黑色素瘤分子标志物及其在早期诊断和治疗黑色素瘤中的应用制造技术

本发明专利技术公开了黑色素瘤分子标志物及其在早期诊断和治疗黑色素瘤中的应用，黑色素瘤分子标志物包括miR

【技术实现步骤摘要】
黑色素瘤分子标志物及其在早期诊断和治疗黑色素瘤中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体地，本专利技术涉及黑色素瘤分子标志物及其在早期诊断和治疗黑色素瘤中的应用，更具体地，本专利技术涉及的黑色素瘤分子标志物包括miR
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196a、miR
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27a
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5p、miR
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27b
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5p。

技术介绍

[0002]皮肤黑色素瘤是全球第12大最常见的癌症，黑色素瘤是由黑色素细胞恶性转化产生，可以发生在皮肤和黏膜的所有部位，易转移，具有高度侵袭性、高度恶性导致高死亡率。黑色素瘤的诊断由临床和病理学标准相结合，包括查体、病理组织学检查和影像学检查，然而，由于其组织学形态多变，或仅有少量甚至没有任何可见色素，患者自身早期发现困难，临床有时与良性痣鉴别不易，早期诊断困难。黑色素瘤早期治疗以外科手术为主，晚期则包括化疗、靶向治疗和免疫治疗。相较于单独使用化疗治疗，靶向治疗和免疫治疗目前已明显改善晚期黑色素瘤患者的生存率，但这两种疗法通常受到耐药率的限制，且不具有普遍适用性，患者的绝对生存率仍然较低(Hamid O,Robert C,Daud A,et al.Five
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year survival outcomes for patients with advanced melanoma treated with pembrolizumab in KEYNOTE
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001[J].Annals of Oncology,2019,30(4):582
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588.)，因此，早期诊断和早期治疗对提高患者的生存率和生活质量至关重要。
[0003]生物标志物是一种可以标记系统、器官、组织、细胞及亚细胞结构或功能的改变或可能发生的改变的生化指标，在生物医学领域具有非常广泛的用途，生物标志物可用于疾病诊断、判断疾病分期或者用来评价新药或新疗法在目标人群中的安全性及有效性。生物标志物能够客观反映正常生理过程和病理过程。近年来，microRNA(微小RNA，miRNA)作为一种新型的癌症特异性生物标志物备受关注，miRNA是在真核生物中发现的一类内源性的非编码小分子RNA，存在于不同生物中，在Drosha R Nase的作用下由pri
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miRNA剪切成为70～100个核苷酸长度的具有茎环结构的pre
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miRNA，pre
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miRNA在Dicer酶作用下被剪切成19～25个核苷酸长度的成熟RNA，即miRNA。成熟miRNA通过与目标mRNA的3
’
端非编码区(3
’
untranslated region，3
’
UTR)特异性互补，导致mRNA翻译受到抑制。miRNA具有广泛的基因调节功能，据统计miRNA调节了人类约30％基因的功能，参与了一系列生命活动，包括细胞增殖及凋亡、器官形成、造血过程、发育进程等，与肿瘤的发生、诊断、治疗和预后等有着密切关系，肿瘤中超过50％的miRNA基因位于染色体脆性位点或染色体扩增、缺失或转位区域，相比于蛋白质标志物，miRNA表达异常出现的更早，对早期诊断更加有利，也更适合作为肿瘤的生物标志物。
[0004]因此，识别能够更好地用于黑色素瘤诊断和治疗的生物标志物对于本领域而言非常重要。鉴于此，本专利技术筛选了与黑色素瘤发生发展相关的miRNA标志物，并通过相关的验证实验验证了所述miRNA标志物用作黑色素瘤的预测标志物和治疗靶标的效能。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供黑色素瘤分子标志物及其在早期诊断和治疗黑色素瘤中的应用，所述分子标志物包括miR
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196a、miR
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27a
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5p、miR
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27b
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5p，本专利技术经实验验证首次发现miR
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196a、miR
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27a
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5p、miR
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27b
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5p三者联合对黑色素瘤具有较好的诊断效能，且具有协同治疗的效果。
[0006]本专利技术公开的分子标志物miR
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196a、miR
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27a
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5p、miR
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27b
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5p的序列均可在miRBase数据库(http://microrna.sanger.ac.uk/)中进行查询，其中，miR
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196a的序列如SEQ ID NO:17所示，miR
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27a
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5p的序列如SEQ ID NO:18所示，miR
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27b
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5p的序列如SEQ ID NO:19所示；
[0007]miR
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196a的序列：
[0008]GUGAAUUAGGUAGUUUCAUGUUGUUGGGCCUGGGUUUCUGAACACAACAACAUUAAACCACCCGAUUCAC(SEQ ID NO:17)
[0009]miR
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27a
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5p的序列：
[0010]AGGGCUUAGCUGCUUGUGAGCA(SEQ ID NO:18)
[0011]miR
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27b
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5p的序列：
[0012]AGAGCUUAGCUGAUUGGUGAAC(SEQ ID NO:19)
[0013]进一步，本专利技术中所述的miR
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196a包括miR
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196a初始miRNA、miR
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196a前体miRNA、成熟miR
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196a，所述miR
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196a初始miRNA在人细胞内被剪切并表达为成熟miR
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196a，所述miR
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196a前体miRNA在人细胞内被剪切并表达为成熟miR
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196a。作为进一步的优选，所述miR
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196a还包括：对miR
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196a进行碱基修饰或者在两端增加碱基获得的序列。
[0014]本专利技术的上述目的通过以下技术方案得以实现：
[0015]第一方面，本专利技术提供了检测分子标志物的试剂在制备诊断黑色素瘤产品中的应用。
[0016]进一步，所述分子标志物为miR
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196a、miR
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27a
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5p、miR
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27b
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5p。
[0017]进一步，所述试剂包括通过反转录PCR、实时定量PCR、原位杂交、芯片技术检测所述分子标志物表达水平的试剂。
[0018]进一步，通过反转录PCR检测本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测分子标志物的试剂在制备诊断黑色素瘤产品中的应用，其特征在于，所述分子标志物为miR
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196a、miR
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27a
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5p、miR
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27b
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5p。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂包括通过反转录PCR、实时定量PCR、原位杂交、芯片技术检测所述分子标志物表达水平的试剂。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，通过反转录PCR检测所述分子标志物表达水平的试剂包括特异性扩增所述分子标志物的引物；通过实时定量PCR检测所述分子标志物表达水平的试剂包括特异性扩增所述分子标志物的引物；通过原位杂交检测所述分子标志物表达水平的试剂包括特异性识别所述分子标志物的探针。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，特异性扩增所述分子标志物miR
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196a的引物的序列如SEQ ID NO:9
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SEQ ID NO:10所示；特异性扩增所述分子标志物miR
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27a
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5p的引物的序列如SEQ ID NO:11
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SEQ ID NO:12所示；特异性扩增所述分子标志物miR
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27b
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5p的引物的序列如SEQ ID NO:13
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SEQ ID NO:14所示。5.一种诊断黑色素瘤的产品，其特征在于，所述产品包含检测分子标志物miR
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196a、miR
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27a
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5p、miR
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27b
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5p表达水平的试剂；优选地，所述产品包括芯片、试剂盒；更优选地，所述芯片包括固相载体以及固定在固相载体上的特异性识别所述分子标志物miR
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196a、miR
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27a
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5p、miR
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27b
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5p的探针；更优选地，所述试剂盒包括特异性结合所述分子标志物miR
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196a、miR
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27a
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5p、miR
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27b
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5p的引物、探针或芯片。6.一种用于黑色素瘤早期筛查的系统，其特征在于，所述系统包括：(1)黑色素瘤评估装置：包括控制单元和存储单元，用于评估受试者是否患有黑色素瘤或患有黑色素瘤的风险概率；(2)彼此通信连接的信息通信终端装置：用于提供关于来自受试者的样本中分子标志物miR
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196a、miR
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27a
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5p、miR
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27b
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5p的表达水平的数据；所述黑色素瘤评估装置的控制单元包括如下四个单元：1)数据接收单元：用于接收从所述信息通信终端设备传输的关于所述样本中分子标志物miR
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196a、miR
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27a
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5p、miR
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27b
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5p表达水平的数据；2)...

【专利技术属性】
技术研发人员：孔云，杨志强，崔明鹿，张仙，
申请(专利权)人：北京百奥思科生物医学技术有限公司，
类型：发明
国别省市：