多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药非编码RNA及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种增强细菌耐药性的ncRNA，属于微生物技术领域。所述ncRNA是：(1)adeA5

【技术实现步骤摘要】
多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药非编码RNA及其应用


[0001]本专利技术属于微生物
，具体涉及多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药非编码RNA及其应用。

技术介绍

[0002]鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)是一种非发酵性需氧革兰氏阴性条件致病菌，具有复杂的抗菌药物耐药机制，包括药物外排泵的高表达、产生药物灭活酶(β
‑
内酰胺酶、氨基糖苷类修饰酶等)、生物被膜的形成、青霉素结合蛋白与16S rRNA甲基化酶等药物作用靶点改变、外膜通透性改变等。近期研究发现，非编码RNA(non
‑
coding RNAs，ncRNAs)在调控相关耐药基因(药物外排泵、生物被膜形成、毒力因子、细胞膜通透性、细胞壁的合成等)的表达水平方面占据重要地位。
[0003]细菌ncRNAs是一类广泛存在于原核生物基因组中能被转录但不编码蛋白质的不同于转运tRNA、核糖体rRNA、信使mRNA以及持家ncRNA的长度为50～300nt的RNA分子。细菌ncRNAs主要位于基因间区，某些位于编码基因的5'非翻译区(UTR)和3'UTR，能折叠成稳定的茎环或发夹结构，与靶基因的mRNA互补或者直接与靶蛋白结合导致mRNA或蛋白的功能衰减或丧失，是细菌对抗菌药物产生耐药性的重要参与者。但目前还没有关于鲍曼不动杆菌中ncRNAs影响耐药性的相关基因的报道。

技术实现思路

[0004]本专利技术要解决的问题是：提供一种新的增强细菌耐药性的ncRNA及其应用。
[0005]本专利技术的技术方案如下：
[0006]一种增强细菌耐药性的ncRNA，所述ncRNA是：
[0007](1)adeA5
’
UTR：基因位于鲍曼不动杆菌adeA基因的5
’
端非翻译区；或，
[0008](2)adeC5
’
UTR：基因位于鲍曼不动杆菌adeC基因的5
’
端非翻译区。
[0009]进一步地，所述鲍曼不动杆菌为AYE菌株。
[0010]进一步地，所述adeA5
’
UTR的序列与SEQ ID NO.1所示序列之间的同源性为99％～100％；
[0011]或，所述adeC5
’
UTR与SEQ ID NO.2所示序列之间的同源性为96％～100％。
[0012]一种耐药细菌模型，所述细菌模型为过表达前述ncRNA的细菌。
[0013]如前述的细菌模型，所述细菌为鲍曼不动杆菌。
[0014]如前述的细菌模型，所述鲍曼不动杆菌为AYE菌株。
[0015]前述ncRNA在构建耐药细菌模型中的用途。
[0016]进一步地，所述耐药细菌模型所耐受的抗菌药物为：β
‑
内酰胺类、四环素类、氨基糖苷类、大环内酯类、喹诺酮类、氯霉素类和/或替加环素类抗菌药物。
[0017]进一步地，所述β
‑
内酰胺类抗菌药物为：头孢噻肟和/或头孢吡肟；
[0018]和/或，所述四环素类抗菌药物为：多西环素和/或四环素；
[0019]和/或，所述氨基糖苷类抗菌药物为：庆大霉素、阿米卡星、链霉素和/或妥布霉素；
[0020]和/或，所述大环内酯类抗菌药物为：阿奇霉素；
[0021]和/或，所述喹诺酮类抗菌药物为：左氧氟沙星、诺氟沙星、莫西沙星和/或依诺沙星。
[0022]本专利技术的ncRNA对细菌多重耐药性具有十分重要的作用，当该ncRNA被敲除后，细菌耐药性明显降低，尤其是对诺氟沙星和庆大霉素的耐药性，降低程度最明显。过表达本专利技术的ncRNA可提高细菌的耐药性，进而可用于构建耐药模型，对抗耐药菌的药物进行药效评价，应用价值较高。
[0023]显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0024]以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。
附图说明
[0025]图1是adeABC和adeRS操纵子的基因示意图；
[0026]图2是adeABC的转录印迹杂交图；注：Probe adeA、adeB、adeC分别表示对应基因的特异性探针；1、2、3、4分别表示鲍曼不动杆BM4454、CIP 70
‑
10、BM4547(CIP 70
‑
10 AdeRP116L)、BM4546(CIP 70
‑
10 AdeST153M)；6kb、4.5kb、1.4kb分别表示菌株中的RNA与不同的探针结合后adeABC、adeAB、adeC的转录产物。
[0027]图3是adeABC的转录特征图；注：
‑
10和
‑
35为adeABC潜在的启动子；+1为adeABC的转录起始位点；_表示核糖体结合位点；[]表示adeA 5'UTR；表示adeABC的翻译起始密码子；表示adeR的翻译起始密码子。
[0028]图4是以AYE的cDNA和DNA为模板的两个基因间区的PCR产物凝胶电泳图；注：M：DNA Marker；1、2分别为以AYE的cDNA和DNA为模板adeA 5'UTR的PCR产物；3、4分别为以AYE的cDNA和DNA为模板adeC5'UTR的PCR产物。
[0029]图5是以AYE的cDNA为模板的adeA 5'UTR的PCR产物测序结果；注：Query：以AYE的cDNA为模板的PCR产物的基因测序结果；Sbject：AYE菌株的adeA 5'UTR基因序列。
[0030]图6是以AYE的cDNA为模板的adeC 5'UTR的PCR产物测序结果；注：Query：以AYE的cDNA为模板的PCR产物的基因测序结果；Sbject：AYE菌株的adeC 5'UTR基因序列。
[0031]图7是adeA 5'UTR的二级结构；注：
①
：adeABC操纵子核糖体结合位点AGGUUU；
②
：20bp正向重复序列：UUCACACCUCAUUCACACCU
[0032]图8是adeC 5'UTR的二级结构；
[0033]图9是adeA 5'UTR和adeC 5'UTR基因敲除菌株的凝胶电泳鉴定图；注：M：DNA Marker；1表示基因的同源臂引物的PCR扩增产物；2
‑
4分别表示AYE菌株的鉴别引物(AYE plasmid p2、AYE plasmid p4、AYE csy)的PCR扩增产物：5表示pMo130
‑
Tel
R
引物的PCR扩增产物。
具体实施方式
[0034]为使本专利技术实施的目的、技术方案和优点本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种增强细菌耐药性的ncRNA，其特征在于，所述ncRNA是：(1)adeA5
’
UTR：基因位于鲍曼不动杆菌adeA基因的5
’
端非翻译区；所述adeA5
’
UTR的序列与SEQ ID NO.1所示序列之间的同源性为99％～100％；或，(2)adeC5
’
UTR：基因位于鲍曼不动杆菌adeC基因的5
’
端非翻译区；所述adeC5
’
UTR与SEQ ID NO.2所示序列之间的同源性为96％～100％。2.如权利要求1所述的ncRNA，其特征在于：所述adeA5
’
UTR的序列如SEQ ID NO.1所示；所述adeC5
’
UTR的序列如SEQ ID NO.2所示。3.如权利要求2所述的ncRNA，其特征在于：所述鲍曼不动杆菌为AYE菌株。4.一种耐药...

【专利技术属性】
技术研发人员：凌保东，彭勤，
申请(专利权)人：成都医学院，
类型：发明
国别省市：