靶向小鼠BBS５基因的gRNA及构建Bardet制造技术

本发明专利技术属分子生物学领域，具体公开了一组靶向小鼠BBS５基因的gRNA及构建Bardet

【技术实现步骤摘要】
靶向小鼠BBS５基因的gRNA及构建Bardet
–
Biedl小鼠模型的方法


[0001]本专利技术涉及生物
，具体公开了能够有效敲除小鼠BBS5基因的gRNA 序列及其应用。

技术介绍

[0002]巴迪特
‑
比德尔综合征（Bardet
–
Biedl Syndrome,BBS）是一种遗传性疾病，影响身体的许多部位。患有这种综合症的人由于视锥、视杆营养不良导致的渐进性视力障碍；额外的手指或脚趾；肥胖症;男性性腺功能下降：肾脏异常;和学习困难等异常表型。通常开始于儿童发育期，早期存在夜盲问题，然后是周围视力盲点的发展，最终发展成隧道视觉。大多数人还会导致青春期或成年早期失明，身体异常包括多指（后轴多面体）肾脏问题（多囊肾）肥胖症,以及额外的生殖器异常和不孕不育,学习障碍等。目前已经知道这种疾病是隐性遗传的，许多基因的突变会导致巴迪特
‑
比德尔综合征。目前已经发现有12个BBS基因，针对该疾病无有效的治疗方式。BBS5基因编码了与BBS综合征相关的蛋白质，细胞内的实验表明，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一组靶向小鼠BBS５基因的gRNA，其特征在于，包括两条gRNA，其核酸序列分别为：gRNA1=SEQ ID NO 1=5
’‑ꢀ
ACTCTTACTATCCTATCCACTGG
‑3’
；gRNA2= SEQ ID NO 2= 5
’ꢀ‑
TTCAATCCCCATGACGCTCATGG
‑3’
。2.一种靶向小鼠BBS５基因的基因敲除试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括如权利要求1中的一组靶向小鼠BBS５基因的gRNA。3.使用如权利要求1所述的一组靶向小鼠BBS５基因的gRNA构建Bardet
–
Biedl 综合症小鼠模型的方法，其特征在于，所述方法包括利用gRNA1和gRNA2将小鼠BBS５基因敲除。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述gRNA1和gRNA2分别靶向BBS５基因第３个外显子的５＇端和第７个外显子的３＇端。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述gRNA1和gRNA2将BBS５基因第３～第７个外显子之间的６０９２ｂｐ的DNA切除，切除后的基因在转录形成的mRNA第２个外显子与第８个外显子剪切时融合，翻译蛋白质时形成移码突变。6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）将上述两条gRNA与Cas9蛋白共注射到受精卵中，取注射后存活的受精卵移植到假孕母鼠体内，产出小鼠，即为F0小鼠；2）提取F0代小鼠尾部DNA，PCR扩增并将产物送测序，鉴定是否为嵌合体；3）待雄性Fo...

【专利技术属性】
技术研发人员：孔珊珊，赵鑫岩，吉晓洋，王丁力，
申请(专利权)人：赛业苏州生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：