猪伪狂犬病病毒gD蛋白单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术提供了伪狂犬病病毒单克隆抗体及单链抗体，以及含该单克隆抗体的疫苗组合物及其应用。该单克隆抗体对伪狂犬病病毒临床毒株(含变异株、经典株)的中和效价明显高于早期疫苗株的，可用于伪狂犬病病毒gD蛋白结构解析、中和活性位点、表位鉴定研究、变异株制备疫苗免疫后产生高滴度中和抗体的研究。含该单克隆抗体的疫苗组合物可用于制备预防和/或治疗猪伪狂犬病和犬伪狂犬病相关疫病的药物中的应用。用。

【技术实现步骤摘要】
猪伪狂犬病病毒gD蛋白单克隆抗体及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及猪伪狂犬病病毒gD蛋白单克隆抗体及其应用。

技术介绍

[0002]伪狂犬病，又称Aujeszky氏病，是由疱疹病毒科(Herpesviridae)α亚科中的猪疱疹病毒I型(Suid herpesvirus 1strain，亦称伪狂犬病病毒Pseudorabies virus，PRV)所引起的猪、牛、羊、犬、猫、兔、鼠、野猪、貂、熊和狐等多种家畜、野生动物的一种以发热、奇痒(除猪外)及脑脊髓炎为主症的急性传染病。猪的伪狂犬病在我国广泛存在，危害严重，是制约规模化猪场生产的主要疾病之一，可引起妊娠母猪流产、死胎或木乃伊胎，仔猪出现神经症状、麻痹、特别地20周龄内感染后100％死亡率，以及大中猪呼吸道症状等。
[0003]目前市售的疫苗厂家有40多个，为了更准确比较免疫效果，郭天成等(猪伪狂犬病毒Bartha株与变异株疫苗免疫后中和效价比较试验,广东畜牧兽医科技,2017,42(4):46-47)采用中和试验对疫苗免疫后的猪只进行中和抗体效价的量化检测，结果发现PRV变异株疫苗免疫即使免疫次数少于原有Bartha株疫苗但免疫后的中和效价依然明显高于原有Bartha株疫苗。免疫机理尚不清楚，无法为后期疫苗改进及相应诊断试剂产品的制备提供研发思路。

技术实现思路

[0004]为了解决现有技术的不足，本专利技术的目的在于制备一种猪伪狂犬病病毒单克隆抗体，该单克隆抗体对疫苗株和经典株、变异株的中和活性存在显著差异。r/>[0005]本专利技术涉及一种特异性结合伪狂犬病病毒gD蛋白的单克隆抗体5F6的可变区，所述可变区包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区为SEQ ID No.1所示核苷酸序列或其简并序列编码的氨基酸序列或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体；所述轻链可变区为SEQ ID No.2所示核苷酸序列或其煎饼序列编码的氨基酸序列或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体。
[0006]本专利技术还涉及一种特异性结合伪狂犬病病毒gD蛋白的抗体或其片段，所述抗体或其片段的重链可变区为SEQ.ID No.1所示序列或其简并序列编码的氨基酸序列或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体；以及所述抗体或其片段的轻链可变区为SEQ.ID No.2所示序列或其简并序列编码的氨基酸序列或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体。
[0007]作为本专利技术的一种实施方式，所述抗体或其片段为单克隆抗体、基因工程抗体；其中，所述基因工程抗体包括单链抗体、嵌合单克隆抗体、改形单克隆抗体；所述抗体或其片段仍保持特异性结合猪伪狂犬病病毒gD蛋白的能力。
[0008]作为本专利技术的一种实施方式，所述抗体或其片段为鼠源单克隆抗体5F6，所述鼠源
单克隆抗体5F6重链可变区为SEQ ID No.1所示核苷酸序列编码、轻链可变区为SEQ ID No.2所示核苷酸序列编码。
[0009]所述单克隆抗体5F6特异性结合伪狂犬病病毒gD蛋白，对PRV变异株、经典株、早期疫苗株的IFA效价≥1∶6400，ELISA效价≥1∶512000，表明与PRV不同类型的毒株均呈现良好的反应性；与猪源其它病毒均不反应，且仅与猪伪狂犬病病毒gD蛋白发生特异性反应；对PRV临床毒株(含变异株、经典株)的中和效价明显高于疫苗株的，具有显著性差异。
[0010]作为本专利技术的一种实施方式，所述抗体或其片段为单链抗体5F6，所述单链抗体5F6重链可变区为SEQ ID No.1所示核苷酸序列编码、轻链可变区为SEQ ID No.2所示核苷酸序列编码。
[0011]所述单链抗体5F6特异性结合伪狂犬病病毒gD蛋白，对PRV变异株、经典株、早期疫苗株的IFA效价≥1∶3200，表明与PRV不同类型的毒株均呈现良好的反应性；对PRV临床毒株(含变异株、经典株)的中和效价明显高于疫苗株的，具有显著性差异。
[0012]本专利技术还涉及一种杂交瘤细胞5F6株，所述杂交瘤细胞5F6株分泌所述鼠源单克隆抗体5F6。
[0013]本专利技术还涉及所述抗体或其片段的应用，所述应用包括伪狂犬病病毒gD蛋白结构解析、中和活性位点、表位鉴定研究、变异株制备疫苗免疫后产生高滴度中和抗体的研究。
[0014]作为本专利技术的一种实施方式，所述应用中所述抗体或其片段为所述单克隆抗体5F6或所述单链抗体5F6。
[0015]所述单克隆抗体5F6识别PRVgD蛋白的位点位于101～200AA(其氨基酸序列详见SEQ ID No.3)，进一步位于130～170AA(其氨基酸序列详见SEQ ID No.4)，进一步位于130～149AA(其氨基酸序列详见SEQ ID No.5)。
[0016]本专利技术制备的单克隆抗体、单链抗体对猪伪狂犬病病毒临床株(包括经典株、变异株)的中和效价明显高于早期疫苗株的，可用于PRVgD蛋白结构解析、中和活性位点、表位鉴定研究、变异株制备疫苗免疫后产生高滴度中和抗体的研究。
[0017]本专利技术还涉及一种疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包含免疫量的所述抗体或其片段，以及药学上可接受的载体。
[0018]作为本专利技术的一种实施方式，所述疫苗组合物包含免疫量的所述单克隆抗体5F6和/或所述单链抗体5F6，以及药学上可接受的载体。
[0019]作为本专利技术的一种实施方式，所述疫苗组合物包括免疫量的所述单克隆抗体5F6的重链可变区和轻链可变区序列制备的单链抗体，以及药学上可接受的载体。
[0020]作为本专利技术的一种实施方式，所述疫苗组合物经肌肉注射或皮下注射给药。
[0021]作为本专利技术的一种实施方式，所述疫苗组合物包括但不限于注射液。
[0022]本专利技术的疫苗组合物还可进一步包含其他病毒抗原，在针对感染伪狂犬病毒的不同动物中，与其他感染该动物的抗原共同施用，通过一步免疫同时预防和治疗多种病原导致的感染或疾病。
[0023]作为本专利技术的一种实施方式，所述疫苗组合物进一步含有感染猪的病原抗原，所述其他感染猪的病原抗原包括猪瘟病毒抗原、猪圆环病毒抗原、副猪嗜血杆菌抗原、猪链球菌抗原、猪流感病毒抗原、猪传染性胸膜肺炎抗原、猪多杀性巴氏杆菌抗原、猪波氏杆菌抗原、猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原、猪霍乱沙门氏菌抗原、猪细小病毒抗原和猪乙型脑炎病
毒抗原中的一种或多种。
[0024]作为本专利技术的一种实施方式，所述疫苗组合物进一步含有感染犬的病原抗原，所述其他感染犬的病原抗原包括犬细小病毒抗原、犬瘟热病毒抗原、犬腺病毒I型抗原、犬腺病毒II型抗原、犬钩端螺旋体抗原、犬冠状病毒抗原、犬副流感病毒抗原、狂犬病病毒抗原、犬流感病毒抗原、犬呼肠病毒抗原、犬轮状病毒抗原、犬疱疹病毒抗原、犬病毒性乳头瘤病毒抗原、犬极细小病毒抗原、犬腮腺炎病毒抗原、犬淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒抗原和支气管败血波氏本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种特异性结合伪狂犬病病毒gD蛋白的单克隆抗体5F6的可变区，所述可变区包括重链可变区和轻链可变区，其中，所述重链可变区为SEQ ID No.1所示核苷酸序列或其简并序列编码的氨基酸序列或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体；所述轻链可变区为SEQ ID No.2所示核苷酸序列或其简并序列编码的氨基酸序列或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体。2.一种特异性结合伪狂犬病病毒gD蛋白的抗体或其片段，其中，所述抗体或其片段的重链可变区为SEQ.ID No.1所示序列或其简并序列编码的氨基酸序列或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体；以及所述抗体或其片段的轻链可变区为SEQ.ID No.2所示序列或其简并序列编码的氨基酸序列或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体；优选地，所述抗体或其片段为单克隆抗体、基因工程抗体；其中，所述基因工程抗体包括单链抗体、嵌合单克隆抗体、改形单克隆抗体；所述抗体或其片段仍保持特异性结合伪狂犬病病毒gD蛋白的能力；更优选地，所述抗体或其片段为单克隆抗体5F6或单链抗体5F6。3.一种权利要求2所述抗体或其片段的应用，所述应用包括伪狂犬病病毒gD蛋白结构解析、中和活性位点、表位鉴定研究、变异株制备疫苗免疫后产生高滴度中和抗体的研究。4.一种杂交瘤细胞5F6株，所述杂交瘤细胞5F6株分泌权利要求2所述单克隆抗体5F6。5.一种疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包含免疫量的权利要求2所述抗体或其片段，以及药学上可接受的载体。6.根据权利要求5所述疫苗组合物...

【专利技术属性】
技术研发人员：田克恭，王莹，谭菲菲，
申请(专利权)人：洛阳普泰生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：