一种肿瘤内分泌药物诱导的休眠或复发细胞株的构建方法技术

本发明专利技术公开了一种肿瘤内分泌治疗药物诱导的休眠或复发细胞株的构建方法，通过生物学手段，转染表达荧光素酶基因的载体进入肿瘤细胞，筛选稳定表达荧光素酶基因的肿瘤细胞进行裸鼠原位异种移植成瘤实验，裸鼠成瘤后，注射肿瘤内分泌治疗药物治疗。治疗结束后，取出不增殖的肿瘤块和恢复增殖的肿瘤块，分别进行原代培养，得到休眠样细胞株和复发样细胞株。本发明专利技术还公开了氟维斯群诱导的人源雌激素受体阳性乳腺癌的休眠细胞株MCF7

【技术实现步骤摘要】
一种肿瘤内分泌药物诱导的休眠或复发细胞株的构建方法


[0001]本专利技术属于肿瘤生物学领域，具体涉及一种肿瘤内分泌治疗药物诱导的休眠或复发细胞株的构建方法。

技术介绍

[0002]乳腺癌是目前发病率和死亡率最高的妇科恶性肿瘤，且于2020年发病率首次取代肺癌成为全球第一大癌症，占所有新增癌症患者的11.7％，其中，超过50％的乳腺癌患者雌激素受体阳性，该类乳腺癌的治疗也成为人们关注的焦点。传统的化疗和放疗由于缺乏特异性，取得疗效的同时往往也给患者带来较大的毒副作用，临床结局不佳。因此，为了使疗效达到最优化、毒性最低化，针对不同分子遗传学背景的群体和/或个体，根据其分子特点进行有选择性的“个体化”治疗具有重要临床意义。目前，内分泌治疗成为雌激素受体阳性患者临床治疗中的主流疗法，雌激素受体阳性的乳腺癌患者有多种内分泌治疗临床药物选择，且表现出了良好的疗效，能够有效改善预后，改善患者临床结局。但是大部分患者在接受内分泌治疗肿瘤消退后的5年甚至更长时间后出现复发，针对此类晚期乳腺癌患者，氟维斯群作为其主流临床的内分泌药物，在改善患者预后方面非常有限，这类患者通常即使服用药物，生存期也只有1
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2年，临床结局不佳。药物治疗下肿瘤细胞的休眠，是促使肿瘤耐药、复发和转移的一大过程和特性。
[0003]目前尚无模拟临床体内构建的针对休眠和复发特性的细胞株，仅有一些具有耐药特性的细胞株，且这些耐药特性细胞株产生多药耐药，致使耐药机制复杂，不利于对单一药物引起的肿瘤休眠、耐药、复发及转移的研究。
[0004]随着肿瘤研究的深入，应用传统方法(如卡尺测量肿瘤体积、肿瘤组织切片等)进行肿瘤研究已存在诸多限制。例如，进行组织切片观测前需要处死小鼠取出肿瘤组织，因此，在不同时间点或不同实验组都需要处死一批实验小鼠以获取足够的统计学数据，这样不但大大增加了实验成本，而且很难消除由于小鼠个体差异而产生的误差，无法获取可靠的重复性数据，并且在制作切片时也无法保证实验的准确性。此外，微小转移灶也很难被传统手段检测到。
[0005]荧光素酶(Luciferase)是一类产生生物发光的氧化酶，可以在实验室中通过基因工程生产，并被用于多种目的，荧光素酶基因可以被合成并插入到生物体中或转染到细胞中。在萤光素酶反应中，当萤光素酶作用于合适的萤光素底物时会发光，而发出的光子可以通过光敏设备，如光度计或改进的光学显微镜检测，这就使得对于生物过程观察成为可能。由于荧光素酶生物发光不需要光激发，因此自发荧光很小，因此几乎没有背景荧光。表达荧光素酶的细胞移植到动物身上时，可进行全动物体内活体成像，是研究活体动物(如小鼠)细胞群的强大技术。这种技术已被应用于动物模型中跟踪肿瘤发生和肿瘤对治疗的反应，尤其对微小转移灶具有更高敏感性。

技术实现思路

[0006]本专利技术为了解决现有技术中的不足和缺点，提出一种肿瘤内分泌治疗药物诱导的休眠或复发细胞株的构建方法，具体技术方案如下：
[0007]本专利技术第一方面提供一种肿瘤内分泌治疗药物诱导的休眠或复发细胞株的构建方法，包括如下步骤：
[0008](1)转染表达荧光素酶基因的载体进入肿瘤细胞，筛选稳定表达荧光素酶基因的肿瘤细胞；
[0009](2)将步骤(1)所述稳定表达荧光素酶基因的肿瘤细胞进行裸鼠原位异种移植成瘤实验，裸鼠成瘤后，注射肿瘤内分泌治疗药物治疗；
[0010](3)步骤(2)治疗结束后，取出不增殖的肿瘤块或残留灶，进行原代培养，验证细胞休眠特性，得到休眠样细胞株，即为肿瘤内分泌治疗药物诱导的休眠细胞株；
[0011](4)步骤(2)治疗结束后，待肿瘤恢复增殖，取出肿瘤块，进行原代培养，验证细胞复发特性，得到复发样细胞株，即为肿瘤内分泌治疗药物诱导的复发细胞株。
[0012]进一步地，本专利技术的上述技术方案中，所述肿瘤内分泌治疗药物的治疗周期按照药物临床治疗周期和人与小鼠平均寿命比率换算确定。
[0013]进一步地，本专利技术的上述技术方案中，所述肿瘤细胞为人源雌激素受体阳性乳腺癌细胞；优选地，所述人源雌激素受体阳性乳腺癌细胞选自MCF7细胞株；
[0014]所述肿瘤内分泌治疗药物为氟维斯群；优选地，每kg小鼠体重注射所述氟维斯群的剂量为25～35mg；优选地，每kg小鼠体重注射所述氟维斯群的剂量为30mg。
[0015]进一步地，本专利技术的上述技术方案中，步骤(2)中所述裸鼠为4
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6周龄BALB/C雌性裸鼠；
[0016]优选地，步骤(2)中肿瘤内分泌治疗药物治疗4周；
[0017]优选地，步骤(4)中肿瘤恢复增殖至步骤(2)中所述裸鼠成瘤体积的5～15倍。
[0018]本专利技术第二方面提供上述构建方法构建的肿瘤内分泌治疗药物诱导的休眠或复发细胞株
[0019]本专利技术第三方面提供一种氟维斯群诱导的人源雌激素受体阳性乳腺癌的休眠细胞株，命名为人源雌激素受体阳性乳腺癌细胞MCF7
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FD，保藏编号为CCTCC NO：C2021199。
[0020]进一步地，所述休眠细胞株细胞大小和形状较为一致，成铺路石样，呈现出偏向间充质的形态。所述休眠细胞极性小且圆润的细胞比例大。所述休眠细胞的细胞周期相对于亲本细胞呈现出G0/G1周期阻滞特性，高度耐受氟维斯群，耐受程度约是亲本细胞的2500倍。
[0021]本专利技术第四方面提供一种氟维斯群诱导的人源雌激素受体阳性乳腺癌的复发细胞株，命名为人源雌激素受体阳性乳腺癌细胞MCF7
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FR，保藏编号为CCTCC NO：C2021200。
[0022]进一步地，所述复发细胞株细胞大小不一，有梭形与多角形，多有突起，且多角形形态各异，呈现出偏向上皮样的形态。所述复发细胞极性强且有触角的细胞比例大。所述复发细胞的细胞周期相对于亲本细胞未呈现出G0/G1周期阻滞，恢复细胞周期和细胞增殖，高度耐受氟维斯群，耐受程度约是亲本细胞的2500倍。
[0023]本专利技术第五方面提供所述细胞株作为肿瘤耐药、休眠、复发或转移机制研究的细胞模型的用途。
[0024]本专利技术第六方面提供所述细胞株作为肿瘤靶向治疗位点筛选的细胞模型的用途；优选地，作为肿瘤复发的靶向治疗位点筛选的细胞模型的用途；优选地，作为晚期雌激素受体阳性乳腺癌靶向治疗位点筛选的细胞模型的用途。
[0025]本专利技术第七方面提供所述细胞株作为肿瘤靶向治疗药物筛选的细胞模型的用途；优选地，作为肿瘤复发的靶向治疗药物筛选的细胞模型的用途；优选地，作为晚期雌激素受体阳性乳腺癌治疗药物筛选的细胞模型的用途。
[0026]本专利技术的有益效果：
[0027]1、本专利技术提供的肿瘤内分泌治疗药物诱导的休眠或复发细胞株的构建方法，通过生物学手段，转染表达荧光素酶基因的载体进入肿瘤细胞，筛选稳定表达荧光素酶基因的肿瘤细胞进行裸鼠原位异种移植成瘤实验，裸鼠成瘤后，注射肿瘤内分泌治疗药物治疗。治疗结束后，取出不增殖的肿瘤块或残留灶，进行原代培养，验证细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种肿瘤内分泌治疗药物诱导的休眠或复发细胞株的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)转染表达荧光素酶基因的载体进入肿瘤细胞，筛选稳定表达荧光素酶基因的肿瘤细胞；(2)将步骤(1)所述稳定表达荧光素酶基因的肿瘤细胞进行裸鼠原位异种移植成瘤实验，裸鼠成瘤后，注射肿瘤内分泌治疗药物治疗；(3)步骤(2)治疗结束后，取出不增殖的肿瘤块或残留灶，进行原代培养，验证细胞休眠特性，得到休眠样细胞株，即为肿瘤内分泌治疗药物诱导的休眠细胞株；(4)步骤(2)治疗结束后，待肿瘤恢复增殖，取出肿瘤块，进行原代培养，验证细胞复发特性，得到复发样细胞株，即为肿瘤内分泌治疗药物诱导的复发细胞株。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述肿瘤内分泌治疗药物的治疗周期按照药物临床治疗周期和人与小鼠平均寿命比率换算确定。3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述肿瘤细胞为人源雌激素受体阳性乳腺癌细胞；所述肿瘤内分泌治疗药物为氟维斯群；优选地，每kg小鼠体重注射所述氟维斯群的剂量为25～35mg；优选地，每kg小鼠体重注射所述氟维斯群的剂量为30mg。4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中所述裸鼠为4
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6周龄BALB/C雌性裸鼠；优选地，步骤(2)...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈淑，罗贝，
申请(专利权)人：清华大学深圳国际研究生院，
类型：发明
国别省市：