醋酸布雷默浪丹的合成方法技术

本发明专利技术提供了一种醋酸布雷默浪丹的合成方法，属于多肽的制备方法技术领域，具体为：采用Fmoc固相多肽合成法，以RinkAmide树脂为载体，用4

【技术实现步骤摘要】
醋酸布雷默浪丹的合成方法


[0001]本专利技术属于多肽制
，具体涉及一种醋酸布雷默浪丹的合成方法。

技术介绍

[0002]布雷默浪丹又称布美诺肽，是一种alpha
‑
黑素细胞刺激激素类似物，为一种环七肽结构。布雷默浪丹作为一种治疗女性性功能障碍的药物，作用机理为：通过激活大脑中的内源性途径来调节性欲和性反应，帮助伴有低活跃性性欲障碍的绝经前女性保持正常性欲。布雷默浪丹目前已完成临床III期研究，有着广阔的市场前景。
[0003]布雷默浪丹的环肽结构导致其制备困难，目前布雷默浪丹的合成技术根据成环方法可分为两类，一类是液相成环，但在液相中成环容易产生大量分子间偶联产物，产生二聚体、三聚体等多聚物，导致其合成收率低、纯度低，为了抑制副反应的发生，需要降低其反应浓度，但这会产生大量的废水，不利于环保；另一类是固相成环，固相成环过程中，肽链因空间位阻太大，难以折叠至首尾相连，因而导致成环困难，合成效率不高。
[0004]由于布雷默浪丹合成过程中存在合成收率低、纯化困难等问题，严重限制了布雷默浪丹的应用。因此有必要对现有技术进行改进，以提高布雷默浪丹的合成收率和纯度。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是为了解决现有技术中存在的问题，提供一种醋酸布雷默浪丹的合成方法，该方法简单，成环容易，所得醋酸布雷默浪丹的收率高，纯度高。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种醋酸布雷默浪丹的合成方法，所述方法包括：S1：利用4
‑r/>三氟甲基扁桃酸对RinkAmide树脂进行修饰；S2：采用Fmoc固相多肽合成法，根据布雷默浪丹的多肽序列，在偶联剂作用下，缩合具有Fmoc
‑
保护基团的氨基酸，获得线性肽树脂；S3：将线性肽树脂用切割剂进行切割，脱除Fmoc保护基和Lys、Trp、Asp、Arg、His的侧链保护基；S4：在偶联剂作用下，进行树脂上环化，得到布雷默浪丹树脂；S5：利用裂解剂对布雷默浪丹树脂进行裂解脱除树脂，然后在碱性条件下水解，得布雷默浪丹粗品；S6：利用高效液相色谱、阴离子交换色谱纯化得到高纯醋酸布雷默浪丹。
[0007]本专利技术通过上述步骤，采用Fmoc固相多肽合成法，以RinkAmide树脂为载体，用4
‑
三氟甲基扁桃酸对其进行修饰后，根据布雷默浪丹的多肽序列，在偶联剂作用下，从C端到N端依次缩合具有Fmoc
‑
保护基团的氨基酸，获得线性肽树脂；然后依次脱除Fmoc保护基，Lys、Asp等的侧链保护基，接着在偶联剂的作用下在树脂上成环，用裂解剂将树脂裂解，碱性条件下断开酯键，得布美诺肽粗肽，最后经过纯化得到布美诺肽精肽，方法简单，所得醋酸布雷默浪丹的收率高，纯化效率高。
[0008]进一步地，所述步骤S1中，RinkAmide树脂的替代度为0.34~0.6 mmol/g，交联度为1~2%。
[0009]进一步地，所述步骤S1的具体操作为：将RinkAmide树脂用DCM冲洗数次，然后浸泡在DCM中10~30 min使其充分溶涨，加入哌啶/DCM混合溶液，搅拌反应20~40 min使树脂脱Fmoc保护；将4
‑
三氟甲基扁桃酸、HOBt加入到DCM中搅拌溶解，0~5℃下预冷5~10 min，加入DIC搅拌5~15 min，然后加入树脂，室温下搅拌反应2~3 h，过滤，用DCM冲洗，即得4
‑
三氟甲基扁桃酸修饰的RinkAmide树脂。
[0010]更进一步地，所述哌啶/DCM混合溶液中哌啶的质量百分含量为20~30%。
[0011]更进一步地，所述4
‑
三氟甲基扁桃酸、HOBt、DIC的摩尔比为1:1~1.5:1~1.5。
[0012]更进一步地，所述RinkAmide树脂、4
‑
三氟甲基扁桃酸的添加质量比为1:0.18~0.25。
[0013]本专利技术选用特定交联度、替代度的RinkAmide树脂，利用4
‑
三氟甲基扁桃酸对树脂进行修饰，4
‑
三氟甲基扁桃酸中的羧基与树脂中的氨基通过酰胺化反应连接，经4
‑
三氟甲基扁桃酸修饰后的树脂中引入苯环等基团，机械强度增大，弥补了低交联度树脂溶胀过程中易破碎的缺陷，使用寿命延长，且增大了树脂的溶胀度，有利于反应物进入树脂的网络结构中，加快缩合反应速率，提高目标肽的收率和纯度，这可能是因为RinkAmide树脂经4
‑
三氟甲基扁桃酸修饰改性后，增加了有机溶剂与树脂基团的亲和作用，容易使基团发生离解，网络结构扩张，利于反应物进入树脂的网络结构，其表面和内部暴露的反应活性点增加，增加了树脂内部反应基团与溶液中反应基团的碰撞机会，缩合反应速率加快，同时产生的副产物和溶剂等容易清洗去除，从而增大了目标肽的收率和纯度。
[0014]进一步地，所述步骤S2中，具有Fmoc
‑
保护基团的氨基酸依次为：Fmoc
‑
Lys(Boc)
‑
OH、Fmoc
‑
Trp(Boc)
‑
OH、Fmoc
‑
Arg(pbf)
‑
OH、Fmoc
‑
D
‑
Phe
‑
OH、Fmoc
‑
His(Trt)
‑
OH、Fmoc
‑
Asp(OtBu)
‑
OH、Fmoc
‑
Nle
‑
OH。
[0015]进一步地，所述步骤S2和步骤S4中，缩合剂为DIC/HOBt、DIC/HOAT、HBTU/HOBT/DIEA、HATU/HOAT/DIEA中的任一种。
[0016]进一步地，所述步骤S3中，切割剂为包含90~95wt%TFA、1~3wt%TIS、2~3wt%糠基甲基硫醚、2~3wt%去离子水的混合溶液。
[0017]进一步地，所述步骤S5中，裂解剂为包含90~96wt%TFA、2~5wt%TIS、2~5wt%去离子水的混合溶液。
[0018]进一步地，所述步骤S5中，碱为氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂中的任一种。
[0019]进一步地，所述步骤S6中，高效液相色谱条件为：色谱填料：十八烷基硅胶，装填体积为20~50 mL；流动相：A相为包含0.05~1vol％TFA的水溶液，B相为包含0.05~0.5vol%TFA的乙腈溶液；洗脱梯度：30~40 minB相40~55%；检测波长：200~220 nm；柱温：30~45℃；进料量：10~50 μL；流速：80~300 mL/min。
[0020]进一步地，所述步骤S6中，阴离子交换色谱条件为：色谱填料：Sinopak
‑
s
‑
DEAE，装填体积为20~80 mL；流动相：包含0.1~2vol%的醋酸、0.0本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种醋酸布雷默浪丹的合成方法，其特征在于，所述方法包括：S1：利用4
‑
三氟甲基扁桃酸对RinkAmide树脂进行修饰；S2：采用Fmoc固相多肽合成法，根据布雷默浪丹的多肽序列，在偶联剂作用下，缩合具有Fmoc
‑
保护基团的氨基酸，获得线性肽树脂；S3：将线性肽树脂用切割剂进行切割，脱除Fmoc保护基和Lys、Trp、Asp、Arg、His的侧链保护基；S4：在偶联剂作用下，进行树脂上环化，得到布雷默浪丹树脂；S5：利用裂解剂对布雷默浪丹树脂进行裂解脱除树脂，然后在碱性条件下水解，得布雷默浪丹粗品；S6：利用高效液相色谱、阴离子交换色谱纯化得到高纯醋酸布雷默浪丹。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，RinkAmide树脂的替代度为0.34~0.6 mmol/g，交联度为1~2%。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1的具体操作为：将RinkAmide树脂用DCM冲洗数次，然后浸泡在DCM中10~30 min使其充分溶涨，加入哌啶/DCM混合溶液，搅拌反应20~40 min使树脂脱Fmoc保护；将4
‑
三氟甲基扁桃酸、HOBt加入到DCM中搅拌溶解，0~5℃下预冷5~10 min，加入DIC搅拌5~15 min，然后加入树脂，室温下搅拌反应2~3 h，过滤，用DCM冲洗，即得4
‑
三氟甲基扁桃酸修饰的RinkAmide树脂。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，RinkAmide树脂、4
‑
三氟甲基扁桃酸的添加质量比为1:0.18~0.25。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，具有Fmoc
‑
保护基团的氨基酸依次为：Fmoc
...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘志国，刘慧敏，张飞华，
申请(专利权)人：浙江湃肽生物有限公司南京分公司，
类型：发明
国别省市：