一种快速筛选漆酶产生菌的液体显色方法技术

本发明专利技术公开了一种快速筛选漆酶产生菌的液体显色方法，属于微生物选育方法技术领域，包括菌体选择培养、不同pH缓冲液配置、显色反应底物溶液配置、菌种显色能力测定、漆酶溶液制备和菌种产漆酶能力测定，具体方法为：吸取ABTS溶液于试管中，加入菌体，25℃静置反应，记录反应液显绿时间，本发明专利技术通过对菌种类型、底物溶液、温度和菌体用量等方面对显色反应的影响进行试验，并通过菌体显色能力与产酶能力进行比较，证明了菌体催化底物显色能力与菌种液体发酵产酶能力之间呈正相关，因此，仅通过菌体直接与底物溶液发生显色反应一步，在短时间内就可以检验出菌种有与无产漆酶能力和产酶能力高与低，利用该方法能够一步完成筛选，方法简单、快速灵敏。快速灵敏。

【技术实现步骤摘要】
一种快速筛选漆酶产生菌的液体显色方法


[0001]本专利技术属于微生物选育方法
，具体涉及一种快速筛选漆酶产生菌的液体显色方法。

技术介绍

[0002]漆酶是一类含铜的多酚氧化酶，在白腐菌中普遍存在，多为分泌型的糖蛋白。漆酶应用主要集中在制浆造纸，特别是纸浆的生物漂白咖2、环境保护、毒物降解等方面。由于漆酶应用广泛，高酶活菌株的筛选就显得尤其重要。在我国，漆酶产生菌筛选普遍采用发酵法和平板显色法。发酵法需要较长的培养过程和测定过程，费时费力；平板显色法虽然可直接在分离平板上认定菌种是否具有产酶能力，但由于所生成的有色物质处于培养基中，影响菌落周边所形成有色环带的可见度和清晰度。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于针对上述现有技术中存在问题，利用微生物菌体中所存在的漆酶能使底物溶液显色的作用，提供了一种简单、快速、灵敏的筛选漆酶产生菌的液体显色方法。
[0004]为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是：
[0005]一种快速筛选漆酶产生菌的液体显色方法，包括如下步骤：
[0006]S1：菌体选择培养：在培养皿中配置培养基，并在培养基上进行菌种接种培养，得到菌体；
[0007]S2：缓冲液配置：分别配置pH为4.5、5.0的0.05mol/L醋酸缓冲液和pH为7.0、8.0、9.0的0.05mol/L三羟甲基氨基甲烷缓冲液；
[0008]S3：显色反应底物溶液配置：根据步骤S2配置的缓冲液分别进行ABTS底物溶液、愈创木酚底物溶液、丁香醛连氮底物溶液、邻联甲苯胺底物溶液和邻苯二酚底物溶液配置，具体步骤如下：
[0009]ABTS底物溶液：按比例分别称取ABTS和pH为4.5的醋酸缓冲液，以1ml pH为4.5的醋酸缓冲液对应1mg ABTS进行混合，摇匀静置，制得ABTS底物溶液；
[0010]愈创木酚底物溶液：按比例分别称取愈创木酚和pH为5.0的醋酸缓冲液，以1ml pH为5.0的醋酸缓冲液对应1mg愈创木酚进行混合，摇匀静置，制得愈创木酚底物溶液；
[0011]丁香醛连氮底物溶液：按比例分别称取丁香醛连氮和pH为7.0的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，以1mlpH为7.0的三羟甲基氨基甲烷缓冲液对应0.4mg丁香醛连氮进行混合，摇匀静置，制得丁香醛连氮底物溶液；
[0012]邻联甲苯胺底物溶液：按比例分别称取邻联甲苯胺和pH为8.0的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，以1ml pH为8.0的三羟甲基氨基甲烷缓冲液对应1mg邻联甲苯胺进行混合，摇匀静置，制得邻联甲苯胺底物溶液；
[0013]邻苯二酚底物溶液：按比例分别称取邻苯二酚和pH为9.0的三羟甲基氨基甲烷缓
冲液，以1ml pH为9.0的三羟甲基氨基甲烷缓冲液对应1mg邻苯二酚进行混合，摇匀静置，制得邻苯二酚底物溶液；
[0014]S4：菌种显色能力测定：分别吸取步骤S3中制得的ABTS底物溶液、愈创木酚底物溶液、丁香醛连氮底物溶液、邻联甲苯胺底物溶液和邻苯二酚底物溶液放入试管中，并在试管中加入步骤S1中培养的菌体，25℃下静置反应，记录反应液显色时间；
[0015]S5：漆酶溶液制备：按比例称取麦麸、纤维质粉和甘蔗渣粉，并将称取的麦麸、纤维质粉和甘蔗渣粉置于三角瓶中，在瓶中加入含0.2％硫酸铵、1.5％玉米浆和0.005％硫酸铜的混合溶液，调pH至6.5，在121℃下灭菌30min，接种步骤S1中培养的菌体，以280r/min在摇床上振荡培养，培养滤液即为漆酶溶液；
[0016]S6：菌种产漆酶能力测定：将步骤S4中加入菌体的底物溶液和稀释的漆酶溶液在25℃的条件下保温5min，用1cm光径比色杯于420nm波长测光吸收。
[0017]所述步骤S1中菌种包括细菌和真菌。
[0018]所述步骤S4中，当菌种为细菌时，需在35℃的条件下培养48h；当菌种为真菌时，需在30℃的条件下培养96h。
[0019]所述步骤S5中麦麸、纤维质粉和甘蔗渣粉的质量比为6:4:3。
[0020]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
[0021]本专利技术通过对菌种类型、底物溶液、温度和菌体用量等方面对显色反应的影响进行试验，并通过菌体显色能力与产酶能力进行比较，证明了菌体催化底物显色能力与菌种液体发酵产酶能力之间呈正相关，因此，仅通过菌体直接与底物溶液发生显色反应一步，在短时间内就可以检验出菌种有与无产漆酶能力和产酶能力高与低，利用该方法能够一步完成筛选，方法简单、快速灵敏。
具体实施方式
[0022]下面将结合具体实施例来详细说明本专利技术，在此本专利技术的示意性实施例以及说明来解释本专利技术，但并不作为对本专利技术的限定。
[0023]实施例1
[0024]一种快速筛选漆酶产生菌的液体显色方法，包括如下步骤：
[0025]S1：菌体选择培养：在培养皿中配置培养基，并在培养基上进行菌种接种培养，得到菌体，所述菌种为细菌或/和真菌；
[0026]S2：缓冲液配置：分别配置pH为4.5、5.0的0.05mol/L醋酸缓冲液和pH为7.0、8.0、9.0的0.05mol/L三羟甲基氨基甲烷缓冲液；
[0027]S3：显色反应底物溶液配置：根据步骤S2配置的缓冲液分别进行ABTS底物溶液、愈创木酚底物溶液、丁香醛连氮底物溶液、邻联甲苯胺底物溶液和邻苯二酚底物溶液配置，具体步骤如下：
[0028]ABTS底物溶液：按比例分别称取ABTS和pH为4.5的醋酸缓冲液，以1ml pH为4.5的醋酸缓冲液对应1mg ABTS进行混合，摇匀静置，制得ABTS底物溶液；
[0029]愈创木酚底物溶液：按比例分别称取愈创木酚和pH为5.0的醋酸缓冲液，以1ml pH为5.0的醋酸缓冲液对应1mg愈创木酚进行混合，摇匀静置，制得愈创木酚底物溶液；
[0030]丁香醛连氮底物溶液：按比例分别称取丁香醛连氮和pH为7.0的三羟甲基氨基甲
烷缓冲液，以1ml pH为7.0的三羟甲基氨基甲烷缓冲液对应0.4mg丁香醛连氮进行混合，摇匀静置，制得丁香醛连氮底物溶液；
[0031]邻联甲苯胺底物溶液：按比例分别称取邻联甲苯胺和pH为8.0的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，以1ml pH为8.0的三羟甲基氨基甲烷缓冲液对应1mg邻联甲苯胺进行混合，摇匀静置，制得邻联甲苯胺底物溶液；
[0032]邻苯二酚底物溶液：按比例分别称取邻苯二酚和pH为9.0的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，以1ml pH为9.0的三羟甲基氨基甲烷缓冲液对应1mg邻苯二酚进行混合，摇匀静置，制得邻苯二酚底物溶液；
[0033]S4：菌种显色能力测定：分别吸取步骤S3中制得的ABTS底物溶液、愈创木酚底物溶液、丁香醛连氮底物溶液、邻联甲苯胺底物溶液和邻苯二酚底物溶液放入试管中，并在试管中加入步骤S1中培养的菌体，25℃下静置反应，记录反应液显色时间；
[0034]S5：漆酶溶液制备：按质量比为6:4:3的比例称取麦麸、纤维质粉和甘本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速筛选漆酶产生菌的液体显色方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：菌体选择培养：在培养皿中配置培养基，并在培养基上进行菌种接种培养，得到菌体；S2：缓冲液配置：分别配置pH为4.5、5.0的0.05mol/L醋酸缓冲液和pH为7.0、8.0、9.0的0.05mol/L三羟甲基氨基甲烷缓冲液；S3：显色反应底物溶液配置：根据步骤S2配置的缓冲液分别进行ABTS底物溶液、愈创木酚底物溶液、丁香醛连氮底物溶液、邻联甲苯胺底物溶液和邻苯二酚底物溶液配置，具体步骤如下：ABTS底物溶液：按比例分别称取ABTS和pH为4.5的醋酸缓冲液，以1ml pH为4.5的醋酸缓冲液对应1mg ABTS进行混合，摇匀静置，制得ABTS底物溶液；愈创木酚底物溶液：按比例分别称取愈创木酚和pH为5.0的醋酸缓冲液，以1ml pH为5.0的醋酸缓冲液对应1mg愈创木酚进行混合，摇匀静置，制得愈创木酚底物溶液；丁香醛连氮底物溶液：按比例分别称取丁香醛连氮和pH为7.0的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，以1ml pH为7.0的三羟甲基氨基甲烷缓冲液对应0.4mg丁香醛连氮进行混合，摇匀静置，制得丁香醛连氮底物溶液；邻联甲苯胺底物溶液：按比例分别称取邻联甲苯胺和pH为8.0的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，以1ml pH为8.0的三羟甲基氨基甲烷缓冲液对应1mg邻联甲苯胺进行混合，摇匀静置，制得邻联甲苯胺底物溶液；邻苯二酚底物溶液：按比例分别称取邻苯二酚和pH为9.0的...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨忠义，
申请(专利权)人：白银赛诺动物保健技术有限公司，
类型：发明
国别省市：