基于突变的VHL基因的单基因高血压基因检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及人类遗传学和内科心血管技术领域，具体涉及了一种突变的VHL基因，在基因组位置chr3:10191647处，碱基T突变为碱基G；参考基因组版本是GRCh37。本发明专利技术还涉及一种单基因高血压基因检测试剂盒，包括用于扩增突变的VHL基因的引物。本发明专利技术提供的突变的VHL基因可以作为临床辅助诊断的生物标志物；检测该变异的携带者，为受试者提供优生优育指导和遗传咨询，减少患儿出生，对单基因高血压中的嗜铬细胞瘤的早期诊断，或者辅助临床判断具有重要意义。义。义。

【技术实现步骤摘要】
基于突变的VHL基因的单基因高血压基因检测试剂盒


[0001]本专利技术涉及人类遗传学和内科心血管
，尤其涉及基于突变的VHL基因的单基因高血压基因检测试剂盒。

技术介绍

[0002]单基因高血压属于继发性高血压，是以心血管损害为唯一表型或伴有心血管损害的单基因遗传性疾病，至少有19致病基因，9个是导致嗜铬细胞瘤的基因，10个是导致盐敏感高血压的致病基因。其中，嗜铬细胞瘤来源于神经嵴，属于肾上腺素能系统嗜铬组织的肿瘤，主要发生在肾上髓质，交感神经系统，以良性为主，恶性嗜铬细胞瘤约占7
‑
15％，是一种具有潜在危险性的肿瘤。
[0003]随着基因检测技术的不断发展，与嗜铬细胞瘤的起源和发展有关的易感基因有VHL、NF1、RET、SDHB和SDHD，其中，VHL基因作为研究嗜铬细胞瘤突变最早、检测到突变最多的基因，已被列为遗传性嗜铬细胞瘤突变筛查的首选因素。
[0004]VHL基因编码的蛋白包括伸长素B、伸长素C和cullin
‑
2的蛋白复合物组成部分，具有泛素连接酶E3活性。该蛋白参与缺氧诱导因子(HIF)的泛素化和降解，HIF是一种转录因子，在氧调控基因表达中起着核心作用。RNA聚合酶II亚基POLR2G/RPB7也被报道是该蛋白的靶点。VHL基因突变与常染色体显性遗传的家族性嗜铬细胞瘤的发生有关，还与常染色体显性遗传的Von Hippel
‑
Lindau综合(VHL病)征和常染色体隐性遗传的家族性红细胞增多症2型的发生有关。
[0005]虽然目前已发现许多与嗜铬细胞瘤有关的VHL突变位点，但仍存在大量未知的突变位点，进一步发现新的VHL基因的突变位点将有助于进一步研究单基因高血压中的嗜铬细胞瘤，对嗜铬细胞瘤的早期诊断，或者辅助临床判断具有重要意义。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是针对单基因高血压中的嗜铬细胞瘤，提供一种基于突变的VHL基因的单基因高血压基因检测试剂盒。
[0007]本专利技术提供的技术方案如下：
[0008]一、本专利技术提供一种突变的VHL基因，在基因组位置chr3:10191647处，碱基T突变为碱基G；参考基因组版本是GRCh37。
[0009]优选地，在基因组位置chr3:10191630
‑
3:10191681处，突变的VHL基因的序列为SEQ ID NO:2。
[0010]二、本专利技术还提供了单基因高血压基因检测试剂盒，包括用于扩增突变的VHL基因的引物。
[0011]优选地，引物的序列为SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8。
[0012]三、本专利技术的原理和有益效果在于：
[0013]本专利技术公开的突变的VHL基因可以作为临床辅助诊断嗜铬细胞瘤的生物标志物，
对于早期诊断，或者辅助临床判断具有重要意义；基于突变的VHL基因开发的检测试剂盒，可以检测出具有突变的VHL基因的患者，可以指导遗传阻断，为受试者提供优生优育指导和遗传咨询，减少患儿出生。
附图说明
[0014]图1为实施例1的家系图；
[0015]图2为实施例1中先证者的Sanger测序图；
[0016]图3为实施例1先证者父亲的Sanger测序图。
具体实施方式
[0017]下面通过具体实施方式进一步详细说明：
[0018]实施例1
‑
先证者验证实验
[0019]样本来源：河北省儿童医院，在先证者(女，8岁)及其家属自愿签署知情同意书的前提下，寄送5
‑
10mL全血样本，建立病历资料库，详细记录先证者病情、家系情况等资料。本研究已得到本单位伦理委员会批准。
[0020]先证者病史描述：
[0021]表1先证者病史描述
[0022][0023][0024]采用Sanger测序法对先证者及其家属的VHL基因进行基因检测，具体步骤如下：
[0025]S1、提取基因组DNA：
[0026]采用江苏百世诺医疗科技有限公司的磁珠法全血基因组DNA提取试剂对先证者及其家属的人类全血EDTA抗凝样本进行全基因组DNA的提取，对DNA的浓度和纯度进行检测。
[0027]S2、准备PCR反应体系：
[0028]设计包含目的片段的特异性扩增引物：
[0029]上游引物(VHL
‑
E2
‑
P
‑
F2，SEQ ID NO:7)：5'TACTACAGAGGCATGAACACC 3'；
[0030]下游引物(VHL
‑
E2
‑
P
‑
R2，SEQ ID NO:8)：5'CAGACAAGTCACCAACCGCTA 3'；
[0031]长度：792bp。
[0032]扩增试剂使用江苏康为世纪生物科技有限公司生产的2
×
Taq MasterMix(Dye)。
[0033]扩增体系：2
×
Taq Master Mix(Dye)25μL；上下游引物(10μM)各1μL；DNA模板<0.5μg；用ddH2O补至50μL。
[0034]PCR扩增条件：94℃预变性2min；94℃变性30s，61℃退火30s，72℃延伸30s，共30循环。72℃终延伸2min。
[0035]产物检测：取2μL的PCR产物，使用1.5％的琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，选用
1000bp Marker作为参考，检测验证扩增产物为预期的大小。
[0036]S3、采用3730XL Genetic Analyzer全自动测序仪对PCR产物进行测序。从NCBI(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)数据库获得参考序列和测序结果进行比对。
[0037]实验结果：
[0038](1)本实施例发现先证者携带突变的VHL基因，具体检测结果如下表2所示：
[0039]表2突变的VHL基因的具体检测结果
[0040]基因基因组位置转录本号碱基改变氨基酸改变参考基因组版本VHLchr3:10191647NM_198156c.517T>Gp.Ter173GlyextTer14GRCh37/hg19
[0041]在基因组位置chr3:10191630
‑
chr3:10191681处，野生型VHL基因的序列为SEQ ID NO:1：CAACGGATGGGAGATTGAagatttctgttgaaacttacactgtttcatct，T为基因组chr3:10191647处突变前碱基；
[0042]在基因组位置chr3:10191630
‑
3:10191681处，突变的VHL基因的序列为SEQ ID NO:2：CAACGGATGGGAGATGGAagatttctgttgaaact本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种突变的VHL基因，其特征在于，在基因组位置chr3:10191647处，碱基T突变为碱基G；参考基因组版本是GRCh37。2.根据权利要求1所述的突变的VHL基因，其特征在于，在基因组位置chr3:10191630
‑
3:10191681...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘哲，梁庆渊，赵娜娜，赖开生，刘昕超，高璇，李方玉，侯青，惠汝太，
申请(专利权)人：百世诺北京医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：