包含血清来源蛋白质的多孔性细胞支架及制备方法技术

涉及一种包含血清来源诱导蛋白质的多孔性细胞支架及其制备方法，根据一个具体例的多孔性细胞支架，不仅能够稳定及持续地培养细胞，而且每种细胞可以表现出符合细胞特性的培养形态，模拟实际组织，具有稳定的培养及生物体内高存活率，具有可以有用地用于利用类器官的药物活性及毒性评价、细胞治疗剂或目标蛋白质的生产的效果。质的生产的效果。质的生产的效果。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含血清来源蛋白质的多孔性细胞支架及制备方法


[0001]涉及一种包含血清来源蛋白质的多孔性细胞支架及其制备方法。

技术介绍

[0002]多孔性支架作为用于伤口治愈、灼伤治愈、药物传递及损伤组织再生的支架而被广泛使用。特别是用于损伤组织再生的支架，要求适合于将从少量组织碎片中提取、分离的细胞培养成充足量的结构和稳定性，需具有体内移植后不出现副作用的生物合适性和生物降解性。因此，用于有效实现细胞再生和生长的生物降解性支架需具有组织细胞能够粘着于支架表面而形成三维结构的组织的多孔性结构，水分和细胞生长因子等移动容易，需适合细胞的附着和生长。另外，多孔性支架移植到体内后，需与周围组织良好融合，没有炎症反应等副作用，在组织再生后自行进行生物降解，不残留异物质，具有较高生物适合性。因此，生物合适性、生物降解性以及机械物性优秀的多孔性支架是组织再生与复原所必需的。
[0003]细胞培养相关生物医药品产业市场自2011年之后每年呈现两位数增长势头。特别是2014年，形成了1200亿美元以上的市场，但在韩国国内，三维细胞培养相关专业人才匮乏，依赖于外国机构。三维细胞培养技术是一门前景光明的尖端技术，不仅是药物效能和毒性检索，还应用于人造器官开发等，据BCC调查估计，2016年市场规模达到60亿美元左右。保持每年10％以上增长势头，预计2019年增长到80亿美元规模。另外，组织工程学及再生相关市场(含基于细胞的人造器官)2016年全世界达到136亿美元规模，预计2021年将达到608亿美元，是有望实现年均34.9％高增长率的朝阳领域。
[0004]因此，要求研发具有高存活率和保管性、用于生产与实际人类组织类似地体现的细胞聚集体的多孔性细胞支架。

技术实现思路

[0005]技术课题
[0006]一种形态提供一种包含血清来源蛋白质的多孔性细胞支架，所述血清来源蛋白质是对分离的血清或血浆蛋白质水溶液进行交联剂处理，使血清血浆蛋白质水溶液内蛋白质交联后，用还原剂还原而收得。
[0007]又一形态提供一种多孔性细胞支架及包括在所述多孔性细胞支架内分植的细胞的组织修复或再生用组合物。
[0008]又一形态提供一种评价候选物质的药理学活性或毒性的方法，包括：在多孔性细胞支架分植细胞并进行三维培养而形成三维细胞聚集体的步骤；及对所述三维细胞聚集体进行候选物质处理的步骤。
[0009]又一形态提供一种生产目标物质的方法，包括：在多孔性细胞支架分植细胞并进行三维培养而形成三维细胞聚集体的步骤；及从所述三维细胞聚集体的培养物或培养液分离目标物质的步骤。
[0010]又一形态提供一种制备包含血清来源蛋白质的多孔性细胞支架的方法，包括：对
分离的血清或血浆蛋白质水溶液进行交联剂处理，使血清或血浆蛋白质水溶液内蛋白质交联的步骤；用还原剂使交联的血清或血浆蛋白质水溶液内蛋白质反应而收得反应物的步骤；及将所述反应物均质化而收得血清来源蛋白质的步骤。
[0011]技术方案
[0012]为了达成所述目的，一种形态提供一种包含血清来源蛋白质的多孔性细胞支架，所述血清来源蛋白质是对分离的血清或血浆蛋白质水溶液进行交联剂处理，使血清血浆蛋白质水溶液内蛋白质交联后，用还原剂还原而收得。
[0013]本说明书中的术语“血清来源蛋白质”，可以意味着对通常用于组织培养的牛胎血清(fetal bovine serum：FBS)、小牛血清(bovine calf serum：BCS)或来源于其他动物(例如，哺乳类或人类)的血清进行交联剂处理，使血清内蛋白质交联而收得的蛋白质。另外，可以意味着利用作为血清内蛋白质的血清白蛋白、脂蛋白、触珠蛋白、转铁蛋白、铜蓝蛋白、免疫球蛋白、各种补体、血纤蛋白原、凝血酶原、纤溶酶原、激肽原、前激肽释放酶、纤连蛋白、α2
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HS
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糖蛋白、血管紧张素原、激素等，使血液中暂时存在的蛋白质的水溶液内蛋白质交联而收得的蛋白质。
[0014]本说明书中使用的交联剂包括右旋糖酐二醛(dextran dialdehyde)、1
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乙基
‑3‑
[3
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二甲基氨基丙基]碳二亚胺盐酸盐(1
‑
ethyl
‑3‑
[3
‑
dimethylaminopropyl]carboimide hydrochloride)、乙烯胺(vinylamine)、甲基丙烯酸2
‑
氨基乙酯(2
‑
aminoethyl methacrylate)、3
‑
氨基丙基甲基丙烯酰胺(3
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aminopropyl methacrylamide)、乙二胺(ethylene diamine)、乙二醇二甲基丙烯酸酯(ethylene glycol dimethacrylate)、甲基丙烯酸甲酯(methyl methacrylate)、N,N
‑
亚甲基双丙稀酰胺(N,N
′‑
methylene
‑
bisacrylamide)、N,N
’‑
亚甲基双甲基丙烯酰胺(N,N
′‑
methylenebis
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methacrylamide)、二烯丙基酒石二酰胺(diallyltartardiamide)、甲基丙烯酸烯丙酯(allyl(meth)acrylate)、低级亚烷基二醇二(甲基)丙烯酸酯(lower alkylene glycol di(meth)acrylate)、聚低级亚烷基二醇二(甲基)丙烯酸酯(poly lower alkylene glycol di(meth)acrylate)、低级亚烷基二(甲基)丙烯酸酯(lower alkylene di(meth)acrylate)、二乙烯醚(divinyl ether)、二乙烯砜(divinyl sulfone)、二乙烯苯(divinylbenzene)、三乙烯苯(trivinylbenzene)、三羟甲基丙烷三(甲基)丙烯酸酯(trimethylolpropane tri(meth)acrylate)、季戊四醇四(甲基)丙烯酸酯(pentaerythritol tetra(meth)acrylate)、双酚A二(甲基)丙烯酸酯(bisphenol A di(meth)acrylate)、亚甲基双(甲基)丙烯酰胺(methylenebis(meth)acrylamide)、邻苯二甲酸三丙烯酯(triallyl phthalate)、邻苯二甲酸二烯丙酯(diallyl phthalate)、烯丙基缩水甘油醚(allyl glycidyl ether)、烷基氯(alkyl choloride)、转谷氨酰胺酶(transglutaminase)、赖氨酰氧化酶(lysyl oxidase)、蛋白质二硫键异构酶(protein disulfide
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种包含血清来源蛋白质的多孔性细胞支架，所述血清来源蛋白质是对分离的血清或血浆蛋白质水溶液进行交联剂处理，使血清或血浆蛋白质水溶液内蛋白质交联后用还原剂还原而收得。2.根据权利要求1所述的多孔性细胞支架，其中，所述血清来源蛋白质是用还原剂还原后使反应物均质化而收得。3.根据权利要求1所述的多孔性细胞支架，其中，所述交联剂为选自由右旋糖酐二醛、1
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乙基
‑3‑
[3
‑
二甲基氨基丙基]碳二亚胺盐酸盐、乙烯胺、甲基丙烯酸2
‑
氨基乙酯、3
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氨基丙基甲基丙烯酰胺、乙二胺、乙二醇二甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸甲酯、N,N
‑
亚甲基双丙稀酰胺、N,N
’‑
亚甲基双甲基丙烯酰胺、二烯丙基酒石二酰胺、甲基丙烯酸烯丙酯、低级亚烷基二醇二(甲基)丙烯酸酯、聚低级亚烷基二醇二(甲基)丙烯酸酯、低级亚烷基二(甲基)丙烯酸酯、二乙烯醚、二乙烯砜、二乙烯苯、三乙烯苯、三羟甲基丙烷三(甲基)丙烯酸酯、季戊四醇四(甲基)丙烯酸酯、双酚A二(甲基)丙烯酸酯、亚甲基双(甲基)丙烯酰胺、邻苯二甲酸三丙烯酯、邻苯二甲酸二烯丙酯、烯丙基缩水甘油醚、烷基氯、转谷氨酰胺酶、赖氨酰氧化酶、蛋白质二硫键异构酶、蛋白质二硫键还原酶、巯基氧化酶、脂氧合酶、多酚氧化酶、酪氨酸酶、过氧化物酶、虫漆酶、辣根过氧化物酶及他们的组合构成的组的某一种。4.根据权利要求1所述的多孔性细胞支架，其中，所述还原剂使所述血清内蛋白质的二硫键还原。5.根据权利要求1所述的多孔性细胞支架，其中，所述还原剂为选自由β
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巯基乙醇、二硫苏糖醇、三(2
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羧乙基)膦、半胱氨酸、谷胱甘肽、三(3
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羟基丙基)膦及他们的组合构成的组的一种。6.根据权利要求1所述的多孔性细胞支架，其中，所述多孔性细胞支架的气孔大小为50至600μm。7.根据权利要求1所述的多孔性细胞支架，其中，所述多孔性细胞支架具有1至10kPa的弹性率。8.根据权利要求1所述的多孔性细胞支架，其中，所述多孔性细胞支架的空隙率为10至80％。9.根据权利要求1所述的多孔性细胞支架，其中，所述多孔性细胞支架出现向固体或半固体状态的可逆相变，为不溶性。10.根据权利要求1所述的多孔性细胞支架，其中，所述血清或血浆蛋白质来源于牛胎血清或小牛血清。11.根据权利要求1所述的多孔性细胞支架，其中，细胞分植于所述多孔性细胞支架内。12.根据权利要求1所述的多孔性细胞支架，其中，所述细胞选自由细菌细胞、酵母细胞、哺乳类细胞、昆虫细胞及植物细胞构成的组。13.根据权利要求1所述的多孔性细胞支架，其中，所述多孔性细胞支架为用于组织工程学、三维细胞培养或治疗性使用的细胞搬运用途。14.一种包括权利要求1的多孔性细胞支架及分植于所述多孔性细胞支架内的细胞的
组织修复或再生用组合物。15.根据权利要求11所述的组织修复或再生用组合物，其中，所述细胞为选自软骨细胞、纤维软骨细胞、骨细胞、成骨细胞、破骨细胞、滑膜细胞、骨髓细胞、神经细胞、脂肪细胞、间充质细胞、上皮细胞，肝细胞，肌肉细胞、基质细胞、血管细胞、干细胞、胚胎干细胞、间充质干细胞、来源于脂肪组织...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱承娟，
申请(专利权)人：达娜格林有限公司，
类型：发明
国别省市：