急性髓系白血病的辅助诊断、预后诊断或危险度分层标记物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种急性髓系白血病的辅助诊断、预后诊断或危险度分层标记物及其应用。专利权人经多次实验后首次发现，与正常人相比，急性髓系白血病(以下简称AML)患者骨髓中ARF3表达量显著上调，表明ARF3基因能够作为AML的辅助诊断标记物；同时，专利权人还发现，ARF3基因的表达水平与AML患者的预后呈显著性相关，ARF3高表达的AML患者有更差的总体生存和无事件生存，提示预后不良，特别是在细胞遗传学危险分层中危组中；这也表明ARF3基因能够作为急性髓系白血病的预后诊断或危险度分层标记物。标记物。标记物。

【技术实现步骤摘要】
急性髓系白血病的辅助诊断、预后诊断或危险度分层标记物及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种急性髓系白血病的辅助诊断、预后诊断或危险度分层标记物及其应用。

技术介绍

[0002]急性髓系白血病(acute myeloid leukemia，AML)是一种在细胞形态学、分子生物学、细胞遗传学、免疫分型、临床表现等方面均具有高度异质性的恶性克隆性疾病。近年来，虽然AML患者的完全缓解率及5年无病生存率均较前有所改善；但由于现有治疗手段中存在骨髓移植患者配型难、分子靶向治疗价格高昂、化疗药物耐受、副反应较强等问题，因此寻找新的治疗靶点和预后生物标记物日益迫切。
[0003]参与白血病细胞增殖或存活的各种基因的表达改变或突变形式不仅与疾病的发病机制有关，而且对预测治疗反应和存活也很重要。虽然如NPM1、FLT3、C
‑
kit、C/EBPA和RUNX1等基因的突变已被纳入2016年世界卫生组织(WHO)AML分类参考，但对AML进行准确的风险分层诊断或预后诊断仍然困难。因此，识别新的预后指标对于改善目前AML较差的生存结果至关重要。
[0004]随着肿瘤分子生物学技术的革新，近年来，属于RAS超家族的小GTPases的ARF家族可通过调节膜泡运输和与细胞骨架，参与多种生理过程，如细胞增殖、运动和分化等。越来越多的研究也表明ARF家族参与肿瘤的发生发展，ARF3作为ARF家族重要的一员，其表达也与多种肿瘤相关。研究显示，ARF3不仅与乳腺癌临床分期呈正相关，而且92.8％的恶性乳腺癌患者的ARF3表达高于良性乳腺癌患者。此外，过表达ARF3能够抑制FOXO1转录因子活性，调节细胞周期G1/S过渡，从而促进乳腺癌细胞增殖。这些研究提示ARF3在肿瘤发生发展过程中发挥着重要作用，并有望对急性髓系白血病预后诊断提供新的辅助。
[0005]目前对AML的预后评估多采用年龄、继发白血病、细胞遗传学的改变做出判断，再同时结合分子遗传学的改变进行风险分层。但是，基于细胞遗传学的AML风险分层是不够完善的，因为大多数患者处于中等细胞遗传学风险。因此，寻找更快速、更灵敏、更特异的预后诊断指标具有重要的临床意义。

技术实现思路

[0006]本专利技术的专利技术目的是提供一种新型的急性髓系白血病的辅助诊断、预后诊断或危险度分层标记物及其应用。
[0007]为实现上述专利技术目的，本申请的技术方案如下：
[0008]一种急性髓系白血病的辅助诊断、预后诊断或危险度分层标记物，为ARF3基因。
[0009]专利权人经多次实验后首次发现，与正常人相比，急性髓系白血病(以下简称AML)患者骨髓中ARF3表达量显著上调，表明ARF3基因能够作为AML的辅助诊断标记物；同时，专利权人还发现，ARF3基因的表达水平与AML患者的预后呈显著性相关，ARF3高表达的AML患
者有更差的总体生存和无事件生存，提示预后不良，特别是在细胞遗传学危险分层中危组中；这也表明ARF3基因能够作为急性髓系白血病的预后诊断或危险度分层标记物。
[0010]基于此，本专利技术还提供了ARF3基因在制备急性髓系白血病辅助诊断产品中的应用、ARF3基因在制备急性髓系白血病预后诊断产品中的应用以及ARF3基因在制备急性髓系白血病危险度分层产品中的应用。
[0011]作为优选，急性髓系白血病辅助诊断产品、所述的急性髓系白血病预后诊断产品和所述的急性髓系白血病危险度分层产品为ARF3基因的特异性检测引物或ARF3基因的特异性检测探针；或含有该特异性检测引物和特异性检测探针中至少一种的试剂盒，或固载有该特异性检测探针的基因芯片。
[0012]作为具体实施方式的举例，本专利技术提供了一种ARF3基因的特异性检测引物，该ARF3基因的特异性检测引物包括具有如SEQ ID No.1所示核苷酸序列的正向引物，以及具有如SEQ ID No.2所示核苷酸序列的反向引物。
[0013]该正向引物和反向引物的核苷酸序列可以是如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示，也可以在SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示核苷酸序列的基础上增加若干碱基。
[0014]作为优选，上述的ARF3基因的特异性检测引物包括：
[0015]正向引物：5
’‑
GGAAGAGCTGATGAGAATGCTGG
‑3’
；
[0016]反向引物：5
’‑
ACCAGTTACGGTGACGAAGGGA
‑3’
。
[0017]本专利技术还提供了一种急性髓系白血病的辅助诊断、预后诊断或危险度分层试剂盒，该试剂盒中即含有上述的ARF3基因的特异性检测引物。
[0018]本专利技术的试剂盒优选是实时定量PCR试剂盒，为便于对ARF3基因的表达水平进行比对，试剂盒内，还含有内参基因GAPDH的特异性检测引物，该内参基因GAPDH的特异性检测引物包括：
[0019]正向引物：5
’‑
ATGGGGAAGGTGAAGGTCG
‑3’
；
[0020]反向引物：5
’‑
GGGTCATTGATGGCAACAATATC
‑3’
。
[0021]与现有技术相比，本专利技术的有益效果体现在：
[0022]专利权人经多次实验后首次发现，与正常人相比，急性髓系白血病(以下简称AML)患者骨髓中ARF3表达量显著上调；同时，专利权人还发现，ARF3基因的表达水平与AML患者的预后呈显著性相关，ARF3高表达的AML患者有更差的总体生存和无事件生存，提示预后不良，特别是在细胞遗传学危险分层中危组中；这表明ARF3基因能够作为急性髓系白血病的辅助诊断、预后诊断或危险度分层标记物，为AML的诊断或预后分析提供了新的检测指标，为AML的预后分析提供了新的理论依据。
附图说明
[0023]图1为ARF3基因在急性髓系白血病患者骨髓和正常骨髓中的表达情况；
[0024]其中，ARF3 mRNA expression(Fold change)表示ARF3基因的相对表达水平(差异倍数)，AML(n＝116)表示急性髓系白血病患者骨髓样本(样本数量为116)，Control(n＝15)表示正常骨髓样本(样本数量为15)；
[0025]图2为ARF3基因的表达与急性髓系白血病患者的总体生存率的相关系分析结果；
[0026]其中，Overall survival表示总体生存率，Time(days)表示治疗后时间(天数)，
Low ARF3(n＝34)表示ARF3低表达的样本(样本数量为34)，High ARF3(n＝34)表示ARF3高表达的样本(样本数量为34)，p＝0.015表示存在差异；下同；
[0027]图3为ARF3基因的表达与急性髓系白血病患者的无事件生存率的相关系分析结果；
[0028]其中，Event free sur本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种急性髓系白血病的辅助诊断、预后诊断或危险度分层标记物，其特征在于，为ARF3基因。2.ARF3基因在制备急性髓系白血病辅助诊断产品中的应用。3.ARF3基因在制备急性髓系白血病预后诊断产品中的应用。4.如权利要求3所述的ARF3基因在制备急性髓系白血病预后诊断产品中的应用，其特征在于，所述的急性髓系白血病预后诊断产品为ARF3基因的特异性检测引物或ARF3基因的特异性检测探针。5.如权利要求4所述的ARF3基因在制备急性髓系白血病预后诊断产品中的应用，其特征在于，所述的急性髓系白血病预后诊断产品为含有该特异性检测引物和特异性检测探针中至少一种的试剂盒，或固载有该特异性检测探针的基因芯片。6.ARF3基因在制备急性髓系白血病危险度分层产品中的应用。7.ARF3基因的特异性检测引物，其特征在于，包括具有如SEQ ID No.1所示核苷酸序列的正向引物，以及具有如SEQ ID No.2所示核苷酸序列的反向引物。8.如权利要求7所述的AR...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹多兵，牧启田，陈莹，欧阳桂芳，邬宁宁，张怡，
申请(专利权)人：宁波市第一医院，
类型：发明
国别省市：