猪大肠杆菌活疫苗冻干保护剂制造技术

本发明专利技术涉及动物医药技术领域，涉及一种疫苗冻干保护剂，具体说是一种猪大肠杆菌及防治猪大肠杆菌病的活疫苗冻干保护剂。本发明专利技术提供了适合猪大肠杆菌的活疫苗冻干保护剂。该保护剂各组分配伍合理，成本低廉，能使猪大肠杆菌活疫苗在冻干保护剂及运输储藏过程保持较高的存活率。实验表明，本发明专利技术提供的猪大肠杆菌活疫苗活菌减少率低于20％，在2

【技术实现步骤摘要】
猪大肠杆菌活疫苗冻干保护剂


[0001]本专利技术涉及动物医药
，尤其涉及一种疫苗冻干保护剂，具体说是一种防治猪大肠杆菌病的活疫苗冻干保护剂。

技术介绍

[0002]猪大肠杆菌病是由病原性大肠杆菌引起的仔猪一组肠道传染性疾病。大肠杆菌可在仔猪出生数小时后经由口腔进入消化道的后段，繁殖、定居，最终成为肠道的正常组分，在应激及机体抵抗能力下降的情况下，仔猪体内存在的致病性大肠杆菌就会异常增生，导致仔猪发病而大批感染、死亡。常见的有仔猪黄痢、仔猪白痢和仔猪水肿病三种，以发生肠炎、肠毒血症为特征。
[0003]当前，主要使用抗生素药物和菌苗对该病进行预防控制，但随着抗生素的滥用，病原菌对抗生素的耐药性也日益增强。给怀孕母猪注射特异性免疫菌苗能够有效预防仔猪大肠杆菌病的发生。目前，市售的猪大肠杆菌病疫苗多为活菌苗。活疫苗需要使用存活能力强而致病性弱的病原菌，但这样的病原菌并不容易获得。并且，冻干工艺以保护方式的选择，也显著影响活疫苗的免疫效果。而目前，市售的疫苗仍存在保护效果不佳的问题，进一步提高防治猪大肠杆菌病的疫苗的免疫效果仍是本领域亟待解决的问题。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供防治猪大肠杆菌病的活疫苗的冻干保护剂，该保护剂能使猪大肠杆菌在冻干过程中以及运输和储藏过程中保持较高的活菌率，使疫苗具有良好的稳定性，从而具有较好的效力。
[0005]本专利技术提供的保护剂，对猪大肠杆菌具有良好的保护能力，经冻干后保存12个月，仍维持较高的存活率。r/>[0006]本专利技术所述的猪大肠杆菌保护剂在制备防治猪大肠杆菌病的药物中的应用。
[0007]本专利技术还提供了适用于本专利技术所述猪大肠杆菌的冻干保护剂。
[0008]本专利技术所述的冻干保护剂，其由如下质量份的组分组成：
[0009]50～200份脱脂乳、50～200份蔗糖、5～20份明胶、10～20份甘露醇和5～10份氯化钠。
[0010]本专利技术所述的冻干保护剂，由如下质量份的组分组成：脱脂乳200份、蔗糖200份、明胶20份、甘露醇20份和氯化钠7份；
[0011]或由如下质量份的组分组成：脱脂乳50份、蔗糖50份、明胶5份、甘露醇10份和氯化钠7份；
[0012]或由如下质量份的组分组成：脱脂乳100份、蔗糖100份、明胶10份、甘露醇15份和氯化钠9份；
[0013]或由如下质量份的组分组成：脱脂乳200份、蔗糖200份、明胶10份、甘露醇15份和氯化钠5份；
[0014]或由如下质量份的组分组成：脱脂乳200份、蔗糖200份、明胶5份、甘露醇10份和氯化钠10份；
[0015]或由如下质量份的组分组成：脱脂乳150份、蔗糖100份、明胶5份、甘露醇15份和氯化钠7份；
[0016]或由如下质量份的组分组成：脱脂乳150份、蔗糖200份、明胶15份、甘露醇20份和氯化钠10份。
[0017]本专利技术的猪大肠杆菌病活疫苗冻干保护剂用于制备猪大肠杆菌活疫苗，按照以下要求步骤进行。
[0018]在本专利技术所述的疫苗中，本专利技术所述猪大肠杆菌弱菌株的菌悬液中，菌体密度为500*108cfu/ml。
[0019]所述冻干保护剂溶液中包括水和如下质量分数的：5％～20％脱脂乳、5％～20％蔗糖、0.5％～2％明胶、1％～2％甘露醇和0.5％～1％份氯化钠。
[0020]本专利技术中，所述菌悬液和冻干保护剂溶液的体积比为1：(0.8～1.2)。一些实施例中红，所述菌悬液和冻干保护剂溶液的体积比为1：1。
[0021]本专利技术所述疫苗的制备方法，包括：
[0022]将猪大肠杆菌培养至OD600值不低于40，离心取菌体以0.9％生理盐水重悬至菌体密度为500*108cfu/ml，然后与等体积冻干保护剂溶液混合，经冻干制得所述疫苗。
[0023]本专利技术实施例中，所述冻干的程序包括：0℃～5℃进箱平衡30min，预冻阶段设置0.5℃/min速率至
‑
40℃～50℃维持200min，升华阶段设置0.5℃/min速率至
‑
5℃维持600min，解析干燥阶段设置1℃/min速率至25℃维持300min，过程真空压力控制0.1mbar。
[0024]本专利技术所提供了猪大肠杆菌弱菌株，并提供了适合该猪大肠杆菌的活疫苗冻干保护剂。该保护剂各组分配伍合理，成本低廉，能使猪大肠杆菌活疫苗在冻干保护剂及运输储藏过程保持较高的存活率。实验表明，本专利技术提供的猪大肠杆菌活疫苗活菌较少率低于20％，在2℃～8℃下可放置6～8个月，
‑
15℃条件下可存放12个月以上，活疫苗的活菌数存活率高且具有良好的稳定性，从而具备更高的免疫效果。
具体实施方式
[0025]本专利技术提供了猪大肠杆菌弱菌株及防治猪大肠杆菌病的活疫苗，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。
[0026]本专利技术采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。下面结合实施例，进一步阐述本专利技术：
[0027]实施例1猪大肠杆菌菌株的培养
[0028]猪大肠杆菌菌种经复苏、纯化后接种于TSB液体培养基中，发酵按照3％～5％接种量，PH为7.2，容氧控制15％
‑
25％，培养至OD600达40
‑
45结束发酵。
[0029]实施例2冻干保护剂制备
[0030]按照如下分组配制疫苗冻干保护剂：
[0031]表1冻干保护剂组方(g)
[0032] 方案1方案2方案3方案4方案5方案6方案7脱脂乳20050100200200150150蔗糖20050100200200100200明胶20510105515甘露醇20101515101520氯化钠779510710
[0033]另设置两个对比保护剂，组方分别为：
[0034]方案8：脱脂乳100g、蔗糖100g、谷氨酸钠120g、山梨醇50g。
[0035]方案9：海藻糖70g、脱脂乳90g、酵母浸粉2g、蛋白胨5g、氯化钠8g、葡甘露聚糖5g。
[0036]将上述方案1～9中各组分分别溶解于1000g灭菌水中，用氢氧化钠调节PH至7.0；高压灭菌，得到冻干保护剂。
[0037]实施例3经该专利技术保护剂进行冻干疫苗制备
[0038]取实施例1制备的菌液，和实施例2中制备的各组冻干保护剂，将菌液分别与各组保护剂按照菌液：保护剂＝1:1比例进行混合，得到半成品；分装至10ml西林瓶(每西林瓶含3ml)，冻干及得成品。
[0039]冻干保护率验证
[0040]将实施例进行冻干前、后活菌数测定，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种猪大肠杆菌活疫苗冻干保护剂，其特征在于由如下质量份的组分组成：50～200份脱脂乳、50～200份蔗糖、5～20份明胶、10～20份甘露醇和5～10份氯化钠。2.根据权利要求1所述的冻干保护剂，其特征在于，由如下质量份的组分组成：脱脂乳200份、蔗糖200份、明胶20份、甘露醇20份和氯化钠7份；或由如下质量份的组分组成：脱脂乳50份、蔗糖50份、明胶5份、甘露醇10份和氯化钠7份；或由如下质量份的组分组成：脱脂乳100份、蔗糖100份、明胶10份、甘露醇15份和氯化钠9份；或由如下质量份的组分组成：脱脂乳200份、蔗糖200份、明胶10份、甘露醇15份和氯化钠5份；或由如下质量份的组分组成：脱脂乳200份、蔗糖200份、明胶5份、甘露醇10份和氯化钠10份；或由如下质量份的组分组成：脱脂乳150份、蔗糖100份、明胶5份、甘露醇15份和氯化钠7份；或由如下质量份的组分组成：脱脂乳150份、蔗糖200份、明胶15份、甘露醇20份和氯化钠10份。3.防治猪大肠杆菌病的疫苗，其由猪大肠杆菌的菌悬液和权利要求1或2所述冻干保护剂的溶液制得。4.根据权利要求3所述的疫苗，其特征在于，猪大肠...

【专利技术属性】
技术研发人员：李国强，刘荣飞，李海超，张媛媛，
申请(专利权)人：河南兴华生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：