siRNA递送载体及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种siRNA递送载体及其制备方法与应用。所述siRNA递送载体包括纳米囊泡以及负载于所述纳米囊泡内的siRNA，所述纳米囊泡由红细胞膜制得。本发明专利技术还公开了一种基于核酸适配体靶向的siRNA递送载体，其包括纳米囊泡，负载于所述纳米囊泡内的siRNA，以及负载于所述纳米囊泡表面的胆固醇修饰的核酸适配体，所述纳米囊泡由红细胞膜制得。本发明专利技术制备的基于核酸适配体靶向的siRNA递送载体中，siRNA被装载于纳米囊泡内，包封效率更高，且不易被降解。易被降解。易被降解。

【技术实现步骤摘要】
siRNA递送载体及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于靶向给药
，具体涉及一种siRNA递送载体及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]小干扰RNA作为基因调控的功能分子在多种疾病的治疗领域中有着广泛的应用，尤其在肿瘤治疗方面，通过小干扰RNA调控肿瘤相关基因的表达从而达到抑制肿瘤的生长、促进肿瘤细胞死亡等目的，已成为一种有潜力的治疗方法，然而，如何精准、高效的将小干扰RNA 递送至肿瘤部位，一直是该领域亟待解决的关键问题。
[0003]传统的小干扰RNA递送方式如阳离子脂质体、树枝状分子、阳离子聚合物、无机纳米颗粒等方式虽然能够将小干扰RNA成功的递送至细胞，然而这些载体材料却很难满足对生物相容性的要求。近年来，细胞外囊泡，尤其是外泌体被认为是有望成为新一代药物递送载体。外泌体等胞外囊泡来源于天然细胞，因此具有较低的细胞毒性和良好的生物相容性。此外，由于外泌体在生物系统中发挥着细胞间通讯的功能，因此具有特定细胞的靶向性。然而天然外泌体的产量很低，且分离方式复杂，大规模获得外泌体需要的成本很高；且由于外泌体成分复杂，许多功能有待研究，难以控制其效果。

技术实现思路

[0004]本专利技术的主要目的在于提供一种siRNA递送载体及其制备方法与应用，以克服现有技术的不足。
[0005]为实现前述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案包括：
[0006]本专利技术实施例提供了一种siRNA递送载体，其包括纳米囊泡以及负载于所述纳米囊泡内的siRNA，所述纳米囊泡由红细胞膜制得。
[0007]本专利技术实施例还提供了前述的siRNA递送载体的制备方法，其包括：
[0008]将红细胞膜制备成纳米囊泡；
[0009]将siRNA与阳离子脂质体通过孵育的方式，制得siRNA/阳离子脂质体复合物；
[0010]以及，将所述siRNA/阳离子脂质体复合物负载于纳米囊泡内，获得siRNA递送载体。
[0011]本专利技术实施例还提供了一种基于核酸适配体靶向的siRNA递送载体，其包括纳米囊泡，负载于所述纳米囊泡内的siRNA，以及负载于所述纳米囊泡表面的胆固醇修饰的核酸适配体，所述纳米囊泡由红细胞膜制得。
[0012]本专利技术实施例还提供了前述的基于核酸适配体靶向的siRNA递送载体的制备方法，其包括：
[0013]将红细胞膜制备成纳米囊泡；
[0014]将siRNA与阳离子脂质体通过孵育的方式，制得siRNA/阳离子脂质体复合物；
[0015]将所述siRNA/阳离子脂质体复合物负载于纳米囊泡内，获得siRNA递送载体；
[0016]以及，将胆固醇修饰的核酸适配体与所述siRNA递送载体通过孵育进行负载，获得基于核酸适配体靶向的siRNA递送载体。
[0017]本专利技术实施例还提供了前述的siRNA递送载体或基于核酸适配体靶向的siRNA递送载体在制备抗肿瘤药物领域中的应用。
[0018]与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
[0019](1)本专利技术将纳米囊泡作为siRNA药物的递送载体相比传统的化学合成载体具有较大的优势，与目前较常用的外泌体载体相比，其获取方式更为简单、成本低廉、产量较高、成分简单，且本专利技术利用过膜挤压制备红细胞膜纳米囊泡的方法，能够实现纳米囊泡载体的大量、低成本制备；
[0020](2)本专利技术制备纳米囊泡的方法能够通过更换聚碳酸酯膜孔径，调控载体尺寸，所制备的纳米囊泡粒径均一，且设备价格低廉、操作简便；
[0021](3)本专利技术中纳米囊泡制备方法能够保留细胞膜原有的功能蛋白，使纳米囊泡具有特定的生物学功能；
[0022](4)本专利技术采用的阳离子脂质体介导的siRNA负载方法，包封效率高、操作简单快捷；本专利技术制备的基于核酸适配体靶向的siRNA递送载体，siRNA被装载于纳米囊泡内，能有效保护siRNA不被核酶降解；
[0023](5)本专利技术所获基于核酸适配体靶向的siRNA递送载体具有生物相容性高、递送效率高、靶向性好等优势，可有效递送siRNA等小核酸药物，能够实现由相应基因表达改变引起的肿瘤免疫逃逸功能的高效抑制。
附图说明
[0024]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0025]图1是本专利技术一典型实施例中基于核酸适配体靶向的siRNA递送载体的示意图；
[0026]图2是本专利技术实施例1制备的纳米囊泡的膜表面CD47分子的蛋白免疫印迹图；
[0027]图3是本专利技术实施例3中基于核酸适配体靶向的纳米囊泡的肿瘤细胞靶向性分析的流式图；
[0028]图4是本专利技术实施例3中基于核酸适配体靶向的纳米囊泡的肿瘤细胞靶向性分析的共聚焦图；
[0029]图5a
‑
图5b是本专利技术实施例3制备的于核酸适配体靶向的siRNA递送载体的粒径分布和表面电位图；
[0030]图6是本专利技术实施例3制备的基于核酸适配体靶向的siRNA递送载体的透射电镜图；
[0031]图7是本专利技术实施例3中基于核酸适配体靶向的siRNA递送载体的细胞毒性图；
[0032]图8是本专利技术实施例3中基于核酸适配体靶向的siRNA递送载体的载药率图；
[0033]图9是本专利技术实施例3中基于核酸适配体靶向的siRNA递送载体对siRNA的靶向递送的流式图；
[0034]图10是本专利技术实施例3中基于核酸适配体靶向的siRNA递送载体对siRNA的靶向递送的共聚焦图；
[0035]图11是本专利技术实施例6中所制备的肿瘤靶向siRNA递送载体对肿瘤细胞进行靶向递送后其PDL1蛋白基因的表达图；
[0036]图12是本专利技术实施例6中所制备的肿瘤靶向siRNA递送载体对肿瘤细胞进行靶向递送后其PDL1蛋白免疫印迹图；
[0037]图13是本专利技术实施例7中所制备的肿瘤靶向siRNA递送载体对肿瘤细胞进行靶向递送，其与激活的jurkat细胞共培养后IL
‑
2分泌图；
[0038]图14是本专利技术对照例3、实施例3中的递送载体对siRNA的靶向递送的流式图。
具体实施方式
[0039]鉴于现有技术的缺陷，本案专利技术人经长期研究和大量实践，得以提出本专利技术的技术方案，下面将对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0040]本专利技术实施例的一个方面提供了一种siRNA递送载体，其包括纳米囊泡以及负载于所述纳米囊泡内的siRNA，所述纳米囊泡由红细胞膜制得。
[0041本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种siRNA递送载体，其特征在于包括纳米囊泡以及负载于所述纳米囊泡内的siRNA，所述纳米囊泡由红细胞膜制得。2.根据权利要求1所述的siRNA递送载体，其特征在于：所述siRNA包括PDL1 siRNA；优选的，所述siRNA的包封率为70％～90％，siRNA的载药率为1wt％～3wt％；和/或，所述纳米囊泡的粒径为100～400nm；和/或，所述纳米囊泡表面保留有红细胞膜功能分子；优选的，所述红细胞膜功能分子包括功能膜蛋白CD47。3.如权利要求1或2所述的siRNA递送载体的制备方法，其特征在于包括：将红细胞膜制备成纳米囊泡；将siRNA与阳离子脂质体进行孵育，制得siRNA/阳离子脂质体复合物；以及，将所述siRNA/阳离子脂质体复合物负载于纳米囊泡内，获得siRNA递送载体。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于包括：将siRNA与阳离子脂质体共同孵育20～30min，制得所述siRNA/阳离子脂质体复合物；和/或，将所述siRNA/阳离子脂质体复合物与纳米囊泡超声处理1.0～15min，获得所述siRNA递送载体；和/或，所述siRNA、阳离子脂质体与纳米囊泡的质量比为1∶(3～5)∶(30～160)。5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述红细胞膜是采用低渗处理法处理红细胞形成的；优选的，所述红细胞膜的制备方法具体包括：将红细胞置于PBS溶液中震荡孵育1～3h，之后于12000～14000rpm离心10～20min，获得所述红细胞膜；和/或，所述纳米囊泡是采用薄膜水化法和挤压过膜的方式处理所述红细胞膜形成的；优选的，所述纳米囊泡的制备方法具体包括：将红细胞膜进行冷冻干燥，采用薄膜水化法和超声处理，再挤压过膜10～30次，获得所述纳米囊泡；...

【专利技术属性】
技术研发人员：裴仁军，吕海银，
申请(专利权)人：中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所，
类型：发明
国别省市：