载脂蛋白C3（APOC3）iRNA组合物及其使用方法技术

本发明专利技术涉及靶向载脂蛋白C3(APOC3)基因的RNAi试剂例如双链RNAi试剂，和使用这类RNAi试剂来抑制APOC3表达的方法以及治疗患有APOC3相关障碍例如高甘油三酯血症的受试者的方法。相关障碍例如高甘油三酯血症的受试者的方法。相关障碍例如高甘油三酯血症的受试者的方法。

【技术实现步骤摘要】
载脂蛋白C3(APOC3)iRNA组合物及其使用方法
[0001]本申请为国际申请PCT/US2015/061065进入中国国家阶段的中国专利申请(申请号为201580073561.7，申请日为2015年11月17日，专利技术名称为“载脂蛋白C3(APOC3)iRNA组合物及其使用方法”)的分案申请。
[0002]相关申请
[0003]本申请要求2014年11月17日提交的美国临时申请号62/080,941和2015年3月20日提交的美国临时申请号62/136,159的优先权权益。前述申请的每个的全部内容特此通过引用结合在此。
[0004]序列表
[0005]本申请包含已经以电子方式以ASCII格式提交并且特此通过引用以其全文结合的序列表。创建于2015年11月17目的所述ASCII副本被命名为121301
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02520_SL.txt并且大小为212,085个字节。
[0006]专利技术背景
[0007]载脂蛋白C3(APOC3)是一种极低密度脂蛋白(VLDL)，并且是脂蛋白代谢的重要调节剂。在人类中，APOC2由位于基因簇中的APOC3基因与位于染色体11的长臂上的APOA1和APOA4基因共同编码。APOC3作为小的99个氨基酸的蛋白质在肝脏中表达，并在较小程度上在肠中表达。在除去内质网中的20个氨基酸的信号肽后，形成了79个氨基酸的成熟ApoC3蛋白，其可以以非糖基化或糖基化的同种型存在。
[0008]APOC3的主要作用是通过非竞争性抑制内皮结合脂蛋白脂肪酶(LPL)来调节脂类分解。LPL水解富含三酰甘油(甘油三脂)的脂蛋白(TRL)中的三酰甘油，将脂肪酸释放到血浆中，并将大的富含三酰甘油的颗粒转化为较小的缺乏三酰基甘油的残留脂蛋白。缺乏APOC3的个体具有较低的TRL水平，加上三酰甘油的高效脂解作用。此外，其中APOC3基因已被遗传缺失的小鼠也显示具有低血浆三酰甘油水平和有效的TRL分解代谢。APOC3还抑制肝脂酶(HL)，肝脂酶是一种在肝脏中合成的具有甘油三酯脂肪酶和磷脂酶A1活性的脂肪分解酶。APOC3对HL的抑制作用进一步降低了肝脏中TRL残留物的脂类分解和摄取。APOC3还显示出刺激极低密度脂蛋白(VLDL)的合成。据信与APOC3的这种作用相关的潜在机制可能涉及APOB的蛋白酶体介导的降解的抑制，从而导致APOB合成和分泌增加，以及VLDL三酰甘油的合成增加。因此，APOC3可能在调节肝脏VLDL输出方面发挥关键作用。
[0009]细胞研究报道APOC3可能干扰TRL和与肝脂蛋白受体的残留结合。APOC3可以通过掩蔽或改变APOB和APOE的构象来消除APOB和ApoE介导的脂蛋白与低密度脂蛋白受体(LDLR)的结合。APOC3还显著抑制乳糜微粒和VLDL颗粒与脂解作用刺激受体(LSR)的结合。
[0010]APOC3水平的增加引起高甘油三酯血症或甘油三酯的高(高)血浓度(血症)的发展。甘油三酯水平升高与多种疾病有关，这些疾病包括心血管疾病、动脉粥样硬化、非酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎、多囊卵巢综合征、肾脏疾病、肥胖症、2型糖尿病(胰岛素抵抗)、高血压和皮肤损害(黄色瘤)。非常高的甘油三酯水平也会增加急性胰腺炎的风险。因此，调节APOC3代谢可能是管理高甘油三酯血症和相关疾病的新型重要治疗方法。
[0011]因此，本领域需要用于治疗载脂蛋白C3相关障碍如高甘油三酯血症的APOC3表达
调节剂。
[0012]专利技术概述
[0013]本专利技术提供抑制或减少APOC3基因表达的iRNA组合物。该基因可以在细胞(例如受试者(例如人)体内的细胞)的内部。
[0014]本专利技术还提供了用于治疗患有将受益于抑制或降低APOC3基因的表达的障碍(例如载脂蛋白C3相关疾病如高甘油三酯血症)的受试者的方法和疗法，该方法和疗法使用抑制或降低APOC3基因表达的iRNA组合物。
[0015]在一些实施例中，本专利技术提供一种用于抑制载脂蛋白C3(APOC3)在细胞中表达的双链RNAi试剂，其中所述双链RNAi试剂包含形成一个双链区的一条有义链和一条反义链，其中所述有义链包含与SEQ ID NO:1的核苷酸序列相差不多于3个核苷酸的至少15个连续核苷酸，并且所述反义链包含与SEQ ID NO:2的核苷酸序列相差不多于3个核苷酸的至少15个连续核苷酸，
[0016]其中至少一条链的基本上所有核苷酸都是修饰的核苷酸，并且其中所述有义链与附接在3
’‑
末端处的配体共轭。
[0017]在某些方面中，该有义链的所有核苷酸和该反义链的所有核苷酸均是修饰的核苷酸。在一个方面中，该有义链和该反义链包含一个互补区，该互补区包含与表4A、表4B、表5、表8、表9、表10、表11A、表11B、表12以及表13中列出的序列中的任一个相差不多于3个核苷酸的至少15个连续核苷酸。
[0018]在一些实施例中，修饰的核苷酸中的至少一个选自下组，该组由以下各项组成：3
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末端脱氧胸腺嘧啶(dT)核苷酸、2
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O
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甲基修饰的核苷酸、2
’‑
氟代修饰的核苷酸、2
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脱氧修饰的核苷酸、锁定核苷酸、解锁核苷酸、构象限制性核苷酸、限制性乙基核苷酸、脱碱基核苷酸、2
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氨基修饰的核苷酸、2
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O
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烯丙基修饰的核苷酸、2
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C
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烷基修饰的核苷酸、2
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羟基修饰的核苷酸、2
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甲氧基乙基修饰的核苷酸、2
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O
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烷基修饰的核苷酸、吗啉代核苷酸、包含氨基磷酸酯、非天然碱基的核苷酸、四氢吡喃修饰的核苷酸、1,5
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失水己糖醇修饰的核苷酸、环己烯基修饰的核苷酸、包含5
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硫代磷酸酯基团的核苷酸、包含5
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甲基膦酸酯基团的核苷酸、包含5
’
磷酸酯或5
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磷酸酯模拟物的核苷酸、包含乙烯基磷酸酯的核苷酸、包含腺苷
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乙二醇核酸(GNA)的核苷酸、包含胸苷
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乙二醇核酸(GNA)S
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异构体的核苷酸、包含2
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羟甲基
‑
四氢呋喃
‑5‑
磷酸酯的核苷酸、包含2
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脱氧胸苷
‑3’
磷酸酯的核苷酸、包含2
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脱氧鸟苷
‑3’‑
磷酸酯的核苷酸、和与胆甾醇基衍生物或十二烷酸双癸酰胺基团连接的末端核苷酸。
[0019]在一个实施例中，该有义链的基本上所有核苷酸都是修饰的。在另一方面，该反义链的基本上所有核苷酸都是修饰的。在又另一个实施例中，该有义链的基本上所有核苷酸和该反义链的基本上所有核苷酸均是修饰的核苷酸。在一个实施例中，该有义链的所有核本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于抑制细胞中载脂蛋白C3(APOC3)的表达的双链RNAi试剂，其中所述双链RNAi试剂包含形成一个双链区的一条有义链和一条反义链，其中所述有义链包含来自核苷酸序列5
’‑
AAGGGACAGUAUUCUCAGUGC
‑3’
(SEQ ID NO:125)的至少17个连续的核苷酸，并且其中所述反义链包含来自核苷酸序列5
’‑
GCACUGAGAAUACUGUCCCUUUU
‑3’
(SEQ ID NO:228)的至少18个连续的核苷酸，其中所述有义链的所有核苷酸和所述反义链的所有核苷酸均是修饰的核苷酸；其中所述有义链包含至少2个2
’‑
氟修饰的核苷酸、至少7个2
’‑
O
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甲基修饰的核苷酸，和至少2个硫代磷酸酯核苷酸间键联；其中所述反义链包含至少6个2
’‑
氟修饰的核苷酸、至少10个2
’‑
O
‑
甲基修饰的核苷酸，在该3
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末端处的至少一个硫代磷酸酯核苷酸间键联和在该5
’‑
末端处的至少一个硫代磷酸酯核苷酸间键联；且其中：在所述有义链上的至少2个2
’‑
O
‑
甲基修饰的核苷酸是从该5
’‑
端计数所述有义链的位置6处或位置8处的2
’‑
O
‑
甲基修饰的腺苷核苷酸；或所述有义链上的至少一个2
’‑
O
‑
甲基修饰的核苷酸是从该5
’‑
端计数所述有义链的位置12处的2
’‑
O
‑
甲基修饰的尿苷核苷酸；或所述反义链上的至少3个2
’‑
氟修饰的核苷酸是从该5
’‑
端计数所述反义链的位置2、4和18处的2
’‑
氟修饰的胞苷核苷酸；或所述反义链上的至少3个2
’‑
O
‑
甲基修饰的核苷酸是从该5
’‑
端计数所述反义链的位置3、7和9处的2
’‑
O
‑
甲基修饰的腺苷核苷酸；或所述反义链上的至少3个2
’‑
O
‑
甲基修饰的核苷酸是从该5
’‑
端计数所述反义链的位置5、11和21处的2
’‑
O
‑
甲基修饰的尿苷核苷酸；或所述反义链上的至少3个2
’‑
O
‑
甲基修饰的核苷酸是从该5
’‑
端计数所述反义链的位置13、17和19处的2
’‑
O
‑
甲基修饰的胞苷核苷酸；并且其中所述有义链被共轭到一个配体上。2.如权利要求1所述的双链RNAi试剂，其中所述有义链包含从该5
’‑
端计数位置9、10、11处的3个2
’‑
氟修饰的核苷酸。3.如权利要求1所述的双链RNAi试剂，其中在所述有义链上的至少2个2
’‑
O
‑
甲基修饰的核苷酸是2
’‑
O
‑
甲基修饰的鸟苷核苷酸。4.如权利要求3所述的双链RNAi试剂，其中在所述有义链上的2个2
’‑
O
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甲基修饰的鸟苷核苷酸中的至少一个是在从5
’‑
端计数位置4处或位置8处。5.如权利要求1所述的双链RNAi试剂，其中所述有义链包含至少一个脱碱基核苷酸。6.如权利要求1所述的双链RNAi试剂，其中所述双链区包含非规范的碱基对。7.如权利要求1所述的双链RNAi试剂，其中每个链的长度是17
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30个核苷酸。8.如权利要求1所述的双链RNAi试剂，其中所述RNAi试剂是具有21个核苷酸长度的双端平物。9.如权利要求1所述的双链RNAi试剂，其中所述配体是通过二价或三价分支接头附接的一种或多种GalNAc衍生物。10.一种药物组合物，其包含如权利要求1所述的双链RNAi试剂。11.一种用于抑制细胞中载脂蛋白C3(APOC3)的表达的双链RNAi试剂，其中所述双链
RNAi试剂包含形成一个双链区的一条有义链和一条反义链，其中所述有义链包含来自核苷酸序列5
’‑
AAGGGACAGUAUUCUCAGUGC
‑3’
(SEQ ID NO:125)的至少17个连续的核苷酸，并且其中所述反义链包含来自核苷酸序列5
’‑
GCACUGAGAAUACUGUCCCUUUU
‑3’
(SEQ ID NO:228)的至少18个连续的核苷酸，其中所述有义链的所有核苷酸和所述反义链的所有核苷酸均是修饰的核苷酸；其中所述有义链包含从该5
’‑
端计数位置9、10、11处的3个2
’‑
氟修饰的核苷酸、至少7个2
’‑
O
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甲基修饰的核苷酸、在该3
’‑
末端处的至少一个硫代磷酸酯核苷酸间键联和在该5
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末端处的至少一个硫代磷酸酯核苷酸间键联；其中所述7个2
’‑
O

【专利技术属性】
技术研发人员：K，
申请(专利权)人：阿尔尼拉姆医药品有限公司，
类型：发明
国别省市：