含有配体的充气微泡制造技术

含有配体的充气微泡配制物，其可有利地应用于分离细胞或生物材料的方法中。所述配制物包含磷脂和聚乙二醇化磷脂与含有配体的聚乙二醇化磷脂的合适混合物。二醇化磷脂的合适混合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】含有配体的充气微泡


[0001]本专利技术涉及含有配体的充气微泡的新配制物，其可有利地用于例如通过浮力分离细胞或生物材料的方法中。

技术介绍

[0002]用于从复杂的细胞混合物中(例如在如血液或血浆的生理流体中)分离出所需细胞的方法在许多生物医学领域中是有用的。在一种应用如基因治疗领域中，从患者身上获取细胞，进行处理以表达所需基因，和之后注回给患者。另一种可能的应用是用于分离循环的肿瘤细胞(CTC)或循环的生物标记物(例如液体活检)。
[0003]可以应用抗体或其它分子来标记用于随后分离的所需细胞。抗体可以共轭到磁性微米颗粒或纳米颗粒上。当与异质细胞混合物混合时，磁性颗粒结合到靶向细胞上和之后应用磁场分离。这一概念已经在几种商业产品(Dynabeads,Magnetic
‑
Activated Cell Sorting)中得到了实现。主要缺点是难以从靶向细胞中移除小颗粒。
[0004]最近描述了基于浮力的方法(例如参见US 2015/0219636)，其中将气体包封的微泡或微米颗粒用作浮力活化细胞分选(BACS)的反应试剂。在这种情况下，微泡/细胞的相互作用也用抗体或其它分子来实施。正如US2015/0219636中所提到的，微泡结合效率随配体密度增加。
[0005]但正如本申请人所观察到的，高的配体密度有可能促进微泡聚集(或微泡悬浮液的中间前体制剂的不稳定)。
[0006]现在已经发现，包含磷脂及聚乙二醇化磷脂与含有配体的聚乙二醇化磷脂的合适混合物的配制物可能是特别有利的，特别是用于分离细胞或生物材料的方法中。

技术实现思路

[0007]本专利技术的一个方面涉及具有稳定性包膜的包含生理上可接受气体的充气微泡的悬浮液，所述包膜包含：
[0008]a)磷脂；
[0009]b)1
‑
8mol％的含有反应性部分的第一聚乙二醇化磷脂，至少部分第一聚乙二醇化磷脂通过所述反应性部分与配体结合；和
[0010]c)1
‑
12mol％的第二聚乙二醇化磷脂；
[0011]相对于包膜中包含配体的聚乙二醇化磷脂的摩尔量，所述悬浮液包含少于40mol％游离的或与所述聚乙二醇化磷脂结合的所述配体。
[0012]所述配体优选能够选择性结合到生物素上。所述生物素更优选选自抗生物素蛋白、中性抗生物素蛋白和链霉抗生物素蛋白，优选为链霉抗生物素蛋白。所述配体优选与聚乙二醇化磷脂共价结合。
[0013]未与稳定性包膜结合的配体的量优选小于33％，更优选小于25％，和甚至更优选小于20％。
[0014]在稳定性包膜中，含有配体的第一聚乙二醇化磷脂部分的存在量优选为0.03
‑
0.75mol％，优选为0.05
‑
0.7％，更优选为0.08
‑
0.6％。
[0015]第一和第二聚乙二醇化磷脂(“PE
‑
PEG”)可以相同或不同，其为共价连接至平均分子量为1000
‑
8000g/mol、优选2000
‑
5000g/mol的聚乙二醇(PEG)上的磷脂。在第一PE
‑
PEG中，PEG的平均分子量(AMW)可以等于、大于或小于第二PE
‑
PEG中PEG的AMW。第一PE
‑
PEG中PEG的AMW优选与第二PE
‑
PEG中PEG的AMW相同或更大。
[0016]在一个实施方案中，第一和第二PE
‑
PEG中PEG的平均分子量为约2000g/mol(PE
‑
PEG2000)；第二PE
‑
PEG的摩尔量优选为至少3.5％，更优选为至少5％，甚至更优选为至少6％。
[0017]在另一个实施方案中，第一和第二PE
‑
PEG中PEG的平均分子量为约5000g/mol(PE
‑
PEG5000)。
[0018]在另一个实施方案中，第一PE
‑
PEG中PEG的平均分子量为约2000g/mol(PE
‑
PEG2000)，和第二PE
‑
PEG中PEG的平均分子量为约5000g/mol(PE
‑
PEG5000)。
[0019]在另一个实施方案中，第一PE
‑
PEG中PEG的平均分子量为约5000g/mol(PE
‑
PEG5000)，和第二PE
‑
PEG中PEG的平均分子量为约2000g/mol(PE
‑
PEG2000)。
[0020]在优选的实施方案中，本专利技术的充气微泡在其表面上的配体密度有利地为至少8000分子/μm2，优选为至少12000分子/μm2，更优选为至少15000分子/μm2，和甚至更优选为至少18000分子/μm2，例如至多50000分子/μm2。
[0021]本专利技术的另一个方面涉及一种生产用于制备前述充气微泡悬浮液的冻干前体的方法，所述方法包括：
[0022]‑
制备含预定摩尔量磷脂、含有反应性部分的聚乙二醇化磷脂的含水有机乳液；
[0023]‑
向所述乳液中加入一定摩尔量的官能化配体，所述摩尔量小于所述聚乙二醇化磷酯的摩尔量；
[0024]‑
使所述聚乙二醇化磷脂与所述配体偶合；
[0025]‑
冻干所述乳液。
[0026]本专利技术的另一方面包括在分离细胞的方法中应用上述充气微泡悬浮液。所述方法优选包括将所述微泡结合到生理液体中的所需细胞上，和通过浮力分离所述细胞。
具体实施方式
[0027]正如上文所提到的，本专利技术的一个方面涉及具有稳定性包膜的包含生理上可接受气体的充气微泡的悬浮液。所述稳定性包膜包含磷脂和预定量的含有配体的第一聚乙二醇化磷脂和第二聚乙二醇化磷脂。所述悬浮液的进一步特征在于相对于包含所述配体的聚乙二醇化磷脂的摩尔量，其包含少于40mol％的未与稳定性包膜结合的所述配体(游离的或与所述聚乙二醇化磷脂结合的)。
[0028]磷脂
[0029]正如这里所应用的，术语“磷脂”包括具有一个或优选两个(相同或不同的)脂肪酸残基和具有一个磷酸残基的甘油酯，其中所述磷酸残基进一步与亲水基团如胆碱(磷脂酰胆碱
‑
PC)、丝氨酸(磷脂酰丝氨酸
‑
PS)、甘油(磷脂酰甘油
‑
PG)、乙醇胺(磷脂酰乙醇胺
‑
PE)、肌醇(磷脂酰肌醇)结合。只有一个脂肪酸残基的磷脂的酯在本领域中通常称作磷脂的“溶
血”形式或“溶血磷脂”。在磷脂中存在的脂肪酸残基一般为长链脂肪酸，通常包含12
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24个碳原子，优选为14
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22个碳原子；脂肪链可以包含一个或多个不饱和键，或优选完全饱和。磷脂中包含的合适脂肪酸的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.具有稳定性包膜的包含生理上可接受气体的充气微泡的悬浮液，所述包膜包含：a)磷脂b)1
‑
8mol％的含有反应性部分的第一聚乙二醇化磷脂，至少部分第一聚乙二醇化磷脂通过所述反应性部分与配体结合；和c)1
‑
12mol％的第二聚乙二醇化磷脂；相对于包膜中包含配体的聚乙二醇化磷脂的摩尔量，所述悬浮液包含少于40mol％的游离的或与所述聚乙二醇化磷脂结合的所述配体。2.权利要求1的悬浮液，包含少于33mol％的所述配体。3.权利要求1或2的悬浮液，其中含有配体的第一聚乙二醇化磷脂部分在稳定性包膜中的存在量为0.03
‑
0.75mol％。4.前述权利要求任一项的悬浮液，其中未与配体结合的第一聚乙二醇化磷脂部分在所述包膜中的存在量为0.5
‑
7.5mol％。5.前述权利要求任一项的悬浮液，其中第一或第二聚乙二醇化磷脂为与平均分子量为1000
‑
8000g/mol的聚乙二醇共价连接的磷脂。6.前述权利要求任一项的悬浮液，其中所述配体选自抗生物素蛋白、中性抗生物素蛋白和链霉抗生物素蛋白。7.前述权利要求任一项的悬浮液，其中所述配体在包膜表面上的密度为至少8000分子/μm2。8.前述权利要求任一项的悬浮液，其中第一和第二聚乙二醇化磷脂的分子量为2000g/mol+/
‑
5％。9.权利要求8的悬浮液，其中所述包膜包含1
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5mol％的第一聚乙二醇化磷脂和5
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10％的第二聚乙二醇化磷脂。10.权利要求9的悬浮液，其中第一聚乙二醇化磷脂与第二聚乙二醇化磷脂之间的相对摩尔比为1:1至1:8。11.前述权利要求任一项的悬浮液，其中磷脂的含量为60
‑
95mol％。12.前述权利要求任一项的悬浮液，还包含脂质。13.权利要求12的悬浮液，其中所述脂质为脂肪酸。14.权利要求12或13的悬浮液，其中脂肪酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：P，
申请(专利权)人：博莱科瑞士股份有限公司，
类型：发明
国别省市：