一种筛选对肠道微生态具有促进作用的提取物方法及将其用于靶向筛选益生菌的应用技术

本发明专利技术涉及一种调控肠道微生态的益生元组合物及其制备方法和应用。组合物中包含白头翁提取物。本发明专利技术首次证实了白头翁提取物可降低肠道微生物群的多样性，并且具有促进人体双歧杆菌生长的作用。并且，本发明专利技术首次建立了体外发酵体系，能更好的模拟人体内真实环境，从整体丰度，到定量再到菌种水平检测和人粪便来源菌株验证，精准筛选出中药靶向促进生长的益生菌种类，解决了当前的盲目配伍和非人体来源的问题。的问题。的问题。

【技术实现步骤摘要】
一种筛选对肠道微生态具有促进作用的提取物方法及将其用于靶向筛选益生菌的应用


[0001]本专利技术涉及生物提取领域，特别涉及一种筛选对肠道微生态具有促进作用的提取物的方法及将其用于靶向筛选益生菌的应用。

技术介绍

[0002]肠道微生态与人类的健康与疾病密切相关，肠道正常菌群在人体防御感染、调节免疫、营养物质吸收、延缓衰老等方面具有重要的作用。近年来，越来越多的研究表明，中药可调节肠道微生态，可用于治疗肠道微生态失衡引发的疾病。一方面，中药可能作为潜在的益生元，促进肠道有益菌的生长；另一方面，肠道微生物群可能诱发中药活性成分的生物转化。
[0003]白头翁(Pulsatilla Radix，PR)是一种传统中药材，具有清热解毒，凉血止痢的功效，通常与其他中药配伍使用。研究表明，PR中含有三萜皂苷、三萜酸、木脂素、白头翁灵、白头翁英、白头翁素、原白头翁素、胡萝卜苷以及糖蛋白等多种成分，PR提取物具有抗菌、抗肿瘤等多种药理活性。目前少有白头翁与肠道微生态菌群关联的报道。
[0004]有鉴于此，提出本专利技术。

技术实现思路

[0005]本专利技术通过建立体外发酵体系，证实白头翁提取物可改变肠道微生物群的多样性，并且，白头翁提取物可显著促进双歧杆菌的生长。本专利技术首次证实了白头翁与肠道微生态菌群之间的关联，建立的体外发酵体系，有助于靶向筛选益生菌的种类。
[0006]有鉴于此，本专利技术一方面请求保护筛选靶向益生菌的体外发酵方法，所述方法包括如下步骤：采集新鲜粪便；将粪便稀释，稀释后的粪便添加到提前放置在厌氧培养系统中的培养基中；在培养基中加入待测中药样品，发酵一定时间，优选的0h、8h、24h，分别吸取液体，离心，沉淀置于
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80℃，通过分析沉淀中的菌群变化，筛选出生长促进的益生菌种类。
[0007]优选地，分析沉淀中的菌群变化通过如下步骤进行：提取DNA，以提取的DNA为模板，PCR扩增16S rRNA基因区，分离纯化扩增片段并进行测序，对测序结果进行统计分析，筛选出生长促进的益生菌种类。
[0008]优选地，待测中药样品为白头翁提取物；更优选的，所述提取物为水提取物或醇提取物。
[0009]本专利技术第二方面请求保护白头翁提取物在调控肠道微生态方面的应用；或在制备调控肠道微生态制剂中的应用。
[0010]优选地，所述调控肠道微生态具体为降低肠道微生物群的多样性、或者促进双歧杆菌生长；进一步优选地，所述双歧杆菌为长双歧杆菌、青春双歧杆菌、假小链双歧杆菌。优选地，白头翁提取物为白头翁水提取物或白头翁醇提取物；进一步优选地，醇提取物选自甲醇提取物、乙醇提取物；所述乙醇提取物进一步优选为70％
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95％的乙醇提取物。
[0011]所述的白头翁水提取物采用如下步骤制备：称取一定重量的干燥的白头翁药材，在料液比为1:4
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10的条件下加热回流提取2次，每次1
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2h，用纱布过滤，收集并合并两次滤液，将提取液减压浓缩至1/4体积后进行冷冻干燥。优选地，料液比为1:4，加热回流时间为1h。
[0012]所述的白头翁醇提取物采用如下步骤制备：称取一定重量的干燥的白头翁药材，在料液比为1:4
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10的条件下加热回流提取2次，每次1
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2h，用纱布过滤，收集并合并两次滤液，将提取液减压浓缩，使醇蒸干后加蒸馏水溶解，进行冷冻干燥。优选地，料液比为1:4，加热回流时间为1h。、
[0013]本专利技术一方面提供了可以调控肠道微生态菌群的益生元组合物，组合物中至少包含白头翁提取物。
[0014]优选地，组合物中仅含有白头翁提取物，或者组合物中可进一步包含药学上可接受的载体或辅料。
[0015]本专利技术具有如下突出的效果：
[0016]现阶段，很多产品都是基于动物的研究，由于动物与人体菌群差异非常大，并且，人体体内评估又由于人体的复杂性无法避免内源因素的干扰。为此，本专利技术首次建立了体外发酵体系，从整体丰度，到定量再到菌种水平检测和人粪便来源菌株验证，能更好的模拟人体内真实环境，精准筛选出中药靶向促进生长的益生菌种类。解决了当前的盲目配伍和非人体来源的问题。
[0017]另外，利用本专利技术构建的体外发酵体系，本专利技术首次证实了白头翁提取物可降低肠道微生物群的多样性，并且具有促进人体双歧杆菌生长的作用。该研究的发现可为以后通过双歧杆菌治疗相关疾病提供一定的研究基础。
附图说明
[0018]图1PRE对肠道微生物群多样性的影响。图1A和1B显示了在8小时和24小时对照组和PRE之间α
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多样性的Shannon指数差异，图1C和1D显示了在8小时和24小时对照组和PRE之间α
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多样性的Simpson指数差异，图1E和1F显示了在8小时和24小时对照组和PRE之间β
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多样性的Anonim指数差异，图1G显示PCoA分析结果。
[0019]图2PRW和PRE对门、属水平微生物菌群相对丰度的影响；
[0020]图3白头翁提取物促进双歧杆菌的盒子图；
[0021]图4qPCR检测的引物体系；
[0022]图5白头翁提取物对双歧杆菌的生长促进作用；
[0023]图6白头翁醇提取物对长双歧杆菌的生长促进作用。
具体实施方式
[0024]下面将结合附图对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0025]以下术语或定义仅仅是为了帮助理解本专利技术而提供。这些定义不应被理解为具有小于本领域技术人员所理解的范围。
[0026]除非在下文中另有定义，本专利技术具体实施方式中所用的所有技术术语和科学术语的含义意图与本领域技术人员通常所理解的相同。虽然相信以下术语对于本领域技术人员很好理解，但仍然阐述以下定义以更好地解释本专利技术。
[0027]如本专利技术中所使用，术语“包括”、“包含”、“具有”、“含有”或“涉及”为包含性的(inclusive)或开放式的，且不排除其它未列举的元素或方法步骤。术语“由
…
组成”被认为是术语“包含”的优选实施方案。如果在下文中某一组被定义为包含至少一定数目的实施方案，这也应被理解为揭示了一个优选地仅由这些实施方案组成的组。
[0028]在提及单数形式名词时使用的不定冠词或定冠词例如“一个”或“一种”，“所述”，包括该名词的复数形式。
[0029]本专利技术中的术语“大约”、“大体”表示本领域技术人员能够理解的仍可保证论及特征的技术效果的准确度区间。该术语通常表示偏离指示数值的
±
10％，优选
±
5％。
[0030]此外，说明书和权利要求书中的术语第一、第二、第三、(a)、(b)、(c)以及诸如本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.白头翁提取物在调控肠道微生态或在制备调控肠道微生态制剂中的应用。2.权利要求1所述的应用，其特征在于，所述调控肠道微生态具体为降低肠道微生物群的多样性、或者促进双歧杆菌生长；优选地，所述双歧杆菌为长双歧杆菌、青春双歧杆菌、假小链双歧杆菌；更优选地，所述双歧杆菌为长双歧杆菌。3.一种筛选靶向益生菌的体外发酵方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：采集新鲜粪便；将粪便稀释，稀释后的粪便添加到提前放置在厌氧培养系统中的培养基中；在培养基中加入待测中药样品，发酵一定时间(优选的0h、8h、24h)分别吸取液体，离心，沉淀(置于
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80℃)，通过分析沉淀中的菌群变化，筛选出生长促进的益生菌种类。4.权利要求3所述的方法，所述分析沉淀中的菌群变化通过如下步骤进行：提取DNA，以提取的DNA为模板，PCR扩增16S rRNA基因区，分离纯化扩增片段并进行测序，对测序结果进行统计分析，筛选出生长促进的益生菌种类。5.根据权利要求4所述的方法，所述统计分析采用如下方式进行，采用Dix
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seq pipeline用于原始16S测序分析，采用基于weighted_unifrac、unweighted_unifrac以及bray_curtis distances的主坐标分析(principal coordinate analysis，PCoA)和非度量多维尺度分...

【专利技术属性】
技术研发人员：李亚峰，董丽娜，张洵，孙龙，
申请(专利权)人：北京浩鼎瑞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：