过表达CCR2的免疫细胞及其应用制造技术

本发明专利技术属于免疫学技术领域，具体涉及一种过表达CCR2的免疫细胞及其应用。本发明专利技术通过在免疫细胞过表达CCR2，可以与CCL2结合，具有抑制CCL2对肿瘤细胞生长、迁移及浸润的促进作用。经实验验证，通过在免疫细胞过表达CCR2，可使该免疫细胞的迁移能力更强，细胞因子分泌能力也更高，进而提高了免疫细胞对肿瘤微环境的免疫浸润能力以及肿瘤杀伤能力。本发明专利技术为细胞免疫治疗提供了一种新的选择，对于肿瘤疾病的预防和治疗具有重要意义。预防和治疗具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
过表达CCR2的免疫细胞及其应用


[0001]本专利技术涉及免疫学领域，尤其涉及一种过表达CCR2的免疫细胞，一种包括该免疫细胞的药物组合物及其在制备免疫治疗产品中的用途。

技术介绍

[0002]C
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C趋化因子受体2(C
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C MotifChemokine Receptor 2，CCR2)是人趋化因子受体家族的19个成员之一，位于3号染色体上，编码355个氨基酸残基蛋白，包括CCR2a和CCR2b两个亚型。CCR2属于G蛋白耦联受体，在各种细胞类型上都有发现。
[0003]CCL2是趋化因子中CC亚族的重要成员之一，是与CCR2结合的主要配体。CCL2和CCR2结合虽然不具有专一性，但从CCL2
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/
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、CCR2
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基因敲除小鼠具有相似的功能表型可以推测CCL2主要通过与CCR2结合发挥其生物学效应。在正常组织细胞中，CCL2可由多种活化的细胞产生，如成纤维细胞、内皮细胞、淋巴细胞以及巨噬细胞。研究表明乳腺癌、肺癌、前列腺癌以及结直肠癌等多种肿瘤细胞也能产生CCL2。
[0004]肿瘤转移是恶性肿瘤的主要特征，大多数肿瘤患者因为发生肿瘤转移死亡。肿瘤细胞转移过程中不仅可以适应新的微环境，还可以改变微环境为转移前微环境。肿瘤微环境是指肿瘤生长及转移肿瘤细胞所处的内外环境，其中包括肿瘤细胞周围的成纤维细胞、免疫和炎性细胞、胶质细胞等。CCL2作为在肿瘤微环境中重要并且研究广泛深入的趋化因子之一，通过自分泌或旁分泌促进肿瘤细胞生长与存活，参与肿瘤免疫耐受调节，诱导肿瘤血管生成，促进肿瘤侵袭和转移。许多研究表明在肿瘤患者的组织或血清中发现CCL2水平升高，且与肿瘤进展分级分期、侵袭转移和患者的预后密切相关。也有研究表明，靶向CCL2
‑
CCR2轴具有显著抗肿瘤生长及抑制转移的作用。
[0005]然而，目前针对CCL2
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CCR2的临床试验都局限于药物阻断的方案，且所取得的结果并不理想，因此，亟需利用CCL2
‑
CCR2机制，寻求新的肿瘤治疗策略。

技术实现思路

[0006]本专利技术目的在于提供一种过表达CCR2的免疫细胞，一种包括该免疫细胞的药物组合物及其在制备免疫治疗产品中的用途，旨在发挥CCL2
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CCR2对细胞招募的优势，解决现有针对CCL2
‑
CCR2局限于药物阻断的技术问题，为肿瘤疾病的预防或治疗提供了新的方法。
[0007]为了实现上述专利技术目的，本专利技术一方面，提供了一种免疫细胞，该免疫细胞过表达CCR2。
[0008]在一些实施方案中，CCR2为CCR2a和/或CCR2b，优选为CCR2a。进一步地，编码CCR2a的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
[0009]在一些实施方案中，免疫细胞为T细胞、自然杀伤细胞(Natural Killer cell，NK)、巨噬细胞、树突状细胞中的至少一种；其中T细胞优选为肿瘤浸润淋巴细胞(Tumor Infiltrating Lymphocyte，TIL)、细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine
‑
InducedKiller，CIK)、嵌合抗原受体T细胞(ChimericAntigen Receptor T cell，CAR
‑
T)或自然杀伤T细胞
(Natural KillerT cell，NKT)，更优选TIL。
[0010]本专利技术另一方面，提供了一种药物组合物，其包括上述的免疫细胞。
[0011]本专利技术再一方面，提供了上述的免疫细胞或上述的药物组合物在制备免疫治疗产品中的用途。
[0012]在一些实施方案中，该免疫治疗产品为细胞免疫治疗产品。
[0013]在一些实施方案中，该免疫治疗产品用于预防或治疗肿瘤。进一步地，该肿瘤表达CCL2，优选高表达CCL2。更进一步地，该肿瘤为高表达CCL2的转移性肿瘤。
[0014]在一些实施方案中，该免疫治疗产品用于预防或治疗肺癌、宫颈癌、黑色素瘤、胃癌和/或乳腺癌，优选用于原本低表达或不表达CCR2的肿瘤，如部分肺腺癌病人。
[0015]本专利技术通过在免疫细胞过表达CCR2，可以与CCL2结合，具有抑制肿瘤细胞生长、迁移及浸润的促进作用。经实验验证，通过在免疫细胞过表达CCR2，可使该免疫细胞的迁移能力更强，细胞因子分泌能力也更高，进而提高了免疫细胞对肿瘤微环境的免疫浸润能力以及肿瘤杀伤能力。本专利技术为细胞免疫治疗提供了一种新的选择，对于肿瘤疾病的预防和治疗具有重要意义。
附图说明
[0016]图1为本专利技术实施例1中，用TIL细胞刺激前后，CCR2+/
‑
细胞表达CD107a+的比例变化结果；
[0017]图2为本专利技术实施例1中，用PBMC细胞刺激前后，CCR2
+/
‑
细胞表达CD107a
+
的比例变化结果；
[0018]图3为本专利技术实施例2中，流式检测过表达细胞的CCR2a过表达蛋白表达水平；
[0019]图4和图5为本专利技术实施例3中，过表达CCR2a和CCR2b后，对肿瘤靶细胞的杀伤能力检测结果；
[0020]图6为本专利技术实施例4中，CD3
+
细胞CCR2a表达水平的检测结果；
[0021]图7为本专利技术实施例4中，病毒转染后GFP
+
细胞在各组中占CD3
+
细胞的百分比结果；
[0022]图8为本专利技术实施例4中，病毒转染后GFP
+
CCR2a
+
细胞在各组中占CD3
+
细胞的百分比结果；
[0023]图9为本专利技术实施例4中，transwell CD3
+
迁移细胞占活细胞百分比结果；
[0024]图10为本专利技术实施例4中，GFP阳性细胞在transwell活的CD3迁移细胞中所占比例结果；
[0025]图11为本专利技术实施例4中，GFP
+
CCR2a
+
阳性细胞在transwell活的CD3迁移细胞中所占比例结果；
[0026]图12为本专利技术实施例4中，GFP
+
CCR2a
+
阳性细胞在transwell活的CD3
+
GFP
+
细胞中所占比例结果；
[0027]图13为本专利技术实施例5中，PBMC在实验后GFP
+
CCR2a
+
阳性细胞在transwell活的CD3
+
GFP
+
细胞中所占比例结果；
[0028]图14为本专利技术实施例5中，PBMC在实验后GFP
+
CCR2a
+
阳性细胞在transwel本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种免疫细胞，其特征在于，所述免疫细胞过表达CCR2。2.根据权利要求1所述的免疫细胞，其特征在于，所述CCR2为CCR2a和/或CCR2b。3.根据权利要求2所述的免疫细胞，其特征在于，编码所述CCR2a的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。4.根据权利要求1
‑
3任一项所述的免疫细胞，其特征在于，所述免疫细胞为T细胞、自然杀伤细胞、巨噬细胞、树突状细胞中的至少一种。5.根据权利要求4所述的免疫细胞，其特征在于，所述T细胞为肿瘤浸润淋巴细胞、细胞因子诱导的杀伤细胞、嵌...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚拯，李亚腾，李斌，李文静，高青，刁树青，王泽瑶，
申请(专利权)人：青岛华赛伯曼医学细胞生物有限公司，
类型：发明
国别省市：