一种快速初步筛查污染奶样中支原体的系统及其方法技术方案

本发明专利技术涉及一种快速初步筛查污染奶样中支原体的系统及其方法，包括离心机、过滤器、培养皿、色度检测仪，其筛查方法包括奶液预处理，培养检测。本发明专利技术利用液体培养基对预处理后的牛乳样本进行培养通过显色反应指示实验结果，较传统的检测方法极大的提高了检测效率，降低了检测成本，达到快速筛查致病病原及对牛传染性乳房炎进行初步诊断的目的，有效减少牧场或者乳企中乳汁的初步筛查的工作成本及劳动强度，并可及时发现可疑的奶样，从而提高了鲜奶质量检测的精度和效率。质量检测的精度和效率。质量检测的精度和效率。

【技术实现步骤摘要】
一种快速初步筛查污染奶样中支原体的系统及其方法


[0001]本专利技术涉及一种牛奶支原体检测方法，属生物培养基制备及生物检测


技术介绍

[0002]传染性乳房炎：是由传染性致病菌感染引起奶牛临床或者隐性乳房炎，特点是传染性乳房炎感染动物后，临床感染率逐步上升；病原可以通过器械、人员传染，甚至饲料、水源。牛支原体感染头胎奶牛后，会导致感染动物的后期经产胎次泌乳量的下降，由高产牛变为低产牛。目前金黄色葡萄球菌、无乳链球菌均为传染性乳房炎的致病病原。此外牛支原体（M. bovis） 也为牛传染性乳房炎的常见致病原，牛支原体可导致牛的局部炎症,如肺,乳房,生殖道,关节发炎甚至引起不孕等疾病。主要引起乳腺炎，导致泌乳锐减。
[0003]目前牛传染性乳房炎常见牛支原体筛查诊断方法主要为菌落观察法、核酸检测法、探针法、荧光显色法及显色法，虽然可以满足检测作业的需要，但检测效率低、检测作业精度差且检测作业时的成本及劳动强度也相对较高。
[0004]因此针对这一问题，迫切需要开发一种快速初步筛查污染奶样中支原体的系统及其方法，以满足实际使用的需要。

技术实现思路

[0005]为了解决现有技术上的不足，本专利技术提供一种快速初步筛查污染奶样中支原体的系统及其方法。
[0006]一种快速初步筛查污染奶样中支原体的系统，包括离心机、过滤器、培养皿、色度检测仪，其中所述离心机通过导流管与至少一个过滤器连接，所述过滤器另与若干培养皿连接，且各培养皿相互并联，所述色度检测仪位于培养皿上方，其光轴与培养皿上端面呈30
°
—90
°
夹角。
[0007]优选的，所述培养皿包括承载架、承载托盘、培养盘、透明密封盖、温度传感器、单向阀、超声波振荡机构、硅胶加热条及控制电路，所述承载架为轴线与水平面垂直分布的柱状框架结构，所述承载托盘为横断面呈“凵”字形的闭合环状结构，嵌于承载架上端面并与承载架同轴分布，所述培养盘嵌于承载托盘上端面内，与承载托盘槽底相抵并同轴分布，所述培养盘、透明密封盖均为横断面呈“凵”字形槽状结构，且透明密封盖包覆在培养盘上端面并与培养盘构成闭合腔体结构，且所述透明密封盖侧表面通过转台机构与承载架上端面铰接，所述透明密封盖上设一个加液口和一个排气口，且加液口和排气口对称分布在培养盘轴线两侧，并与培养盘轴线呈0
°
—60
°
夹角，且加液口和排气口均与一个单向阀连接，所述温度传感器嵌于承载托盘内，与承载托盘同轴分布并通过弹性连接机构与承载托盘内侧面连接，所述硅胶加热条至少一条，嵌于承载托盘槽底上表面并为与承载托盘同轴分布的闭合环状结构，所述超声波振荡机构嵌于承载托盘侧壁外表面，并环绕承载托盘轴线均布，所述控制电路嵌于承载机架外表面，并分别与温度传感器、单向阀、超声波振荡机构、硅胶加热条及转台机构电气连接。
[0008]一种快速初步筛查污染奶样中支原体的筛查方法，包括如下步骤;S1，奶液预处理，以1—5ml作为一份奶样，然后对至少一份奶样通过离心机进行离心作业，并对离心后的奶样通过过滤器以0.40
‑
0.45
µ
m进行过滤处理并对滤液进行收集备用；S2，培养检测，将S1步骤收集的滤液与液体培养基一同添加到培养皿中进行培养作业，并在培养20—60分钟后通过色度检测仪进行显色法检测，即可得到支原体检测结果。
[0009]进一步的，所述的液体培养基由以下重量份数组组分构成：PPLO肉汤10%—15%、复合马血清5%—11%、25%酵母浸出液13%—21%、氨苄青霉素2.3%—4.5%、万古霉素2.1%—3.5%、葡萄糖3%—6%、丙酮酸钠0.5%—1.8%、牛肺消化液1.5%—3.1%和1%酚红0.3%—2.3%，复合厄氏培养基0—11%，余量为超纯水。
[0010]进一步的，所述的氨苄青霉素为5
‑
8万单位。
[0011]进一步的，所述的25%酵母浸出液的制备方法为：将鲜酵母溶于质量为鲜酵母质量1.5—5倍的超纯水中并搅拌均匀，并在鲜酵母充分溶解后煮沸并持续15min，然后以10—20℃/min的速度快速冷却至常温，并对冷却液以3500—5000r/min离心分离15min，提取上清液，然后对上清液再次煮沸并持续15min，并以10—20℃/min的速度快速冷却至常温，最后用K型澄清滤极过滤后，再用0. 22um无菌滤膜过滤除菌，取滤液并对滤液以4℃恒温保存即可。
[0012]进一步的，所述的牛肺消化液制备方法为：第一步，牛肺煮制，将健康的牛肺搅碎，并使牛肺颗粒粒径不大于1毫米，并将牛肺颗粒与质量为牛肺颗粒质量2.5—6倍的超纯水混合，然后将混合液在电炉上加热至60℃—80℃并持续搅拌；第二步，混合物调制，对第一步中制得的混合液加热保温1—10分钟后向混合液中加入占混合液总量0.3%—1.1%的碳酸钠，并持续保温搅拌至少1分钟，然后冷却至45℃并再次向混合液中加入占混合液总量0.8%—2.1%的胰酶溶液，最后对混合液以45 ℃恒温条件下水浴3h，并在水浴过程中去除液面油脂，同时向混合液中加入占混合液总量0.9%—1.8%的浓盐酸并搅拌均匀；第三步，过滤收集，将第二步制备得到的混合液煮沸并持续15 min后冷却至常温，然后经双层纱布过滤，并对滤液以2500—4000 r/min离心分离15 min，收集滤液，并对滤液采用滤纸过滤，然后将滤纸过滤后的滤液煮沸并持续15 min，然后冷却至室温，并以 NaOH溶液将混合液pH值调至7.8，最后以121 ℃灭菌15 min，并4℃恒温保存即可。
[0013]进一步的，所述的液体培养基制备方法为：第一步，调制处理，将PPLO肉汤，丙酮酸钠，MEM，牛肺消化液，1%酚红与超纯水充分混合，并调Ph值至7.8，然后由121℃灭菌15min，冷却至50
‑
55℃；第二步，二次处理，将复合马血清，酵母浸出液，氨苄青霉素,万古霉素添加到第一步制备的混合液中并混合均匀，然后对混合液Ph值至7.8，即可得到成品。
[0014]本专利技术利用液体培养基对预处理后的牛乳样本进行培养通过显色反应指示实验结果，较传统的检测方法极大的提高了检测效率，降低了检测成本，达到快速筛查致病病原及对牛传染性乳房炎进行初步诊断的目的，有效减少牧场或者乳企中乳汁的初步筛查的工作成本及劳动强度，并可及时发现可疑的奶样，从而提高了鲜奶质量检测的精度和效率。
附图说明
[0015]下面结合附图和具体实施方式来详细说明本专利技术；图1为本专利技术系统结构示意图；图2为培养皿结构示意图；图3为筛查方法方法流程图；图4为牛肺消化液制备方法流程图；图5为液体培养基制备方法流程示意图。
[0016]图中各标号：离心机1、过滤器2、培养皿3、色度检测仪4、转台机构5、加液口6、排气口7、弹性连接机构8、滑槽9、承载架31、承载托盘32、培养盘33、透明密封盖34、温度传感器35、单向阀36、超声波振荡机构37、硅胶加热条38、控制电路39、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速初步筛查污染奶样中支原体的系统，其特征在于：所述的快速初步筛查污染奶样中支原体的系统包括离心机（1）、过滤器（2）、培养皿（3）、色度检测仪（4），其中所述离心机（1）通过导流管与至少一个过滤器（2）连接，所述过滤器（2）另与若干培养皿（3）连接，且各培养皿（3）相互并联，所述色度检测仪（4）位于培养皿（3）上方，其光轴与培养皿（3）上端面呈30
°
—90
°
夹角。2.根据权利要求1所述的一种快速初步筛查污染奶样中支原体的系统，其特征在于：所述培养皿（3）包括承载架（31）、承载托盘（32）、培养盘（33）、透明密封盖（34）、温度传感器（35）、单向阀（36）、超声波振荡机构（37）、硅胶加热条（38）及控制电路（39），所述承载架（31）为轴线与水平面垂直分布的柱状框架结构，所述承载托盘（32）为横断面呈“凵”字形的闭合环状结构，嵌于承载架（31）上端面并与承载架（31）同轴分布，所述培养盘（33）嵌于承载托盘（32）上端面内，与承载托盘（32）槽底相抵并同轴分布，所述培养盘（33）、透明密封盖（34）均为横断面呈“凵”字形槽状结构，且透明密封盖（34）包覆在培养盘（33）上端面并与培养盘（33）构成闭合腔体结构，且所述透明密封盖（34）侧表面通过转台机构（5）与承载架（31）上端面铰接，所述透明密封盖（34）上设一个加液口（6）和一个排气口（7），所述加液口（6）和排气口（7）对称分布在培养盘（33）轴线两侧，并与培养盘（33）轴线呈0
°
—60
°
夹角，且加液口（6）和排气口（7）均与一个单向阀（36）连接，所述温度传感器（35）嵌于承载托盘（32）内，与承载托盘（32）同轴分布并通过弹性连接机构（8）与承载托盘（32）内侧面连接，所述硅胶加热条（38）至少一条，嵌于承载托盘（32）槽底上表面并为与承载托盘（32）同轴分布的闭合环状结构，所述超声波振荡机构（37）嵌于承载托盘（32）侧壁外表面，并环绕承载托盘（32）轴线均布，所述控制电路（39）嵌于承载机架外表面，并分别与温度传感器（35）、单向阀（36）、超声波振荡机构（37）、硅胶加热条（38）及转台机构（5）电气连接。3.一种快速初步筛查污染奶样中支原体的系统的污染奶样中支原体的筛查方法，其特征在于：所述的快速初步筛查污染奶样中支原体的筛查方法，包括如下步骤：S1，奶液预处理，以1—5ml作为一份奶样，然后对至少一份奶样通过离心机（1）进行离心作业，并对离心后的奶样通过过滤器（2）以0.40
‑
0.45
µ
m进行过滤处理并对滤液进行收集备用；S2，培养检测，将S1步骤收集的滤液与液体培养基一同添加到培养皿（3）中进行培养作业，并在培养20—60分钟后通过色度检测仪（4）进行显色法检测，即可得到支原体检测结果。4.根据权利要求3所述的一...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘子豪，王凯民，俞菊仙，
申请(专利权)人：大能生物科技南京有限公司，
类型：发明
国别省市：