【技术实现步骤摘要】
一种快速检测混合菌药敏信息的方法
[0001]本专利技术涉及药敏检测
,特别涉及一种快速检测混合菌药敏信息的方法。
技术介绍
[0002]近年来,微生物耐药形式形势日趋严峻,多重耐药菌出现的概率逐渐升高,在临床上,而抗生素的滥用是导致这一现象的重要原因之一,临床分离的致病菌的精准用药正逐渐代替经验用药,因此,药敏MIC值检测越来越重要。
[0003]目前传统的药敏检测方法主要步骤如下:(1)临床采集的标本如血液标本、尿液标本、痰标本等进行平板或血培养瓶培养,同时进行革兰染色镜检,根据染色反应及菌株形态特征,将染色结果作危急值报告;(2)获得的菌进行初步诊断,再次分离纯化;(3)使用纯的单菌落进行药敏试验检测,获得致病菌的耐药信息,向临床发最终报告。
[0004]MALDI
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TOF MS作为一种新兴的软电离质谱技术,主要是通过采集未知微生物的蛋白质指纹图谱并与已知数据库中的蛋白图谱进行比对,从而确定其分类学种属地位。目前常用的微生物检测方法为形态学特征、生理生化反应、血清学反应和测序,形态学和生化是目前临床上最常用的方法,形态学法是根据微生物在固/液体培养基上的生长状态及染色反应、显微镜下观察结果来初步进行物种鉴定,该方法成本较低、检测速度相对较快,但对操作者的专业要求较高,很容易出现误判,且鉴定种类有限。生理生化反应法流程比较繁琐,需要先判断是革兰氏阳性菌还是阴性菌,然后再根据形态、酶反应、显色等不同方法,将具体微生物种类鉴定出来。血清学反应是利用已知菌种的抗血清,观察与待鉴 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种快速检测混合菌药敏信息的方法,其特征在于,包括以下步骤:菌体富集:将血液阳性样本与表面活性剂溶液混合,离心后弃去上清;所得沉淀与清洗液混合并离心,弃去上清,得到沉淀的菌体;药敏检测:配制菌悬液;将同一革兰氏染色类型的两种不同菌的菌悬液混合,制得混合菌悬液;将混合菌悬液加至药敏芯片靶板上,使药敏芯片靶板上每个点样位置上混合菌体的数量低于质谱检测阈值,然后进行孵育,孵育完成之后吸弃上部液体,对药敏芯片靶板上点样位置上的物质进行质谱检测;根据质谱检测结果进行药敏结果判读,药敏芯片靶板上质谱检测出微生物的位置认为有微生物生长,而无法检测出微生物的点认为微生物生长被抑制,依据该信息分别得到两种不同菌的MIC值,再依据CLSI、专家共识、EUCAST指南确定敏感、中介、耐药信息。2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述药敏芯片靶板包括阳性药敏芯片靶板和阴性药敏芯片靶板,所述阳性药敏芯片靶板上包被有阳性菌适用的抗生素药物,所述阴性药敏芯片靶板上包被有阴性菌适用的抗生素药物;所述药敏检测步骤之前还包括样本革兰氏染色步骤,根据所述革兰氏染色步骤确定菌为阳性菌或阴性菌;所述药敏检测步骤包括:根据菌种不同选用不同的药敏芯片靶板:当菌为阳性菌时,选择阳性菌药敏芯片靶板进行药敏检测;当菌为阴性菌时,选择阴性菌药敏芯片靶板进行药敏检测。3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述阳性药敏芯片靶板包括96孔平面靶板和包被在平面靶板上的抗生素,在96孔平面靶板上的96个孔位内分别添加的抗生素和主要浓度(μg/mL)为:孔位1
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4:阿米卡星(AN):4,16,32,64孔位5
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9:庆大霉素(GM):1,2,4,8,16孔位10
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16:左氧氟沙星(LEV):0.125,0.25,0.5,1,2,4,8孔位17
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19:氨曲南(ATM):4,8,16孔位20
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25:亚胺培南(IPM):0.5,1,2,4,8,16孔位26
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31:美罗培南(MEM):0.25,0.5,1,2,4,8孔位32
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37:替加环素(TGC):0.5,1,2,4,8,16孔位38
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41:头孢呋辛(CXM):1,4,8,16孔位42
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47:头孢他啶(CAZ):1,2,4,8,16,32孔位48
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54:头孢曲松(CRO):1,2,4,8,16,32,64孔位55
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60:头孢吡肟(FEP):1,2,4,8,16,32,孔位61
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64:头孢西丁(FOX):8,16,32,64孔位65
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69:多粘菌素B(PB):0.5,1,2,4,8孔位70
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73:米诺环素(MI):2,4,8,16孔位74
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76:氨苄西林/舒巴坦(SAM):8/4,16/8,32/16孔位77
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81:复方新诺明(SXT):1/19,2/38,4/76,8/152,16/304孔位82
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85:头孢他啶/阿维巴坦(CZA):0.5/4,8/4,16/4,32/4
孔位86
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91:哌拉西林/他唑巴坦(TZP):4/4,8/4,16/4,32/4,64/4,128/4孔位92
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95:头孢哌酮/舒巴坦:8/4、16/8、32/16、64/32孔96:阳性对照。4.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述阴性药敏芯片靶板包括96孔平面靶板和包被在平面靶板上的抗生素,在96孔平面靶...
【专利技术属性】
技术研发人员:曹洁茹,蔡克亚,赵高岭,刘美丽,孙苛苛,韩珍珍,
申请(专利权)人:郑州安图生物工程股份有限公司,
类型:发明
国别省市:
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