所使用的活化剂选自1
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(3
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二甲氨基丙基)
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乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)、N
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羟基琥珀酰亚胺(NHS)中的至少一种。
[0021]进一步地，所述连接剂选自DMPE
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种JO蛋白锚定的载药免疫细胞，其特征在于，所述免疫细胞表面上通过化学键偶联JO蛋白，和或者在免疫细胞表面引入偶联JO蛋白的连接剂，将JO蛋白插嵌在免疫细胞上；其中所述的连接剂为包含磷脂或磷脂类似物和活性基团的缀合物；所述免疫细胞中包含活性药物；优选地，所述的免疫细胞选自T细胞、B细胞或巨噬细胞；优选地，所述连接剂选自DMPE
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COOH以及类似的脂质中间体；优选地，所述活性药物具有抗肿瘤作用的化学药物、蛋白、多肽、细胞因子或放疗制剂。2.根据权利要求1所述的JO蛋白锚定的载药免疫细胞，其特征在于，所述化学键偶联JO蛋白的方法为将JO蛋白表面的羧基活化后与免疫细胞表面上的氨基或羟基进行偶联；引入偶联JO蛋白的连接剂的方法为将连接剂与JO蛋白偶联后，将偶联物通过相似相容插嵌在免疫细胞的细胞膜上；优选地，所述羧基活化所使用的活化剂选自1
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(3
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二甲氨基丙基)
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乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)、N
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羟基琥珀酰亚胺(NHS)中的至少一种。3.一种JO蛋白锚定的脂质体或纳米颗粒，其特征在于，所述脂质体或纳米颗粒表面上通过化学键偶联JO蛋白，或者在脂质体或纳米颗粒表面引入偶联JO蛋白的连接剂，将JO蛋白插嵌在脂质体或纳米颗粒上；其中所述的连接剂为包含磷脂或磷脂类似物和活性基团的缀合物；优选地，所述连接剂选自DMPE
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【专利技术属性】
技术研发人员：黄来强，吴佳敏，陈华清，冯春燕，代小勇，李婧，
申请(专利权)人：清华大学深圳国际研究生院，
类型：发明
国别省市：