一种家族性高胆固醇血症多重靶向捕获试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术属于基因检测技术领域，公开了一种家族性高胆固醇血症多重靶向捕获试剂盒及其检测方法，试剂盒包括引物SEQ ID NO.1

【技术实现步骤摘要】
一种家族性高胆固醇血症多重靶向捕获试剂盒及其检测方法


[0001]本专利技术涉及基因检测
，具体涉及一种家族性高胆固醇血症多重靶向捕获试剂盒及其检测方法。

技术介绍

[0002]家族性高胆固醇血症(familial hypercholesterolemia,FH)是一种常染色体显性遗传病，病理特征为血浆总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL
‑
C)水平增高及早发冠心病(PCAD)。冠状动脉粥样硬化性心脏病(CAD)的病理基础是动脉粥样硬化(AS)，而FH因血脂代谢异常会间接或直接促发AS，与PCAD(CAD发病年龄男性＜55岁，女性＜65岁)的发生、发展具有密切关系。FH患者血脂代谢失衡会加快AS及PCAD进程，早期发现和诊断FH，及早进行干预，可显著降低冠脉疾病的发病率及死亡率，改善临床预后。
[0003]目前已知的FH相关变异超过2000个，其中约1000个变异已经得到足够证据支持而被归类为致病变异和可能致病变异两类之中，这些变异主要分布在三个基因：LDLR(90％以上)、APOB(5％～10％)和PCSK9(1％以下)。但是，随着基因测序技术的发展，以及医患对于FH认知的不断提高，越来越多的基因，以及基因的突变位点被发现，对FH的相关基因检测的覆盖度还有待于进一步改善，例如授权公告号为CN109517884B的中国专利技术专利公开了FH的测序文库，仅涉及LDLR、APOB、PCSK9这三种基因，覆盖度有待于进一步提高，并且采用的是Ion Torrent测序平台。
[0004]与目前非常成熟，并且已经面临要被更新迭代的Ion Torrent测序平台和Illumina测序平台相比，DNBSEQ测序平台主要定位于医院、检验所级别的中小型规模的测序应用场景，仪器成本低，各项性能指标更加优异，但是目前还未见基于DNBSEQ测序平台的FH基因检测文库的相关报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术提供一种家族性高胆固醇血症多重靶向捕获试剂盒及其检测方法，以至少解决上述技术问题之一。
[0006]一、本专利技术目的之一在于提供：
[0007]一种家族性高胆固醇血症多重靶向捕获试剂盒，包括引物SEQ ID NO.1
‑
382；其中，
[0008]SEQ ID NO.1
‑
14、SEQ ID NO.153
‑
166、SEQ ID NO.323
‑
324用于检测LDLRAP1基因；
[0009]SEQ ID NO.15
‑
32、SEQ ID NO.167
‑
200、SEQ ID NO.367
‑
382用于检测PCSK9基因；
[0010]SEQ ID NO.33
‑
58、SEQ ID NO.201
‑
220用于检测LDLR基因；
[0011]SEQ ID NO.59
‑
152、SEQ ID NO.221
‑
322、SEQ ID NO.347
‑
366用于检测APOB基因。
[0012]SEQ ID NO.325
‑
326用于检测PCSK9基因多态性位点rs2479409；
[0013]SEQ ID NO.327
‑
328用于检测CELSR2基因多态性位点rs629301；
[0014]SEQ ID NO.329
‑
330用于检测ST3GAL4基因多态性位点rs11220462；
[0015]SEQ ID NO.331
‑
332用于检测NYNRIN基因多态性位点rs8017377；
[0016]SEQ ID NO.333
‑
334用于检测LDLR基因多态性位点rs6511720；
[0017]SEQ ID NO.335
‑
336用于检测APOE基因多态性位点rs429358和rs7412；
[0018]SEQ ID NO.337
‑
338用于检测APOB基因多态性位点rs1367117；
[0019]SEQ ID NO.339
‑
340用于检测ABCG8基因多态性位点rs4299376；
[0020]SEQ ID NO.341
‑
342用于检测MYLIP基因多态性位点rs3757354；
[0021]SEQ ID NO.343
‑
344用于检测HFE基因多态性位点rs1800562；
[0022]SEQ ID NO.345
‑
346用于检测SLC22A1基因多态性位点rs1564348。
[0023]优选地，引物SEQ ID NO.1
‑
382分为引物组1、引物组2和引物组3。
[0024]优选地，还包括接头序列1和接头序列2，接头序列1的序列为SEQ ID NO.383，接头序列2的序列为SEQ ID NO.384。
[0025]二、本专利技术目的之二在于提供：
[0026]上述家族性高胆固醇血症多重靶向捕获试剂盒用于非诊断目的的检测方法，采用引物SEQ ID NO.1
‑
324，以及引物SEQ ID NO.347
‑
382对DNA样本进行第1轮多重PCR反应和第2轮接头序列PCR反应，得到基因检测文库，进行测序分析；引物SEQ ID NO.1
‑
324，以及引物SEQ ID NO.347
‑
382分为引物组1、2、3。
[0027]三、本专利技术目的之三在于提供：
[0028]上述家族性高胆固醇血症多重靶向捕获试剂盒用于非诊断目的的检测方法，采用引物SEQ ID NO.1
‑
382对DNA样本进行第1轮多重PCR反应和第2轮接头序列PCR反应，得到基因检测文库，进行测序分析；引物SEQ ID NO.1
‑
382分为引物组1、2、3。
[0029]优选地，引物组1、2、3分别进行第1轮多重PCR反应后，引物组1、2、3的多重PCR扩增产物以体积比6
‑
8﹕5
‑
7﹕1
‑
3合并。
[0030]优选地，引物组1和引物组2的第1轮多重PCR反应的反应条件如下：
[0031][0032]优选地，引物组3的第1轮多重PCR反应的反应条件如下：
[0033][0034]四、本专利技术目的之四在于提供：
[0035]一种家族性高胆固醇血症的基因检测文库，由上述检测方法制备而成。
[0036]五、本专利技术的有益效果在于：
[0037](1)本专利技术设计了适用DNBSEQ测序平台的关于FH基因检测的191对引物对(SEQ ID 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种家族性高胆固醇血症多重靶向捕获试剂盒，其特征在于：包括引物SEQ ID NO.1
‑
324，以及引物SEQ ID NO.347
‑
382；其中，SEQ ID NO.1
‑
14、SEQ ID NO.153
‑
166、SEQ ID NO.323
‑
324用于检测LDLRAP1基因；SEQ ID NO.15
‑
32、SEQ ID NO.167
‑
200、SEQ ID NO.367
‑
382用于检测PCSK9基因；SEQ ID NO.33
‑
58、SEQ ID NO.201
‑
220用于检测LDLR基因；SEQ ID NO.59
‑
152、SEQ ID NO.221
‑
322、SEQ ID NO.347
‑
366用于检测APOB基因。2.根据权利要求1所述的家族性高胆固醇血症多重靶向捕获试剂盒，其特征在于：引物SEQ ID NO.1
‑
324，以及引物SEQ ID NO.347
‑
382分为引物组1、引物组2和引物组3。3.根据权利要求2所述的家族性高胆固醇血症多重靶向捕获试剂盒，其特征在于：引物组3还包括引物SEQ ID NO.325
‑
346，其中，SEQ ID NO.325
‑
326用于检测PCSK9基因多态性位点rs2479409；SEQ ID NO.327
‑
328用于检测CELSR2基因多态性位点rs629301；SEQ ID NO.329
‑
330用于检测ST3GAL4基因多态性位点rs11220462；SEQ ID NO.331
‑
332用于检测NYNRIN基因多态性位点rs8017377；SEQ ID NO.333
‑
334用于检测LDLR基因多态性位点rs6511720；SEQ ID NO.335
‑
336用于检测APOE基因多态性位点rs429358和rs7412；SEQ ID NO.337
‑
338用于检测APOB基因多态性位点rs1367117；SEQ I...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘哲，梁庆渊，赵娜娜，赖开生，刘昕超，高璇，李方玉，侯青，惠汝太，
申请(专利权)人：江苏百世诺医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：