一种利用震动薄切及筛分旋转粉碎的粉态薄切细胞外间质微载体及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种利用震动薄切及筛分旋转粉碎的粉态薄切细胞外间质微载体及其制备方法，该粉态薄切细胞外间质微载体的制备依次包括取皮粗处理、减压结构松弛、震动薄切、切面纯化、结构纯化、旋转筛分纯化、超临界二氧化碳水溶液萃洗纯化和旋转筛分粉碎处理，得到高均匀性、高纯度的粉态薄切细胞外间质微载体，本发明专利技术整个处理过程均使用无毒化学试剂，既能有效降低真皮基质的免疫源性，又可充分保留了真皮基质正常的胶原结构，处理周期短，经济环保，实现了高效能制备粉态薄切细胞外间质微载体的方法，所获得粉态薄切细胞外间质微载体具有更好的尺寸均一性，微小化与高纯度。微小化与高纯度。微小化与高纯度。

【技术实现步骤摘要】
一种利用震动薄切及筛分旋转粉碎的粉态薄切细胞外间质微载体及其制备方法


[0001]本专利技术涉及生物医学纳米材料领域，特别涉及一种利用震动薄切及筛分旋转粉碎的粉态薄切细胞外间质微载体及其制备方法。

技术介绍

[0002]脱细胞基质(acellular dermal matrix,ADM)是用物理、化学等方法将人尸体皮或动物皮肤中的表皮层，皮下组织及真皮中的细胞成分彻底去除仅保留真皮中含胶原网架的细胞外基质。脱细胞真皮基质来源于天然皮肤，经一定的理化方法处理后，去除了皮肤中表皮层和含抗原成分的细胞仅保留了真皮的胶原成分，三维空间结构以及基底膜结构，具有低免疫原性、良好的生物兼容性和力学性能，是一种理想的皮肤修复和填充材料。脱细胞基质的组织修复作用建立在引导性组织再生(GTR)理论基础上。在发生组织损伤时，受创局部纤维结缔组织会发生病理性增生，形成组织粘连，造成局部相对解剖关系的紊乱，从而产生功能障碍。脱细胞基质植入组织后，在局部形成一层物理屏障，可以预防创伤局部的组织粘连和病理性增生组织在创伤愈合过程中。脱细胞基质在局部的作用是通过其物理阻隔作用将不同组织隔开，使不同组织各自完成其愈合过程，最终重建局部组织的正常解剖结构。脱细胞基质在临床上已被广泛用于耳鼻喉科 (鼓膜修补、矫正鼻畸形、咽部成形术)，颜而部整容(隆唇术、眼部整容、面部组织填充)，神经外科，普外科等。脱细胞基质具快速血管化和较高的稳定性。脱细胞基质中胶原纤维及小血管中的基质成分有助于引导受体细胞和新生血管的长入，形成新的细胞外基质，起到取代植入的脱细胞基质；此外，植入的脱细胞基质可以赋予组织以韧性、弹性、保水性及对机械力的缓冲性，并为细胞提供生存及从事各种活动的微环境。基于脱细胞基质诸多特性，脱细胞基质可用于医学美容中的面部填充和修复、生物医学及组织工程领域。
[0003]目前脱细胞真皮基质的制备方法主要有一下几种：1、Dispase II
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Triton法：将真皮首先采用DispaseⅡ进行处理，再使用TritonX
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100进行处理。该方法细胞脱除彻底，但是对基底膜破坏大，不利于上皮细胞的粘附与生长；2、高渗盐
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SDS法：将真皮首先采用高渗盐进行处理，然后再用破膜剂十二烷基苯磺酸钠 (SDS)将真皮中的细胞成分彻底脱除。该方法基底膜保留完整，但真皮中纤维结合素、弹力素等含量较高，可能会有较高的免疫原性；3、高渗盐
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氢氧化钠销蚀法：首先利用高渗盐将表皮去除，然后再通过氢氧化钠中强碱离子的吸水作用，使细胞发生脱水死亡而将真皮中的细胞成分彻底去除。该方法胶原纤维结构完整，排列较正常疏松，但对于细胞的去除效果仍有待提高；4、反复冻融法，通过对新鲜皮肤进行3次以上反复冻融，该方法的操作时间久、周期长，效率低。因此，现有对脱细胞基质的制备技术多样，但在其制备、应用和批量生产上还存在着很多不足，比如：细胞成分去除不彻底，抗原性高，组织兼容性差，对胶原结构及基底膜成分破坏性较大，不利于上皮细胞的粘附与生长；制备过程复杂，制备周期过长；制备成本高问题等。此外，很多脱细胞基质制备过程中使用到各种异源性酶，比如胰蛋白酶，胃蛋白酶，Dispase II等，这些异源性蛋白
不易去除，当使用酶处理得到的脱细胞基质用于人体时，容易产生免疫源性等问题。
[0004]因此，针对现有脱细胞基质制备技术中存在的不足，本专利技术提供了一种利用震动薄切及筛分旋转粉碎的粉态薄切细胞外间质微载体(SCDM)技术及其制备方法，该方法均使用无毒化学试剂，既能有效降低真皮基质的免疫源性，又可充分保留了真皮基质正常的胶原结构，处理周期短，经济环保，可进行放大生产。

技术实现思路

[0005]鉴以此，本专利技术提出一种利用震动薄切及筛分旋转粉碎的粉态薄切细胞外间质微载体及其制备方法，该粉态薄切细胞外间质微载体具有适合作为可供组织修复生长之三维支撑体。
[0006]本专利技术的技术方案是这样实现的：
[0007]一种利用结构分段纯化的粉态薄切细胞外间质微载体的制备方法，该粉态薄切细胞外间质微载体的制备依次包括取皮粗处理、减压结构松弛、震动薄切、切面纯化、结构纯化、旋转筛分纯化、超临界二氧化碳水溶液萃洗纯化和旋转筛分粉碎处理，得到高均匀性、高纯度的粉态薄切细胞外间质微载体。
[0008]进一步说明，该制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
[0009]步骤(1)：取皮粗处理：选取动物皮层，对取皮区，进行脱毛，取皮，消毒得到第一皮膜，该第一皮膜不含皮下脂肪组织；
[0010]步骤(2)：减压结构松弛：采用减压条件，将该第一皮膜于低于常压作用力瓦解，得到具有松弛组织结构的第二皮膜；
[0011]步骤(3)：震动薄切：将具有松弛的组织结构的第二皮膜，进行震动薄切，得到具有均匀切面的第一薄切皮膜；
[0012]步骤(4)：切面纯化：将具有均匀切面的第一薄切皮膜，采用无菌水进行切面纯化，得到第二薄切皮膜；
[0013]步骤(5)：结构纯化：将第二薄切皮膜裁剪后，采用结构纯化洗液在4～35℃的反应温度下进行结构纯化反应0.5～24小时，酸碱值控制在7～12之间，得到第三薄切皮膜；
[0014]步骤(6)：旋转筛分纯化：将第三薄切皮膜采用具有10～100目的第一筛网的旋转筛分设备进行旋转筛分纯化，得到保留在该第一筛网中的第一筛分薄切皮膜和第一筛网外部的第一粉态薄切皮膜；
[0015]步骤(7)：超临界二氧化碳水溶液萃洗纯化：将第一筛分薄切皮膜与第一粉态薄切皮膜采用隔离地超临界二氧化碳水溶液，在4～35℃的温度下进行萃洗纯化，得到高纯度的第一筛分薄切细胞外间质皮膜与第一粉态薄切细胞外间质皮膜；
[0016]步骤(8)：旋转筛分粉碎处理：将第一粉态薄切细胞外间质皮膜，采用具有第二筛网的筛分旋转粉碎设备，同时进行旋转筛分及旋转粉碎，得到高均匀性的粉态薄切细胞外间质微载体。
[0017]优选地，所述筛分旋转粉碎设备为动物组织粉碎筛分机，其包括：粉碎模块，粉碎筛分舱，筛分收集模块和气体出入控制阀；
[0018]其中该粉碎模块包含粉碎马达，粉碎轴承和粉碎刀片；
[0019]该粉碎筛分舱包含粉碎筛分舱上盖，粉碎筛分圆柱舱体，粉碎筛分舱下盖，并且依
序组合形成容置空间，以及设置于该粉碎筛分舱的可密闭动物组织进料口；
[0020]该筛分收集模块，包含筛网及筛分收集盘，该筛网和该筛分收集盘之中心位置各设有筛网中心穿孔和筛分收集盘中心穿孔，该筛网中心穿孔和该筛分收集盘中心穿孔用于支撑该粉碎轴承底部，且该筛分收集模块可拆卸地固定于该粉碎筛分圆柱舱体内；在该粉碎筛分圆柱舱体内该容置空间中，该粉碎马达转动该粉碎轴承连动该粉碎刀片，用于将动物组织粉碎，并透过该筛分收集模块被设置于该粉碎刀片下方，该筛网筛分粉碎后动物组织，落入该筛分收集盘；及该气体出入控制阀被用来灌入调节气体调节该动物组织表面特性及温度。
[0021]优选地，该调节气体是选自由液态氮，干冰，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用结构分段纯化的粉态薄切细胞外间质微载体的制备方法，其特征在于：该粉态薄切细胞外间质微载体的制备依次包括取皮粗处理、减压结构松弛、震动薄切、切面纯化、结构纯化、旋转筛分纯化、超临界二氧化碳水溶液萃洗纯化和旋转筛分粉碎处理，得到高均匀性、高纯度的粉态薄切细胞外间质微载体。2.如权利要求1所述的一种利用结构分段纯化的粉态薄切细胞外间质微载体的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤(1)：取皮粗处理：选取动物皮层，对取皮区，进行脱毛，取皮，消毒得到第一皮膜，该第一皮膜不含皮下脂肪组织；步骤(2)：减压结构松弛：采用减压条件，将该第一皮膜于低于常压作用力瓦解，得到具有松弛组织结构的第二皮膜；步骤(3)：震动薄切：将具有松弛的组织结构的第二皮膜，进行震动薄切，得到具有均匀切面的第一薄切皮膜；步骤(4)：切面纯化：将具有均匀切面的第一薄切皮膜，采用无菌水进行切面纯化，得到第二薄切皮膜；步骤(5)：结构纯化：将第二薄切皮膜裁剪后，采用结构纯化洗液在4～35℃的反应温度下进行结构纯化反应0.5～24小时，酸碱值控制在7～12之间，得到第三薄切皮膜；步骤(6)：旋转筛分纯化：将第三薄切皮膜采用具有10～100目的第一筛网的旋转筛分设备进行旋转筛分纯化，得到保留在该第一筛网中的第一筛分薄切皮膜和第一筛网外部的第一粉态薄切皮膜；步骤(7)：超临界二氧化碳水溶液萃洗纯化：将第一筛分薄切皮膜与第一粉态薄切皮膜采用隔离地超临界二氧化碳水溶液，在4～35℃的温度下进行萃洗纯化，得到高纯度的第一筛分薄切细胞外间质皮膜与第一粉态薄切细胞外间质皮膜；步骤(8)：旋转筛分粉碎处理：将第一粉态薄切细胞外间质皮膜，采用具有第二筛网的筛分旋转粉碎设备，同时进行旋转筛分及旋转粉碎，得到高均匀性的粉态薄切细胞外间质微载体。3.如权利要求2所述的一种利用结构分段纯化的粉态薄切细胞外间质微载体的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，所述消毒是采用质量浓度为0.5％～5％的苯扎溴铵或过氧乙酸进行消毒。4.如权利要求2所述的一种利用结构分段纯化的粉态薄切细胞外间质微载体的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，将该第一皮膜于低于大气压的50～500托作用力瓦解2～8小时。5.如权利要求2所述的一种利用结构分段纯化的粉态薄切细胞外间质微载体的制备方法，其特征在于：所述震动薄切是利用具有薄切厚度参数控制的震动薄切设备，调整取皮厚度参数为0.1毫米～5毫米的厚度，利用震动薄切刀刃模块进行薄切，得到具有均匀切面的第一薄切皮膜。6.如权利要求2所述的一种利用结构分段纯化的粉态薄切细胞外间质微载体的制备方法，其特征在于：所述切面纯化采用的无菌水用量为1～20倍的薄切皮膜重量。7.如权利要求2所述的一种利用结构分段纯化的粉态薄切细胞外间质微载体的制备方法，其特征在于：所述结构纯化中，将第二薄切皮膜裁剪成1厘米
×
1厘米～10厘米
×
10厘米
大小薄片状，所述结构纯化洗液的用量为10～50倍的第二薄切皮膜重量。8.如权利要求2所述的一种利用结构分...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄庆成，
申请(专利权)人：巴斯特医药科技常州有限公司，
类型：发明
国别省市：