靶向CXCR5阳性细胞的CAR-T细胞、核酸、载体、慢病毒及CAR-T细胞的应用制造技术

本发明专利技术提供一种靶向CXCR5阳性细胞的CAR

【技术实现步骤摘要】
ID NO:2所示的氨基酸序列。
[0011]进一步地，所述胞内共刺激结构域选自CD28的胞内共刺激结构域，具有如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。
[0012]进一步地，所述胞内结构域选自CD3ζ的胞内结构域，具有如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。
[0013]进一步地，所述嵌合抗原受体具有如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列。
[0014]本专利技术第二方面提供一种核酸，所述核酸包括本专利技术第一方面提供的嵌合抗原受体的编码序列。
[0015]本专利技术第三方面提供一种载体，所述载体包括本专利技术第二方面提供的核酸。
[0016]本专利技术第四方面提供一种慢病毒，所述慢病毒包括本专利技术第三方面提供的载体。
[0017]本专利技术第五方面提供上述任一所述的CAR
‑
T细胞在制备用于治疗肿瘤的药物中的应用。
[0018]进一步地，所述肿瘤为CXCR5阳性。
[0019]本专利技术提供的CAR
‑
T细胞可以靶向并杀灭CXCR5高表达的肿瘤细胞，并防止肿瘤复发，可用于制备治疗肿瘤的药物中，提高肿瘤疾病的治疗效果。
附图说明
[0020]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作一简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0021]图1为本专利技术提供的嵌合抗原受体的设计示意图；
[0022]图2为CXCL13
‑
CAR
‑
T细胞流式检测结果；
[0023]图3为构建得到的293T
‑
WT、293T
‑
CXCR3和293T
‑
CXCR5这三种293T细胞系流式细胞仪检测结果；
[0024]图4为NT、CXCL13
‑
CAR
‑
T细胞与293T
‑
WT、293T
‑
CXCR3和293T
‑
CXCR5三种293T细胞系共培养5天后，T细胞(CD3
+
)和剩余癌细胞(GFP
+
)的流式细胞仪检测结果；
[0025]图5为NT、CXCL13
‑
CAR
‑
T细胞与293T
‑
WT、293T
‑
CXCR3和293T
‑
CXCR5三种293T细胞系共培养5天后，IFNγ和IL2的检测结果；
[0026]图6为CA46、SU
‑
DHL
‑
6和Daudi这三种B淋巴瘤细胞中CXCR5表达情况的流式细胞仪检测结果；
[0027]图7为NT、CXCL13
‑
CAR
‑
T细胞与三种CXCR5
+
B淋巴瘤细胞共培养5天后残留癌细胞的比例示意图；
[0028]图8为NT、CXCL13
‑
CAR
‑
T细胞与三种CXCR5
+
B淋巴瘤细胞共培养24h后上清液中IFNγ和IL
‑
2的含量检测结果；
[0029]图9为荷瘤小鼠分别注射NT或CXCL13
‑
CAR
‑
T细胞后的IVIS成像图片。
具体实施方式
[0030]为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术的实施例，对本
专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0031]下面对本专利技术涉及的部分术语进行解释：
[0032]术语“嵌合抗原受体”(CAR)是人工改造受体，能够将识别肿瘤细胞表面抗原的特异性分子(如抗体)锚定在免疫细胞(如T细胞)上，使免疫细胞识别肿瘤抗原或病毒抗原和杀死肿瘤细胞或病毒的细胞。
[0033]术语“结构域”是生物大分子中具有特异结构和独立功能的区域。
[0034]术语“共刺激”是指淋巴细胞激活第二信号的来源，共刺激通常由参与适应性免疫的免疫细胞(例如T细胞)表面共刺激分子及其受体相互作用而产生。
[0035]术语“铰链区”是组成IgG、IgA和IgD类免疫球蛋白分子的一种结构域，位于CH1和CH2间，连接Fab和Fc段，或者连接如CD8、CD4、PD1等膜蛋白的胞外功能结构域与跨膜区之间的区段。该区段富含脯氨酸，不形成α螺旋，易发生伸展及一定程度扭曲，有利于抗体的抗原结合部位与抗原表位间的互补性结合。
[0036]术语“CXCL13”也称为B淋巴细胞趋化因子，是CXCR5趋化因子受体的配体。上述趋化因子和受体在恶性肿瘤的转移和侵袭的调节中表现出作用。与正常组织相比，CXCL13和CXCR5在多种癌组织类型中为局部上调。在这些恶性肿瘤的患者的血清中CXCL13水平也会升高，另外，可溶性CXCL13趋化因子在体内和体外都可以增强恶性肿瘤细胞的增殖和迁移。
[0037]术语“CD8α”是T淋巴细胞表面表达的糖蛋白，在免疫系统中介导细胞之间相互作用。CD8抗原作为T淋巴细胞中T细胞受体的共受体，共同识别抗原递呈细胞呈递的抗原信息。
[0038]术语“CD28”是T淋巴细胞表面表达的共刺激分子，可与B细胞表面的CD80结合，可促进T细胞的增殖分化，是T细胞活化的第二信号。
[0039]术语“CD3ζ”是I型跨膜蛋白，是T细胞抗原受体复合体的一部分，参与T细胞激活。
[0040]术语“慢病毒载体”是指以人类免疫缺陷病毒
‑
1(HIV
‑
1)来源的一种病毒载体，慢病毒载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息，是慢病毒载体系统的主要组成部分。携带有外源基因的慢病毒载体在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下，经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒，通过感染细胞或活体组织，实现外源基因在细胞或活体组织中表达。
[0041]术语“293T细胞”是293细胞通过基因技术派生出的细胞系，瞬时转染293T细胞是过表达蛋白并获得细胞内及细胞外(分泌的或膜)蛋白的便捷方式。
[0042]术语“治疗”是指减轻或消除病症和/或伴随的症状的方法。
[0043]术语“肿瘤”是指由异常细胞生长形成的赘生物或实体病变。
[0044]术语“淋巴瘤”是指免疫系统的淋巴细胞的恶性肿瘤。
[0045]术语“转染”是指重组质粒载体或游离核苷酸在脂质体等介导下进入真核细胞。
[0046]术语“感染”是指在基因转移实验中强调重组病毒载体入侵受体细胞的过程。
[0047]实施例1靶向本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向CXCR5阳性细胞的CAR
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T细胞，其特征在于，所述CAR
‑
T细胞能够表达嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包括靶向CXCR5的抗原结合结构域、铰链区、跨膜结构域、胞内共刺激结构域和胞内结构域，其中，所述抗原结合结构域来源于人CXCL13，具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的CAR
‑
T细胞，其特征在于，所述铰链区和跨膜结构域选自CD8α的铰链区和跨膜结构域，具有如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。3.根据权利要求1所述的CAR
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T细胞，其特征在于，所述胞内共刺激结构域选自CD28的胞内共刺激结构域，具有如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。4.根据权利要求1所述的C...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜红伟，赵海芳，郑骏年，
申请(专利权)人：徐州医科大学，
类型：发明
国别省市：