本发明专利技术涉及一种小干扰核酸或核苷酸修饰的小干扰核酸，其中所述核酸能够抑制新型冠状病毒COVID19基因的表达。本发明专利技术还提供了一种药物组合物，该药物组合物含有本发明专利技术提供的小干扰核酸作为活性成分。本发明专利技术还提供了所述小干扰核酸及其药物组合物在制备用于预防和/或治疗冠状病毒感染药物中的应用。本发明专利技术所述小干扰核酸对新型冠状病毒COVID19基因的表达具有良好的抑制作用。有良好的抑制作用。
【技术实现步骤摘要】
一种抑制新型冠状病毒(CoV19)的siRNA及其组合物和应用
[0001]本专利技术涉及生物医学或生物制药
，更具体地涉及靶向新型冠状病毒COVID
‑
19 的小干扰核酸分子及其组合物和应用。
技术介绍
[0002]新型冠状病毒(CoV19或COVID
‑
19，SARS
‑
CoV
‑
2，以下简称“新冠病毒”)作为一种正 链RNA病毒，病毒通过附着并进入肺上皮细胞，在溶酶体内进行脱壳，释放病毒正链RNA， 正链RNA指导结构蛋白的表达，并通过以自身为模板转录成负链RNA，负链RNA作为一些 非结构蛋白的模板，翻译成多种非结构蛋白的聚合物，在经过蛋白水解产生包括RdRP等多 种非结构蛋白，并依赖RdRP复制形成子代正链RNA，并产生大量的亚基因组RNA。亚基因 组RNA翻译结构蛋白，并组装形成新的病毒粒子。
[0003]RNA干扰药物是近年来发展起来的一种新型药物，通过RNA干扰通过靶向降解互补的 mRNA，有效的靶向抑制目的基因的表达。小干扰RNA可以降解本身病毒RNA以及形成的 负链RNA和亚基因组RNA，从而有效的抑制病毒复制，并抑制病毒包装关键蛋白的表达， 从而达到治疗和预防新冠病毒感染的目的。
[0004]
技术实现思路
[0005]本专利技术提供一种能够抑制新型冠状病毒COVID19表达的小干扰核酸分子，优选地，所 述小干扰核酸是siRNA。
[0006]在本专利技术的一个方面，本专利技术提供的小干扰核酸能够抑制新型冠状病毒COVID19表达。 优选地，所述小干扰核酸靶向新型冠状病毒COVID19 mRNA上对应的以下基因或蛋白表达 区：S
‑
protein endoRNAse，M
‑
protein。
[0007]所述小干扰核酸包含正义链和反义链，其中正义链包含选自以下序列中至少连续16个与 新型冠状病毒mRNA相同的核苷酸序列：如SEQ ID NO.1/3/5/7中任一所示。
[0008]优选地，所述小干扰核酸为以下所述序列的任一组：如SEQ ID NO.1所示正义链和SEQID NO.2所示反义链；或如SEQ ID NO.3所示正义链和SEQ ID NO.4所示反义链；或如SEQID NO.5所示正义链和SEQ ID NO.6所示反义链；或如SEQ ID NO.7所示正义链和SEQ IDNO.8所示反义链。
[0009]在本专利技术的一个方面，本专利技术提供的小干扰核酸包含核苷酸修饰，所述核苷酸修饰包含 但是不限于以下修饰的一种或多种：
[0010]l)戊糖的2
’‑
OH甲氧基修饰:
[0011]正义链和反义链中的胞嘧啶(C)核苷酸和尿嘧啶(U)核苷酸的戊糖的2
’‑
OH位被甲氧基修饰； 甲氧基修饰如下：
[0012][0013]2)+2碱基悬垂
[0014]正义链和反义链向5
’
端或3
’
端延伸2个核苷酸达到21碱基+2碱基悬垂；2碱基悬垂具有 跟Dicer酶切割dsRNA形成的小干扰RNA相同的结构，这种结构有利于形成RISC诱导沉默 复合体，从而提高沉默效率。其序列与其相应的mRNA一致，但是在3
’
端比互补的RNA 链多2个碱基，形成2碱基悬垂。
[0015]3)戊糖的2
’‑
OH位被氟修饰
[0016]正义链中5
’‑3’
方向的第7、9和11位及其他重要位点的核苷酸的戊糖的2
’‑
OH位被氟修饰； 反义链中5
’‑3’
方向的第2、14和16位及其他重要位点的核苷酸的戊糖的2
’‑
OH位被氟修饰， 氟修饰如下：
[0017][0018]4)部分或全部2
’‑
OH位被甲氧基或氟修饰
[0019]正义链和反义链中核苷酸的戊糖的大部分或全部2
’‑
OH位被甲氧基或氟修饰。
[0020]5)末端二个磷酸二酯键用硫代磷酸修饰
[0021]所述磷酸二酯键的修饰是指对磷酸二酯键中的氧进行修饰，包括硫代磷酸修饰、硼烷化磷酸 盐修饰等；优选地，磷酸二酯键的修饰是硫代磷酸修饰，能够使本专利技术提供的小干扰核酸的 稳定性更好，并且基本上不会影响小干扰核酸的活性。硫代磷酸修饰如下：
[0022][0023]进一步有选地，本专利技术提供的包含核苷酸修饰的小干扰核酸选自具有以下修饰核苷酸序 列的任一组：如SEQ ID NO.21所示正义链和SEQ ID NO.22所示反义链；或如SEQ ID N O.23所示正义链和SEQ ID NO.24所示反义链；或如SEQ ID NO.25所示正义链和SEQ ID NO.26所示反义链；或如SEQ ID NO.27所示正义链和SEQ ID NO.28所示反义链；或者，
[0024]如SEQ ID NO.29所示正义链和SEQ ID NO.30所示反义链；如SEQ ID NO.31所示 正义链和SEQ ID NO.32所示反义链；如SEQ ID NO.33所示正义链和SEQ ID NO.34所示 反义链；或如SEQ ID NO.35所示正义链和SEQ ID NO.36所示反义链；或如SEQ ID NO. 37所示正义链和SEQ ID NO.38所示反义链；或如SEQ ID NO.39所示正义链和SEQ ID NO.40所示反义链；或者，
[0025]如SEQ ID NO.41所示正义链和SEQ ID NO.42所示反义链；或如SEQ ID NO.43所 示正义链和SEQ ID NO.44所示反义链；或如SEQ ID NO.45所示正义链和SEQ ID NO. 46所示反义链；或如SEQ ID NO.47所示正义链和SEQ ID NO.48所示反义链；或如SEQID NO.49所示正义链和SEQ ID NO.50所示反义链；或如SEQ ID NO.51所示正义链和S EQ ID NO.52所示反义链。
[0026]此外，在本专利技术上文所述小干扰核酸的基础上，末端可引入有助于透膜的基团，包括但 不限于胆固醇、蛋白、多肽、高分子、适配体(aptamer)、维生素、叶酸、胆酸、或脂类等亲 脂性分子；或以脂质体、高分子、脂类分子或纳米粒包裹以利于干扰核酸与细胞内的mRNA 发生作用。
[0027]小干扰核酸(优选siRNA)的化学合成方法是本领域技术人员所公知的，一般来说，所 述化学合成的方法包括：(1)寡聚核糖核苷酸的合成；(2)脱保护；(3)纯化分离；(4)脱盐四个 步骤。包括但不限于以下方法：设计并获得目标RNA序列后，可在自动DNA/RNA合成仪(例 如，AppliedBiosystems EXPEDITE8909)上设定合成1毫摩尔的RNA，同时设定每个循环的偶 联时间为10
‑
15分钟，起始物为固相连接的5
’‑
O...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种能够抑制新型冠状病毒COVID19表达的小干扰核酸分子，其特征在于，所述小干扰核酸分子包含正义链和反义链，其中正义链包含选自以下序列中至少连续16个与新型冠状病毒mRNA相同的核苷酸序列：如SEQ ID NO.1/3/5/7中任一所示。2.根据权利要求1所述小干扰核酸分子，其中，所述小干扰核酸分子是具有以下所述序列的任一组的分子：如SEQ ID NO.1所示正义链和SEQ ID NO.2所示反义链；或如SEQ ID NO.3所示正义链和SEQ ID NO.4所示反义链；或如SEQ ID NO.5所示正义链和SEQ ID NO.6所示反义链；或如SEQ ID NO.7所示正义链和SEQ ID NO.8所示反义链。3.根据权利要求1或2所述小干扰核酸分子，其中，该小干扰核酸分子的核苷酸包含但并不限于有以下一种或多种核苷酸的修饰：1)正义链和反义链向5
’
端或3
’
端延伸2个核苷酸达到21碱基+2碱基悬垂；2)正义链中5
’‑3’
方向的第7、9和11位及其他重要位点的核苷酸的戊糖的2
’‑
OH位被氟修饰；3)反义链中5
’‑3’
方向的第2、14和16位及其他重要位点的核苷酸的戊糖的2
’‑
OH位被氟修饰；4)正义链和反义链中核苷酸的戊糖的大部分或全部2
’‑
OH位被甲氧基或氟修饰；5)正义链和反义链中的胞嘧啶(C)核苷酸和尿嘧啶(U)核苷酸的戊糖的2
’‑
OH位被甲氧基修饰；6)正义链和反义链的5
’
和3
’
端二个磷酸二酯键用硫代磷酸修饰。4.根据权利要求3所述小干扰核酸分子，其中，该小干扰核酸分子是具有以下所述修饰的核酸序列的任一组的分子：如SEQ ID NO.21所示正义链和SEQ ID NO.22所示反义链；或如SE...
【专利技术属性】
技术研发人员：张敬新，郝肖瑶，高悦，魏长城，
申请(专利权)人：南京吉迈生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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