一种嵌合膜囊泡及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种嵌合膜囊泡及其制备方法和应用，涉及生物医药技术领域。本发明专利技术所述Neu

【技术实现步骤摘要】
一种嵌合膜囊泡及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种嵌合膜囊泡及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]急性肾损伤(AKI)，是由多种病因引起的肾功能快速下降而出现的临床综合征，是临床上极为常见的急性并发症之一，具有高的发病率和死亡率特点。其主要表现为尿少或无尿、肿胀、食欲不振等，大多数患者需要住院接受治疗。在住院患者中，近20％患有AKI，死亡率更高，结果较差，其预后与脓毒症、创伤、糖尿病、年龄等诸多危险因素有关。目前尚没有真正有效的药物用于治疗AKI。多项预临床研究表明，hucMSC
‑
Ex在治疗AKI中效果显著，但外泌体对肾损伤部位的靶向性不足限制了其临床应用。
[0003]近年来，以干细胞尤其是脐带间质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cell，hucMSC)为代表的细胞移植疗法，在防治急慢性肾损伤的医学研究得到了广泛的关注。研究显示，hucMSC可通过直接分化为受损肾脏细胞、或通过旁分泌作用、免疫调节等作用机制发挥肾保护作用，在急慢性肾损伤防治中具有广阔的临床转化和应用前景。然而，MSC植入体内后存在长期应用安全性问题以及储存和运输困难等问题，极大的限制其临床应用，寻找能够替代MSC在组织损伤修复中作用的生物材料或干细胞制品显得十分迫切。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种嵌合膜囊泡及其制备方法和应用，所述嵌合膜囊泡的稳定性更好，靶向性更强，对急性肾损伤的预防和/或治疗效果更佳，具有更好的商业化前景。
[0005]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0006]本专利技术提供了一种嵌合膜囊泡，所述嵌合膜囊泡的制备原料包括：人血中性粒细胞来源的纳米囊泡和人脐带间质干细胞来源的外泌体；
[0007]所述纳米囊泡和外泌体的数量比为(0.8～1.2)：(0.8～1.2)。
[0008]优选的，所述纳米囊泡的制备方法，包括：中性粒细胞膜蛋白冰浴超声2～5min后，依次挤压通过孔径为400nm、200nm和100nm的多聚碳酸酯膜，得所述纳米囊泡。
[0009]优选的，所述超声的功率为100W，每超声3s后间隔10s再超声。
[0010]优选的，所述外泌体的制备方法包括利用质量百分浓度为30％的蔗糖密度梯度离心法，从人脐带间质干细胞的上清中分离获得所述外泌体。
[0011]本专利技术还提供了上述嵌合膜囊泡的制备方法，包括以下步骤：将所述纳米囊泡和所述外泌体冰浴超声混匀2～5min后，依次挤压通过孔径为400nm、200nm和100nm的多聚碳酸酯膜，得所述嵌合膜囊泡。
[0012]优选的，所述超声的功率为100W，每超声3s后间隔10s再超声。
[0013]本专利技术还提供了上述嵌合膜囊泡在制备预防和/或治疗急性肾损伤药物中的应用。
[0014]本专利技术还提供了一种预防和/或治疗急性肾损伤的药物，所述药物包括上述嵌合膜囊泡。
[0015]有益效果：本专利技术提供了一种嵌合膜囊泡(Neu
‑
Ex)，Neu
‑
Ex直径分布在30～200nm大小，膜电位比嵌合前的人脐带间质干细胞外泌体(hucMSC
‑
Ex)和人血中性粒细胞来源的纳米囊泡(Neu
‑
NVs)的两组绝对值更高；融合后的Neu
‑
Ex具有典型的球形结构；Neu
‑
Ex表达hucMSC
‑
Ex和Neu
‑
NVs细胞共同的蛋白组分。
[0016]经动物模型实验证实，Neu
‑
Exs在体内外顺铂诱导的动物模型实验中起到显著的肾功能保护作用。体内结果显示，所述Neu
‑
Ex能够有效增强hucMSC
‑
Ex向肾损伤部位的靶向特性；所述Neu
‑
Ex干预后，肾组织中肾小管坏死和炎症细胞浸润减少，肌酐和尿素氮水平降低，肾组织细胞增殖能力增强；体外结果显示，所述Neu
‑
Ex干预后，肾小管上皮细胞凋亡减少，炎症因子表达下降。
[0017]综上，本专利技术所用到的外泌体来源于新生儿hucMSC，无伦理问题，免疫原性更低，安全性更高；所述Neu
‑
Ex可以分装后于
‑
80℃长期保存，易于储存和使用，Neu
‑
Ex可直接用于顺铂诱导的急性肾损伤预防和治疗，效果显著；而且所述Neu
‑
Ex按照微粒计数，使用剂量便于掌握，可用于制备防治急性肾损伤的药用制剂。
附图说明
[0018]图1为人脐带间质干细胞鉴定；
[0019]图2为人脐带间质干细胞外泌体分离纯化方法示意图；
[0020]图3为分离到的人脐带间质干细胞外泌体鉴定；
[0021]图4为人血中性粒细胞鉴定；
[0022]图5为人血中性粒细胞来源纳米囊泡的制备流程；
[0023]图6为人血中性粒细胞来源纳米囊泡的鉴定；
[0024]图7为中性粒细胞源纳米囊泡与脐带间质干细胞源外泌体融合的嵌合膜囊泡的鉴定；
[0025]图8为中性粒细胞源纳米囊泡与脐带间质干细胞源外泌体融合的嵌合膜囊泡的鉴定；
[0026]图9为顺铂诱导的急性肾损伤模型的建立；
[0027]图10为嵌合膜囊泡体内和体外对顺铂诱导的急性肾损伤干预情况。
具体实施方式
[0028]本专利技术提供了一种嵌合膜囊泡，所述嵌合膜囊泡的制备原料包括：人血中性粒细胞来源的纳米囊泡(Neu
‑
NVs)和人脐带间质干细胞来源的外泌体(hucMSC
‑
Ex)；
[0029]所述纳米囊泡和外泌体的数量比为(0.8～1.2)：(0.8～1.2)。
[0030]本专利技术所述纳米囊泡和外泌体的数量比优选为1:1，且每种粒子的数量优选均为4
×
10
11
个。
[0031]本专利技术所述纳米囊泡的制备方法，优选包括：中性粒细胞膜蛋白冰浴超声2min后，依次挤压通过孔径为400nm、200nm和100nm的多聚碳酸酯膜，得所述纳米囊泡。本专利技术所述超声的功率为100W，每超声3s后间隔10s再超声。本专利技术所述挤压优选采用Avanti微型挤出
器进行挤压。
[0032]本专利技术优选从人血中性粒细胞中提取中性粒细胞膜蛋白，本专利技术对所述人血中性粒细胞的提取方法和中性粒细胞膜蛋白的提取方法并没有特殊限定，利用本领域的常规提取方法，从新鲜抗凝血液标本中提取中性粒细胞，再从中性粒细胞中提取人血中性粒细胞膜蛋白。
[0033]本专利技术所述外泌体的制备方法优选包括利用质量百分浓度为30％的蔗糖密度梯度离心法，从人脐带间质干细胞的上清中分离获得所述外泌体。本专利技术优选自新生儿脐带中利用Qiao Chun等本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种嵌合膜囊泡，其特征在于，所述嵌合膜囊泡的制备原料包括：人血中性粒细胞来源的纳米囊泡和人脐带间质干细胞来源的外泌体；所述纳米囊泡和外泌体的数量比为(0.8～1.2)：(0.8～1.2)。2.根据权利要求1所述嵌合膜囊泡，其特征在于，所述纳米囊泡的制备方法，包括：中性粒细胞膜蛋白冰浴超声2～5min后，依次挤压通过孔径为400nm、200nm和100nm的多聚碳酸酯膜，得所述纳米囊泡。3.根据权利要求2所述嵌合膜囊泡，其特征在于，所述超声的功率为100W，每超声3s后间隔10s再超声。4.根据权利要求1所述嵌合膜囊泡，其特征在于，所述外泌体的制备方法包括利用质量百分浓度为3...

【专利技术属性】
技术研发人员：许文荣，吴佩佩，钱晖，李淋丽，张斌，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：