用于黑色素瘤诊断和治疗的miRNA标志物及其相关产品制造技术

本发明专利技术公开了用于黑色素瘤诊断和治疗的miRNA标志物及其相关产品，所述miRNA标志物为miR

【技术实现步骤摘要】
用于黑色素瘤诊断和治疗的miRNA标志物及其相关产品


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体地，本专利技术涉及用于黑色素瘤诊断和治疗的miRNA标志物及其相关产品，更具体地，本专利技术所述的miRNA标志物包括miR
‑
450a、miR
‑
675。

技术介绍

[0002]黑色素瘤，又称恶性黑色素瘤，是一种黑色素细胞发生突变形成的恶性肿瘤，黑色素瘤多发生于皮肤，是最具侵袭性的皮肤高度恶性肿瘤，死亡率占皮肤恶性肿瘤的第1位。恶性黑色素瘤在白种人群中发病率较高，为21.6/10万；非洲人群为1.0/10万；中国人群发病率略低于非洲人群。然而我国发病率近年来成倍增长，每年新发约2万病例。恶性黑色素瘤50%
‑
80%的晚期患者发生肝转移，8%
‑
46%的患者发生脑转移。
[0003]黑色素瘤恶性程度高，转移早且广泛，因此在临床治疗上颇为棘手，其传统的治疗方法包括早期手术切除、放疗及化疗。90%
‑
95%的恶性黑色素瘤患者早期治疗选择手术切除。因其易转移的特点，目前治疗多以化学治疗为主，常用的化疗方案为CVD（顺铂+长春新碱+达卡巴嗪）和CDBT（顺铂+达卡巴嗪+卡莫司汀+他莫昔芬）；放疗仅用于手术切除不彻底或者不能手术者的姑息性治疗。然而上述疗法疗效不佳，且不良反应较多。
[0004]近年来，随着对黑色素瘤发生分子机制的探索不断深入，已有越来越多的研究表明miRNA与黑色素瘤的发生密切相关。miRNA是天然存在于体内的21
‑
22 nt的非编码RNA分子，是一类通过转录后基因沉默对靶基因表达进行调节的RNA。据估计，生物体内约有1/3的基因受miRNA的调控。miRNA与RISC的复合体通过碱基配对可与靶基因mRNA 5
’‑
UTR或者3
’‑
UTR中的互补序列相结合，抑制蛋白质翻译，或引发mRNA降解，从而负调控靶基因的表达。
[0005]miRNA是调节基因表达的内源性非编码小分子RNA，在转录后水平对基因表达进行调控，参与细胞周期、凋亡、发育、分化和新陈代谢等生理过程。miRNA在细胞中的表达失调会导致包括黑色素瘤在内的多种癌症的发生，最新的研究表明一些miRNA在黑色素瘤患者的样本中异常表达，但是具体是哪些miRNA与黑色素瘤的发生发展相关并能够作为治疗黑色素瘤的药物靶点仍未达成共识。因此有必要筛选并验证与黑色素瘤发生发展相关的miRNA，从而为临床上早期辅助诊断和辅助治疗黑色素瘤提供一种有效的手段。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供用于黑色素瘤诊断和治疗的miRNA标志物及其相关产品，所述miRNA标志物包括miR
‑
450a、miR
‑
675，本专利技术将所述miRNA标志物应用于黑色素瘤的诊断和治疗中，经验证发现，所述miRNA标志物miR
‑
450a和miR
‑
675与黑色素瘤的发生发展密切相关，将所述miRNA标志物miR
‑
450a和miR
‑
675组合应用于黑色素瘤的诊断中的诊断效能较好，所述miRNA标志物miR
‑
450a和miR
‑
675与黑色素瘤细胞的凋亡密切相关，且miR
‑
450a和miR
‑
675联合具有协同治疗的效果。
[0007]本专利技术的上述目的通过以下技术方案得以实现：第一方面，本专利技术提供了检测miRNA标志物miR
‑
450a和miR
‑
675的表达水平的试剂
在制备诊断黑色素瘤的产品中的应用。
[0008]进一步，所述试剂包括测序技术、核酸杂交技术、核酸扩增技术检测miRNA生物标志物miR
‑
450a和miR
‑
675的表达水平的试剂。
[0009]进一步，所述试剂选自：特异性识别所述miRNA标志物miR
‑
450a和miR
‑
675的探针；或特异性扩增所述miRNA标志物miR
‑
450a和miR
‑
675的引物。
[0010]进一步，特异性扩增所述miRNA标志物miR
‑
450a和miR
‑
675的引物的序列分别如SEQ ID NO:4
‑
SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6
‑
SEQ ID NO:7所示。
[0011]本专利技术所述的测序技术是指高通量测序技术，所述高通量测序技术又称下一代测序技术，是对传统测序技术的一次革命性的改变，高通量测序技术一次可对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定，极大地提高了测序效率。这类大规模测序技术极大地提高了多个物种遗传信息的解读速度，为获取所有miRNA的序列信息，解密miRNA图谱提供了保证。同时高通量测序使得对一个物种的转录组和基因组进行细致全貌的分析成为可能，所以又被称为深度测序（deep sequencing），高通量测序平台的代表是罗氏公司的454测序仪（Roch GSFLX sequencer），Illumina公司的Solexa基因组分析仪（Illumina Genome Analyzer）和ABI的SOLiD测序仪（ABI SOLiD sequencer）。
[0012]本专利技术中所述的核酸杂交技术包括探针杂交技术、基因芯片技术，所述探针杂交技术是指将经标记的探针与miRNA样本进行杂交，进而进行信号检测，确定miRNA的表达水平。所述探针杂交方法包括northern杂交方法、miRNA表达谱芯片、核酶保护分析技术、RAKE法、原位杂交、基于微球的流式细胞术等技术；所述基因芯片技术是指通过微阵列（Microarray）技术将高密度DNA片段通过高速机器人或原位合成方式以一定的顺序或排列方式使其附着在如膜、玻璃片等固相表面，以同位素或荧光标记的DNA探针，借助碱基互补杂交原理，进行大量的基因表达及监测等方面研究的方法，其测序原理是杂交测序方法，即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法，在一块基片表面固定了序列已知的靶核苷酸的探针。当溶液中带有荧光标记的核酸序列与基因芯片上对应位置的核酸探针产生互补匹配时，通过确定荧光强度最强的探针位置，获得一组序列完全互补的探针序列。据此可重组出靶核酸的序列。
[0013]第二方面，本专利技术提供了一种诊断黑色素瘤的产品。
[0014]进一步，所述产品包含检测miRNA标志物miR
‑
450a和miR
‑
675的表达水平的试剂；所述产品包括芯片、试剂盒、制剂；所述芯片包括特异性识别miRNA标志物miR
‑
450a和miR
‑
675的探针；所述试剂盒包括特异性结合miRNA标志物m本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测miRNA标志物miR
‑
450a和miR
‑
675的表达水平的试剂在制备诊断黑色素瘤的产品中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂包括测序技术、核酸杂交技术、核酸扩增技术检测miRNA标志物miR
‑
450a和miR
‑
675的表达水平的试剂。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂选自：特异性识别所述miRNA标志物miR
‑
450a和miR
‑
675的探针；或特异性扩增所述miRNA标志物miR
‑
450a和miR
‑
675的引物。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，特异性扩增所述miRNA标志物miR
‑
450a和miR
‑
675的引物的序列分别如SEQ ID NO:4
‑
SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6
‑
SEQ ID NO:7所示。5.一种诊断黑色素瘤的产品，其特征在于，所述产品包含检测miRNA标志物miR
‑
450a和miR
‑
675的表达水平的试剂；所述产品包括芯片、试剂盒、制剂；所述芯片包括特异性识别miRNA标志物miR
‑
450a和miR
‑
675的探针；所述试剂盒包括特异性结合miRNA标志物miR
‑
450a和miR
‑
675的引物、探针或芯片；所述制剂包括特异性识别miRNA标志物miR
‑
450a和miR
‑
675的探针、特异性结合miRNA标志物...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔明鹿，杨志强，孔云，张仙，
申请(专利权)人：北京百奥思科生物医学技术有限公司，
类型：发明
国别省市：