MUC1平行CAR(pCAR)治疗剂制造技术

本文提供了表达靶向MUC1的pCAR的免疫应答细胞，所述靶向MUC1的pCAR包含第二代嵌合抗原受体(CAR)和嵌合共刺激受体(CCR)。本文还提供了制备所述免疫应答细胞的方法和使用所述免疫应答细胞引导T细胞介导的免疫应答的方法。法。法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】MUC1平行CAR(pCAR)治疗剂
[0001]背景
[0002]嵌合抗原受体(CAR)，有时被称为人工T细胞受体、嵌合T细胞受体(cTCR)或嵌合免疫受体，是本领域现在熟知的工程化受体。它们主要用于转化免疫效应细胞，特别是T细胞，以为这些细胞提供所需的工程化特异性。在癌症疗法领域，使用CAR
‑
T细胞的过继细胞疗法尤其受到研究。在这些疗法中，T细胞被从患者取出并被修饰，使得它们表达针对在特定形式的癌症中发现的抗原特异性的CAR。然后可以识别并杀死癌细胞的CAR
‑
T细胞被重新引入到患者。
[0003]第一代CAR提供TCR样信号，最常见的是使用CD3ζ(z)细胞内信号传送结构域，并且从而引发肿瘤杀伤功能。然而，在没有伴随共刺激信号的情况下，CD3z
‑
链融合受体的参与可能不足以引起大量的IL
‑
2分泌和/或T细胞增殖。在生理性T细胞应答中，最佳的淋巴细胞活化需要一种或更多种共刺激受体诸如CD28或4
‑
1BB的参与。
[0004]第二代CAR已被构建成在人原代T细胞中除转导抗原依赖性TCR样信号之外，还转导功能性抗原依赖性共刺激信号，除了允许肿瘤杀伤活性之外，还允许T细胞增殖。最常见的是，第二代CAR利用源自CD28或4
‑
1BB的共刺激结构域(同义地，共刺激信号传送区)提供共刺激。共刺激加上CD3ζ信号的联合递送使得第二代CAR在功能方面明显优于其第一代对应物(仅CD3z信号)。第二代CAR的实例可见于美国专利第7,446,190号，该专利通过引用并入本文。
[0005]最近，已经制备了所谓的第三代CAR。这些CAR将多于一个共刺激结构域(同义地，共刺激信号传送区)与TCR样信号传送结构域(同义地，信号传送区)顺式组合，诸如CD28+4
‑
1BB+CD3z或CD28+OX40+CD3z，以进一步增强效力。在第3代CAR中，共刺激结构域在CAR胞内域(endodomain)中串联排列并且通常位于CD3z或其等同物的上游。
[0006]然而，通常，用这些第三代CAR取得的结果令人失望，仅显示出相对于第二代配置(configuration)的少量改进，其中一些第三代CAR不如第二代配置。
[0007]我们最近描述了一种新的形式，其中免疫应答细胞诸如T细胞被工程化以并行表达两种构建体，第二代CAR和嵌合共刺激受体(CCR)。第二代CAR从细胞内到细胞外包含以下结构域：(a)TCR样信号传送区；(b)共刺激信号传送区；(c)跨膜结构域；和(d)第一结合元件，所述第一结合元件与靶抗原上的第一表位特异性相互作用。CCR从细胞内到细胞外包含：(a)不同于CAR的共刺激信号传送区的共刺激信号传送区；(b)跨膜结构域；和(c)第二结合元件，所述第二结合元件与靶抗原上的第二表位特异性相互作用。与CAR不同，CCR缺乏TCR样信号传送区诸如CD3z。与第一代CAR
‑
T细胞、第二代CAR
‑
T细胞和第三代CAR
‑
T细胞相比，这些平行CAR(pCAR)工程化T细胞表现出优异的活性和抗耗竭能力(resistance to exhaustion)。参见美国授权前出版物2019/0002521，该出版物通过引用以其整体并入本文。
[0008]pCAR
‑
T细胞的这些特性使其成为治疗实体瘤的有吸引力的候选物，在实体瘤中，第一代、第二代和第三代CAR
‑
T细胞显示出有限的效力，部分是由于T细胞耗竭。然而，存在对以能使pCAR
‑
T细胞有效杀死肿瘤而对非癌组织无明显毒性的水平表达的抗原和抗原组
合的额外需求。
[0009]专利技术概述
[0010]申请人已经发现，有效的T细胞应答可以使用构建体的组合来产生，其中多于一个共刺激区布置在不同的构建体中。特别地，本文提供了具有平行CAR(pCAR)构建体的有效的pCAR
‑
T细胞，该pCAR
‑
T细胞结合靶细胞上存在的一种或更多种抗原。在一些实施方案中，pCAR构建体包含CAR(嵌合抗原受体)和CCR(嵌合共刺激受体)，该CAR(嵌合抗原受体)包含特异性结合在靶细胞上的MUC1中发现的表位的结合元件，该CCR(嵌合共刺激受体)结合在靶抗原上发现的也在靶细胞上表达的不同表位。本文提供的实验数据证明靶向MUC1的pCAR
‑
T细胞可以有效治疗癌症。
[0011]因此，根据一些实施方案，本文提供了一种免疫应答细胞，所述免疫应答细胞表达：
[0012]i.第二代嵌合抗原受体(CAR)，所述第二代嵌合抗原受体(CAR)包含
[0013]a)信号传送区；
[0014]b)共刺激信号传送区；
[0015]c)跨膜结构域；和
[0016]d)第一结合元件，所述第一结合元件与MUC1靶抗原上的第一表位特异性相互作用；和
[0017]ii.嵌合共刺激受体(CCR)，所述嵌合共刺激受体(CCR)包含
[0018]e)不同于(b)的共刺激信号传送区的共刺激信号传送区；
[0019]f)跨膜结构域；和
[0020]g)第二结合元件，所述第二结合元件与第二靶抗原上的第二表位特异性相互作用。
[0021]当表达靶向MUC1的pCAR构建体的T细胞与表达一种或更多种具有两种表位靶(针对CAR和CCR)的抗原的细胞结合时，CAR和CCR都发出增强T细胞的应答的刺激信号。此外，CCR与其表位的结合也可以通过补充对接效应(supplemental docking effect)来消除由MUC1胞外域施加的空间位阻来增强T细胞的功效。
[0022]本专利技术类型的构建体可被称为“平行嵌合激活受体”或“pCAR”。申请人已经发现，本文描述的MUC
‑
1pCAR已经在体外和体内实验中被证明都优于具有相似元件的第2代CAR
‑
T细胞。
[0023]此外，T细胞的增殖、其保持细胞毒性效力和释放IL
‑
2的能力在经过用表达抗原的肿瘤细胞进行多轮重复刺激后得以维持。
[0024]在一些实施方案中，第一结合元件包含HMFG2抗体的CDR。在一些实施方案中，第一结合元件包含HMFG2抗体的V
H
结构域和V
L
结构域。在某些实施方案中，第一结合元件包含HMFG2单链可变片段(scFv)。
[0025]在一些实施方案中，包含第二表位的第二靶抗原选自由以下组成的组：ErbB同型二聚体和ErbB异型二聚体。在某些实施方案中，第二靶抗原是HER2。在某些实施方案中，第二靶抗原是EGF受体。在某些实施方案中，第二结合元件包括T1E、ICR12或ICR62。在某些实施方案中，第二结合元件是T1E。
[0026]在一些实施方案中，第二靶抗原是αvβ6整合素。在某些实施本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种免疫应答细胞，所述免疫应答细胞表达：i.第二代嵌合抗原受体(CAR)，所述第二代嵌合抗原受体(CAR)包含a)信号传送区；b)共刺激信号传送区；c)跨膜结构域；和d)第一结合元件，所述第一结合元件与MUC1靶抗原上的第一表位特异性相互作用；和ii.嵌合共刺激受体(CCR)，所述嵌合共刺激受体(CCR)包含e)不同于(b)的共刺激信号传送区的共刺激信号传送区；f)跨膜结构域；和g)第二结合元件，所述第二结合元件与第二靶抗原上的第二表位特异性相互作用。2.根据权利要求1所述的免疫应答细胞，其中所述第一结合元件包含HMFG2抗体的CDR。3.根据权利要求2所述的免疫应答细胞，其中所述第一结合元件包含HMFG2抗体的V
H
结构域和V
L
结构域。4.根据前述权利要求中任一项所述的免疫应答细胞，其中所述第一结合元件包含HMFG2单链可变片段(scFv)。5.根据前述权利要求中任一项所述的免疫应答细胞，其中包含所述第二表位的所述第二靶抗原选自由以下组成的组：ErbB同型二聚体和ErbB异型二聚体。6.根据权利要求5所述的免疫应答细胞，其中所述第二靶抗原是HER2。7.根据权利要求5所述的免疫应答细胞，其中所述第二靶抗原是EGF受体。8.根据权利要求5至7中任一项所述的免疫应答细胞，其中所述第二结合元件包括T1E、ICR12或ICR62。9.根据权利要求8所述的免疫应答细胞，其中所述第二结合元件是T1E。10.根据权利要求1至4中任一项所述的免疫应答细胞，其中所述第二靶抗原是αvβ6整合素。11.根据权利要求10所述的免疫应答细胞，其中所述第二结合元件是A20肽。12.根据权利要求1所述的免疫应答细胞，所述免疫应答细胞表达i.第二代嵌合抗原受体(CAR)，所述第二代嵌合抗原受体(CAR)包含：a)CD3z信号传送区；b)CD28共刺激结构域；c)CD28跨膜结构域；和d)靶向人MUC1的HMFG2结构域；和ii.嵌合共刺激受体(CCR)，所述嵌合共刺激受体(CCR)包含：e)4
‑
1BB共刺激结构域；f)CD8α跨膜结构域；和g)T1E结合结构域。13.根据权利要求12所述的免疫应答细胞，所述免疫应答细胞表达包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的第二代嵌合抗原受体(CAR)和包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的嵌合共刺激受体(CCR)。14.根据权利要求1所述的免疫应答细胞，所述免疫应答细胞表达
i.第二代嵌合抗原受体(CAR)，所述第二代嵌合抗原受体(CAR)包含：a)CD3z信号传送区；b)CD28共刺激结构域；c)CD28跨膜结构域；和d)靶向人MUC1的HMFG2结构域；和ii.嵌合共刺激受体(CCR)，所述嵌合共刺激受体(CCR)包含：e)CD27共刺激结构域；f)CD8α跨膜结构域；和g)T1E结合结构域。15.根据权利要求14所述的免疫应答细胞，所述免疫应答细胞表达包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的第二代嵌合抗原受体(CAR)和包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的嵌合共刺激受体(CCR)。16.根据权利要求1所述的免疫应答细胞，所述免疫应答细胞表达i.第二代嵌合抗原受体(CAR)，所述第二代嵌合抗原受体(CAR)包含：a)CD3z信号传送区；b)CD28共刺激结构域；c)CD28跨膜结构域；和d)靶向人MUC1的HMFG2结构域；和ii.嵌合共刺激受体(CCR)，所述嵌合共刺激受体(CCR)包含：e)OX40共刺激结构域；f)CD8α跨膜结构域；和g)T1E结合结构域。17.根据权利要求16所述的免疫应答细胞，所述免疫应答细胞表达包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的第二代嵌合抗原受体(CAR)和包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列的嵌合共刺激受体(CCR)。18.根据权利要求1所述的免疫应答细胞，所述免疫应答细胞表达i.第二代嵌合抗原受体(CAR)，所述第二代嵌合抗原受体(CAR)包含：a)CD3z信号传送区；b)ICOS共刺激结构域；c)CD28跨膜结构域；和d)靶向人MUC1的HMFG2结构域；和ii.嵌合共刺激受体(CCR)，所述嵌合共刺激受体(CCR)包含：e)4
‑
1BB共刺激结构域；f)CD8α跨膜结构域；和g)T1E结合结构域。19.根据权利要求18所述的免疫应答细胞，所述免疫应答细胞表达包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的第二代嵌合抗原受体(CAR)和包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的嵌合共刺激受体(CCR)。20.根据权利要求1所述的免疫应答细胞，所述免疫应答细胞表达
i.第二代嵌合抗原受体(CAR)，所述第二代嵌合抗原受体(CAR)包含：a)CD3z信号传送区；b)4
‑
1BB共刺激结构域；c)CD8α跨膜结构域；和d)靶向人MUC1的HMFG2结构域；和ii.嵌合共刺激受体(CCR)，所述嵌合共刺激受体(CCR)包含：e)CD28共刺激结构域；f)CD28跨膜结构域；和g)T1E结合结构域。21.根据权利要求20所述的免疫应答细胞，所述免疫应答细胞表达包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的第二代嵌合抗原受体(CAR)和包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列的嵌合共刺激受体(CCR)。22.根据权利要求1所述的免疫应答细胞，所述免疫应答细胞表达i.第二代嵌合抗原受体(CAR)，所述第二代嵌合抗原受体(CAR)包含：a)CD3z信号传送区；b)CD28共刺激结构域；c)CD28跨膜结构域；和d)靶向人MUC1的HMFG2结构域；和ii.嵌合共刺激受体(CCR)，所述嵌合共刺激受体(CCR)包含：e)4
‑
1BB共刺激结构域；f)CD8α跨膜结构域；和g)A20结合结构域。23.根据权利要求22所述的免疫应答细胞，所述免疫应答细胞表达包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的第二代嵌合抗原受体(CAR)和包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的嵌合共刺激受体(CCR)。24.根据权利要求1所述的免疫应答细胞，所述免疫应答细胞表达i.第二代嵌合抗原受体(CAR)，所述第二代嵌合抗原受体(CAR)包含：a)CD3z信号传送区；b)CD28共刺激结构域；c)CD28跨膜结构域；和d)靶向人MUC1的HMFG2结构域；和ii.嵌合共刺激受体(CCR)，所述嵌合共刺激受体(CCR)包含：e)4
‑
1BB共刺激结构域；f)CD8α跨膜结构域；和g)ICR62结合结构域。25.根据权利要求24所述的免疫应答细胞，所述免疫应答细胞表达包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的第二代嵌合抗原受体(CAR)和包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的嵌合共刺激受体(CCR)。26.根据权利要求1所述的免疫应答细胞，所述免疫应答细胞表达
i.第二代嵌合抗原受体(CAR)，所述第二代嵌合抗原受体(CAR)包含：a)CD3z信号传送区；b)CD28共刺激结构域；c)CD28跨膜结构域；和d)靶向人MUC1的HMFG2结构域；和ii.嵌合共刺激受体(CCR)，所述嵌合共刺激受体(CCR)包含：e)4
‑
1BB共刺激结构域；f)CD8α跨膜结构域；和g)ICR12结合结构域。27.根据权利要求26所述的免疫应答细胞，所述免疫应答细胞表达包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的第二代嵌合抗原受体(CAR)和包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的嵌合共刺激受体(CCR)。28.根据前述权利要求中任一项所述的免疫应答细胞，所述免疫应答细胞还表达嵌合细胞因子受体或自分泌环。29.根据权利要求28所述的免疫应答细胞，其中所述自分泌环是IL
‑
7自分泌环。30.根据权利要求29所述的免疫应答细胞，其中所述IL
‑
7自分泌环包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列。31.根据权利要求28所述的免疫应答细胞，所述免疫应答细胞表达i.第二代嵌合抗原受体(CAR)，所述第二代嵌合抗原受体(CAR)包含：a)CD3z信号传送区；b)CD28共刺激结构域；c)CD28跨膜结构域；和d)靶向人MUC1的HMFG2结构域；ii.嵌合共刺激受体(CCR)，所述嵌合共刺激受体(CCR)包含：e)4
‑
1BB共刺激结构域；f)CD8α跨膜结构域；和g)T1E结合结构域；和iii.IL
‑
7自分泌环。32.根据权利要求31所述的免疫应答细胞，所述免疫应答细胞表达包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的第二代嵌合抗原受体(CAR)、包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的嵌合共刺激受体(CCR)和包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的IL
‑
7自分泌环。33.根据前述权利要求中任一项所述的免疫应答细胞，其中所述免疫应答细胞是αβT细胞、γδT细胞或自然杀伤(NK)细胞。34.根据权利要求33所述的免疫应答细胞，其中所述T细胞是αβT细胞。35.根据权利要求33所述的免疫应答细胞，其中所述T细胞是γδT细胞。36.一种多核苷酸或多核苷酸的集合，所述多核苷酸或多核苷酸的集合包含：i.第一核酸，所述第一核酸编码包含以下的第二代嵌合抗原受体(CAR)：a)信号传送区；b)共刺激信号传送区；
c)跨膜结构域；和d)第一结合元件，所述第一结合元件与MUC1靶抗原上的第一表位特异性相互作用；和ii.第二核酸，所述第二核酸编码包含以下的嵌合共刺激受体(CCR)：e)不同于(b)的共刺激信号传送区的共刺激信号传送区；f)跨膜结构域；和g)第二结合元件，所述第二结合元件与第二靶抗原上的第二表位特异性相互作用。37.根据权利要求36所述的多核苷酸或多核苷酸的集合，其中所述第一结合元件包含HMFG2抗体的CDR。38.根据权利要求36或37所述的多核苷酸或多核苷酸的集合，其中所述第一结合元件包含HMFG2抗体的V
H
结构域和V
L
结...

【专利技术属性】
技术研发人员：约翰，
申请(专利权)人：伦敦国王学院，
类型：发明
国别省市：