一种HK2低表达的乳腺癌细胞系及其使用的siRNA制造技术

技术编号:31679436 阅读:14 留言:0更新日期:2022-01-01 10:24
本发明专利技术公开了一种HK2低表达的乳腺癌细胞系及其使用的siRNA。siRNA为寡聚核酸siRNA1;寡聚核酸siRNA1由SEQ ID NO:1所示的单链RNA分子和SEQ ID NO:2所示的单链RNA分子组成;寡聚核酸siRNA1的3

【技术实现步骤摘要】
一种HK2低表达的乳腺癌细胞系及其使用的siRNA


[0001]本专利技术属于医学分子生物学和基因工程
,具体涉及一种HK2低表达的乳腺癌细胞系及其使用的siRNA。

技术介绍

[0002]乳腺癌是女性病人中最常见的原发性恶性肿瘤之一。乳腺癌在细胞起源、组织学形态、疾病分级、临床表现、治疗反应以及转移潜能等方面都表现出极大的复杂性与异质性,限制了现有乳腺癌治疗方法的有效性和广泛性。目前临床上仍然缺乏乳腺癌治疗的靶点。因此,从分子层面研究乳腺癌的发生发展机制,确定癌症病程关键节点的肿瘤标记物和涉及到的信号通路,为乳腺癌的预防、筛查和治疗指出方向,也为对其实现精确的靶向治疗夯实基础。
[0003]小干扰RNA(Small interferingRNA,siRNA)又称短干扰RNA或沉默RNA,是一个长20

25个核苷酸的双链RNA,在生物学上有许多不同的用途。目前已知siRNA主要参与RNA干扰(RNAi),通过人为引入与内源靶基因具有相同序列的双链RNA,诱导内源靶基因mRNA降解,从而达到减弱基因表达的目的。siRNA可经多种不同转染技术导入细胞内,并对特定基因产生具专一性的敲低效果。目前siRNA导入体内的方法主要有两种,一是直接注射裸露的siRNA或经化学修饰的siRNA,二是使用病毒载体(如慢病毒、腺病毒或腺相关病毒)表达siRNA。siRNA具有高度的特异性、干扰效率高且操作简单,因此可利用经过适当剪裁的siRNA的互补性,来对已知序列的基因进行标定,这种现象使siRNA成为研究基因功能与药物目标的一项重要工具。
[0004]己糖激酶(hexokinase,HK)2是肿瘤糖代谢研究领域的热点问题。HK2是别构酶,受葡萄糖
‑6‑
磷酸和ADP的抑制,亲和性强,可以针对多种六碳糖进行作用。在糖酵解第一步中,葡萄糖在己糖激酶催化下和ATP发生磷酸化反应,生成葡萄糖
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磷酸和ADP。HK2是糖酵解第一个限速酶,在正常组织中很少表达,除了骨骼肌、心肌和脂肪组织;然而,它在肿瘤细胞中经常表达上调,促进Warburg效应。研究表明,HK2在乳腺癌、肝癌、胰腺癌、前列腺癌、胆囊癌等肿瘤组织中过高表达,且肿瘤患者HK2高表达预示预后不良。HK2高表达会促进肿瘤细胞生长和转移。因此,HK2在肿瘤糖代谢和肿瘤发生发展中发挥着重要作用。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是抑制乳腺癌肿瘤的生长。
[0006]本专利技术首先保护抑制HK2蛋白活性和/或表达量的物质,可为z1)或z2):z1)寡聚核酸siRNA1;所述寡聚核酸siRNA1由SEQ ID NO:1所示的单链RNA分子和SEQ ID NO:2所示的单链RNA分子组成;所述寡聚核酸siRNA1的3

端为2个dT修饰;z2)以所述寡聚核酸siRNA1为靶点,由shRNA表达系统合成的shRNA。
[0007]所述由shRNA表达系统合成的shRNA具体可由SEQ ID NO:13所示的单链RNA分子和SEQ ID NO:14所示的单链RNA分子组成。
[0008]在本专利技术的实施例中,寡聚核酸siRNA1具体可为HK2 siRNA1。
[0009]在本专利技术的实施例中,z2)具体可为HK2 shRNA。
[0010]本专利技术还保护一种重组慢病毒载体,其制备方法可如下:(1)将SEQ ID NO:13所示的单链RNA分子和SEQ ID NO:14所示的单链RNA分子进行退火,得到DNA双链;(2)将慢病毒表达载体pSIH1

H1

Puro的限制性内酶切BamHⅠ和EcoRⅠ之间的DNA小分子替换为步骤(1)得到的DNA双链,得到重组慢病毒载体。
[0011]在本专利技术的实施例中,重组慢病毒载体具体可为HK2 shRNA重组慢病毒载体。
[0012]本专利技术还保护一种HK2低表达的乳腺癌细胞模型,其制备方法可如下:(1)将上述任一所述重组慢病毒载体转染细胞,获得病毒液;(2)用步骤(1)获得的病毒液感染乳腺癌细胞系,筛选获得HK2低表达的乳腺癌细胞系,即HK2低表达的乳腺癌细胞模型。
[0013]上述方法中,所述细胞可为HEK293T细胞。
[0014]上述方法中,所述乳腺癌细胞系可为人乳腺癌细胞ZR

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1。
[0015]在本专利技术的实施例中,HK2低表达的乳腺癌细胞模型可为实施例4中构建的HK2敲低的人乳腺癌细胞ZR

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1稳定细胞系。
[0016]本专利技术还保护上述任一所述抑制HK2蛋白活性和/或表达量的物质的应用,可为A1)

A10)中的至少一种;A1)制备用于抑制乳腺癌肿瘤的生长的产品;A2)制备用于抑制乳腺癌细胞的增殖的产品;A3)制备用于降低乳腺癌细胞侵袭能力的产品;A4)制备用于降低乳腺癌细胞糖酵解能力的产品;A5)制备用于构建HK2低表达的乳腺癌细胞模型的产品;A6)抑制乳腺癌肿瘤的生长;A7)抑制乳腺癌细胞的增殖;A8)降低乳腺癌细胞侵袭能力;A9)降低乳腺癌细胞糖酵解能力;A10)构建HK2低表达的乳腺癌细胞模型。
[0017]本专利技术还保护上述任一所述重组慢病毒载体的应用,可为A1)

A10)中的至少一种;A1)制备用于抑制乳腺癌肿瘤的生长的产品;A2)制备用于抑制乳腺癌细胞的增殖的产品;A3)制备用于降低乳腺癌细胞侵袭能力的产品;A4)制备用于降低乳腺癌细胞糖酵解能力的产品;A5)制备用于构建HK2低表达的乳腺癌细胞模型的产品;A6)抑制乳腺癌肿瘤的生长;A7)抑制乳腺癌细胞的增殖;A8)降低乳腺癌细胞侵袭能力;A9)降低乳腺癌细胞糖酵解能力;
A10)构建HK2低表达的乳腺癌细胞模型。
[0018]本专利技术还保护上述任一所述HK2低表达的乳腺癌细胞模型的应用,可为A1)、A2)、A3)、A4)、A6)、A7)、A8)和A9)中的至少一种;A1)制备用于抑制乳腺癌肿瘤的生长的产品;A2)制备用于抑制乳腺癌细胞的增殖的产品;A3)制备用于降低乳腺癌细胞侵袭能力的产品;A4)制备用于降低乳腺癌细胞糖酵解能力的产品;A6)抑制乳腺癌肿瘤的生长;A7)抑制乳腺癌细胞的增殖;A8)降低乳腺癌细胞侵袭能力;A9)降低乳腺癌细胞糖酵解能力。
[0019]上述任一所述的应用中,所述降低乳腺癌细胞糖酵解能力具体可为降低乳腺癌细胞乳酸含量。
[0020]实验证明,HK2 siRNA1和HK2 shRNA能抑制人乳腺癌细胞ZR

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1的增殖,HK2 shRNA干扰了HK2后,细胞的侵袭能力减弱,人乳腺癌细胞ZR

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1糖酵解能力降低,乳腺癌肿瘤生长受到抑制。应用RNAi技术抑制癌细胞中HK2基因的表达,构建HK2低表达的乳腺癌细胞模型,研究HK2本文档来自技高网
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.抑制HK2蛋白活性和/或表达量的物质,为z1)或z2):z1)寡聚核酸siRNA1;所述寡聚核酸siRNA1由SEQ ID NO:1所示的单链RNA分子和SEQ ID NO:2所示的单链RNA分子组成;所述寡聚核酸siRNA1的3

端为2个dT修饰;z2)以所述寡聚核酸siRNA1为靶点,由shRNA表达系统合成的shRNA。2.如权利要求1所述的物质,其特征在于:所述由shRNA表达系统合成的shRNA由SEQ ID NO:13所示的单链RNA分子和SEQ ID NO:14所示的单链RNA分子组成。3.一种重组慢病毒载体,其制备方法如下:(1)将SEQ ID NO:13所示的单链RNA分子和SEQ ID NO:14所示的单链RNA分子进行退火,得到DNA双链;(2)将慢病毒表达载体pSIH1

H1

Puro的限制性内酶切BamHⅠ和EcoRⅠ之间的DNA小分子替换为步骤(1)得到的DNA双链,得到重组慢病毒载体。4.一种HK2低表达的乳腺癌细胞模型,其制备方法如下:(1)将权利要求3所述重组慢病毒载体转染细胞,获得病毒液;(2)用步骤(1)获得的病毒液感染乳腺癌细胞系,筛选获得HK2低表达的乳腺癌细胞系,即HK2低表达的乳腺癌细胞模型。5.如权利要求4所述HK2低表达的乳腺癌细胞模型,其特征在于:所述细胞为HEK293T细胞。6.如权利要求4所述HK2低表达的乳腺癌细胞模型,其特征在于:所述乳腺癌细胞系为人乳腺癌细胞ZR

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1。7.权利要求1所述抑制HK2蛋白活性和/或表达量的物质的应用,为A1)

【专利技术属性】
技术研发人员:叶棋浓李玲张秀娟任鑫鑫罗菲
申请(专利权)人:中国人民解放军军事科学院军事医学研究院
类型:发明
国别省市:

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