生物标志物在诊断食管癌中的应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医学领域，具体而言，涉及一种生物标志物在诊断食管癌中的应用。具体该标志物为NID2CpG岛区域甲基化。本发明专利技术首次发现NID2基因区域1～8的在食管癌或食管癌前病变中的甲基化水平显著高于健康/正常/癌旁样本，能够用于食管癌诊断，可用作食管癌标志物。可用作食管癌标志物。

【技术实现步骤摘要】
生物标志物在诊断食管癌中的应用


[0001]本专利技术涉及生物医学领域，具体而言，涉及一种生物标志物在诊断食管癌中的应用。

技术介绍

[0002]食管癌是一种常见且侵袭性很强的恶性肿瘤，分为两种主要的组织病理学亚型：食管鳞状细胞癌(鳞癌)和食管腺癌，二者具有不同的起源细胞、流行病学和肿瘤分子生物学。食管鳞状细胞癌主要来源于食道的鳞状上皮细胞，食管腺癌起源于胃食管交界处的腺细胞，并与食管下段胃酸反流有关。二者的流行病学特征也不同，全球食管鳞状细胞癌病例多发生在东南亚和中亚，也存在于非洲东南部和南美洲，食管腺癌主要流行与欧洲、北美和大洋洲。食管鳞状上皮内瘤变与食管鳞癌的发生密切相关，属于鳞癌的癌前病变，Barrett食管相关异性增生则是腺癌的癌前病变。
[0003]癌症的早期发现、早期诊断和早期治疗是降低死亡率、提高生存率的主要策略。内镜和活检病理检查是目前诊断早期食管癌的金标准，但内镜检查需要做镜前准备，且操作复杂，需要专业的技术人员，有侵入性，可能会使用到麻醉剂，因此不适合大规模人群筛查，食管癌检测亟需无创检测方法。
[0004]1948年，Mandel和Metais发现人体血液中存在循环游离DNA(cfDNA)，研究发现，癌症患者血液样本中的cfDNA含量高于健康个体的血液样本，肿瘤来源的cfDNA，称为循环肿瘤DNA(ctDNA)，ctDNA中含有肿瘤特异性的遗传改变和表观遗传学改变，可以用作癌症检测的标志物。其中，DNA甲基化水平异常是癌症发生的早期事件，可以用于早期食管癌检测，由于cfDNA在血液中具有含量少、提取困难、存在周期短等缺点，目前尚缺乏可用于食管癌检测的血液甲基化标志物。
[0005]有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0006]本专利技术的第一目的在于提供一种用于检测NID2 CpG岛区域甲基化水平的试剂在制备食管癌诊断试剂盒中的应用；
[0007]定义所述区域1～8依次为Chr14：52069986
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52069893、Chr14:52069730
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52069566、Chr14:52069392
‑
52069280、Chr14：52069253
‑
52069092、Chr14:52069014
‑
52068828、Chr14:52068656
‑
52068530、Chr14:52068539
‑
52068399、Chr14：52068334
‑
52068100所示负链区域；
[0008]所述NID2 CpG岛区域为a)～c)中的任一种：
[0009]a)区域6和/或区域7；
[0010]b)区域1、2、3、4、5、8与a)区域的组合；
[0011]c)包含a)区域或b)区域甲基化位点的其他区域。
[0012]本专利技术的第二目的在于提供一种用于检测上述NID2 CpG岛区域的引物、引物和探
针组合产品或试剂盒。
[0013]本专利技术首次发现NID2基因区域1～8的在食管癌或食管癌前病变中的甲基化水平显著高于健康/正常/癌旁样本，能够用于食管癌诊断，可用作食管癌标志物。
具体实施方式
[0014]现将详细地提供本专利技术实施方式的参考，其一个或多个实例描述于下文。提供每一实例作为解释而非限制本专利技术。实际上，对本领域技术人员而言，显而易见的是，可以对本专利技术进行多种修改和变化而不背离本专利技术的范围或精神。例如，作为一个实施方式的部分而说明或描述的特征可以用于另一实施方式中，来产生更进一步的实施方式。
[0015]除非另有说明，用于披露本专利技术的所有术语(包括技术和科学术语)的意义与本专利技术所属领域普通技术人员所通常理解的相同。通过进一步的指导，随后的定义用于更好地理解本专利技术的教导。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
[0016]本专利技术中所使用的术语“含有”、“包含”和“包括”是同义词，其是包容性或开放式的，不排除额外的、未被引述的成员、元素或方法步骤。
[0017]本专利技术中用端点表示的数值范围包括该范围内所包含的所有数值及分数，以及所引述的端点。
[0018]本专利技术涉及用于检测NID2 CpG岛区域甲基化水平的试剂在制备食管癌诊断试剂盒中的应用；
[0019]定义所述区域1～8依次为Chr14：52069986
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52069893、Chr14:52069730
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52069566、Chr14:52069392
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52069280、Chr14：52069253
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52069092、Chr14:52069014
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52068828、Chr14:52068656
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52068530、Chr14:52068539
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52068399、Chr14：52068334
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52068100所示负链区域；
[0020]所述NID2 CpG岛区域为a)～c)中的任一种：
[0021]a)区域6和/或区域7；
[0022]b)区域1、2、3、4、5、8与a)区域的组合；
[0023]c)包含a)区域或b)区域甲基化位点的其他区域。
[0024]术语“甲基化水平”与一般理解相同，指的是一段DNA序列中一个或多个CpG二核苷酸中的胞嘧啶是否发生甲基化、或发生甲基化的频率/比例/百分数，既代表定性的概念，又代表定量的概念。举例来说，如果核酸序列内的胞嘧啶(C)残基为甲基化的，则可将其称为“高甲基化的”或具有“增加的甲基化”在实际应用中，可根据实际情况采用不同的检测指标比较DNA甲基化水平，如在一些情况下，可根据样本检测的Ct值进行比较，在一些情况下，可计算出样本中标记物的甲基化比例，即甲基化分子数/(甲基化分子数+非甲基化分子数)
×
100，然后再进行比较，在一些情况下，还需要对各个指标进行统计学上的分析整合，得出最终的判定指标。
[0025]在本专利技术中，“CpG岛区域甲基化水平”指的是CpG岛内一个或多个CpG二核苷酸中胞嘧啶的甲基化水平。“区域甲基化位点”指的是区域中至少一个CpG二核苷酸位点，尤其指区域中至少一个CpG二核苷酸位点中的胞嘧啶。
[0026]在本专利技术中，NID2基因区域1～8根据参考基因组GRCh38.p13进行定位；但应当理解，上述区域的序列虽然来自于人，但本专利技术所提供的这些区域所针对的受试者并不局限于人，其可以为任何温血动物，诸如哺乳类，像是灵长类，且较佳地是人类。非人类的灵长类也是个体。用语个体包括驯养动物，诸如猫、狗等，家畜(举例来说，牛、马、猪、绵羊、山羊等)以及实验动物(举例来说，小鼠、兔、大鼠、沙鼠本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于检测NID2 CpG岛区域甲基化水平的试剂在制备食管癌诊断试剂盒中的应用；定义所述区域1～8依次为Chr14：52069986
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52069893、Chr14:52069730
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52069566、Chr14:52069392
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52069280、Chr14：52069253
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52069092、Chr14:52069014
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52068828、Chr14:52068656
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52068530、Chr14:52068539
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52068399、Chr14：52068334
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52068100所示的负链区域；所述NID2 CpG岛区域为a)～c)中的任一种：a)区域6和/或区域7；b)区域1、2、3、4、5、8与a)区域的组合；c)包含a)区域或b)区域甲基化位点的其他区域。2.根据权利要求1所述的应用，所述试剂通过如下方法中的一种或几种实现对目标区域的检测：甲基化特异性PCR、亚硫酸氢盐测序法、甲基化特异性微阵列法、全基因组甲基化测序法、焦磷酸测序法、甲基化特异性高效液相层析法、甲基化特异性高分辨率溶解曲线法、甲...

【专利技术属性】
技术研发人员：张良禄，周俊，董兰兰，吴志诚，熊杨辉，万康康，李婷婷，
申请(专利权)人：武汉艾米森生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：