【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及带有总体正电荷的新的标准化尺寸充气微泡、涉及它们的用途和涉及它们的制造方法。
技术介绍
1、标准化尺寸充气微泡(简称“标准化微泡”或“cmv”)是与商业上可得的多分散微泡(microbubble)超声造影剂(usca)相比，具有相对窄的和受控尺寸分布的新一代充气微泡(具有可以选自介于2与8μm之间的范围的中值直径尺寸)。标准化微泡尤其被设计成增强成像灵敏度和提高治疗性治疗中的效率，例如通过不同的技术(包括例如bbb(血脑屏障)破坏、热消融、超声手术或超声血栓溶解)将药物或基因递送至特定器官中的效率。标准化微泡可以使用各种技术来生产：倾析、机械过滤、离心、气泡分选和流动聚焦。特别地，流动聚焦技术允许，在用于后续使用的悬浮微泡的可接受浓度(例如达4x108 cmv/ml)的情况下，以高度可再现的方式以合理的生产速率(～106气泡/秒)制造标准化微泡(其特征在于相对低的几何标准偏差(gsd)值，例如低至约1.05-1.08)。wo2018/041906(参考文献1)和wo2019/170606(参考文献2)描述了制备cmv的合适方法，尤其是通过使用流动聚焦微流控技术。
2、虽然包含阳离子两亲性化合物的充气微泡在本领域中通常是已知的(参见例如参考文献5：wang等人，“cationic versus neutral microbubbles for ultrasound-mediated gene delivery in cancer”。radiology：第264卷第3期，2012年9月，第721-732页)
3、然而，申请人已经观察到，在微泡的制剂中存在聚乙二醇(“peg”)的某些脂质衍生物，其可以以另外的方式用于向微泡的稳定化层提供期望的物理化学性质，以及用于限制新产生的cmv中的聚结现象，然而可能不期望地影响微泡的其他物理化学性质。尤其是，申请人已观察到，使用带负电荷的聚乙二醇化磷脂采用流动聚焦方法制备cmv可以显著减少或防止阳离子脂质掺入cmv的稳定化层中，导致微泡的总净电荷并非充分正性(例如，有效结合带负电荷的遗传物质)。
技术实现思路
1、本专利技术的一个方面涉及具有包含两亲性材料的稳定性包膜的充气微泡的悬浮液，其中所述两亲性材料包括阳离子脂质和中性或阳离子两亲性聚合物化合物，所述两亲性聚合物化合物包含各自的亲水和疏水部分并且以高于3％的摩尔量存在，和其中所述充气微泡具有至少1.25或更低的几何标准偏差(gsd)值。
2、标准化微泡的悬浮液优选具有至少1.22或更低，更优选至少1.20的gsd。
3、阳离子脂质优选为包含连接至铵基团，尤其是季胺或质子化的叔胺基团的饱和或不饱和c8-c24烃链的化合物。阳离子脂质优选为阳离子磷脂，铵的c8-c24脂肪酸衍生物或铵的c8-c24烷基或烷氧基衍生物。例如，阳离子脂质为乙基磷脂酰胆碱的c8-c24脂肪酸衍生物、三甲铵的c8-c24脂肪酸衍生物或键合至季铵基团或键合至质子化的叔铵基团的c8-c24烷基或烷氧基链。
4、两亲性聚合物化合物优选以至少5％，更优选至少7.5％的摩尔量存在。
5、所述两亲性聚合物化合物优选是中性的。亲水性部分优选包括亲水性聚合物，如聚乙二醇(“peg”)。疏水性部分优选包括烷基。或者，疏水性部分包括疏水性聚合物，如氧亚丙基重复单元。
6、在某些实施方案中，两亲性聚合物化合物是聚乙二醇与c12-c24脂肪酸的酯。与聚乙二醇形成酯的脂肪酸优选为c14-c20脂肪酸，如肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、花生酸、亚油酸、亚麻酸或油酸。在某些其它实施方案中，烷基修饰的聚亚烷基包括连接至聚亚烷基二醇的c12-c24烷基。
7、在另一实施方案中，中性或阳离子两亲性聚合物化合物是嵌段共聚物，优选包括疏水性部分和亲水性部分的嵌段共聚物。在优选的实施方案中，所述嵌段共聚物包括重复的氧亚丙基单元和重复的氧亚乙基单元。
8、两亲性聚合物化合物的分子量优选为1000至9000g/mol，更优选1500至6000g/mol并且甚至更优选1800至5000g/mol。
9、除了阳离子脂质和中性或阳离子两亲性聚合物化合物之外，cmv可以另外包含中性脂质，例如磷脂或脂肪酸。中性脂质优选为磷脂，更优选磷脂酰胆碱的c12-c24脂肪酸衍生物或磷脂酰乙醇胺的c12-c24脂肪酸衍生物。
10、如上文定义的cmv典型地具有在它们的表面上的总体正电荷，其可以被表达为“ζ电位”。根据本专利技术的cmv具有至少10mv或更高，优选至少12mv或更高并且甚至更优选至少15mv或更高的ζ电位。
11、可以通过如下制备根据本专利技术的cmv：
12、-提供(i)气态流和(ii)包含阳离子脂质、中性或阳离子两亲性聚合物化合物和任选的中性脂质的含水液体流；
13、-引导所述气态流和所述液体流穿过各自的入口通道朝向接触区域；
14、-引导所述气态流和所述液体流从接触区域穿过标准化孔口，以获得包含所述充气微泡的含水悬浮液；
15、-引导充气微泡的所述悬浮液朝向出口通道；和
16、-收集充气微泡的所述悬浮液。
17、本专利技术的另一方面涉及根据上述方法制备的cmv。
18、本专利技术的另一方面涉及如上文定义的标准化充气微泡在诊断方法中的用途。
19、本专利技术的另一方面涉及如上文定义的标准化充气微泡在超声治疗性治疗方法中的用途。
20、在一个实施方案中，所述超声治疗性治疗方法包括：
21、(i)对患者施用根据本专利技术的cmv悬浮液；
22、(ii)识别所述患者中将受到治疗性治疗的感兴趣的区域，所述感兴趣的区域包括所述cmv悬浮液；和
23、(iii)施加用于治疗所述感兴趣的区域的超声波束；
24、由此通过在所述感兴趣的区域中存在所述cmv悬浮液而增强所述超声治疗性治疗。
25、在另一实施方案中，所述超声治疗性治疗方法包括：
26、(i)对患者施用结合至带有总体负电荷的治疗有效物质的根据本专利技术的cmv的悬浮液；
27、(ii)识别所述患者中需要所述治疗性治疗的感兴趣的区域，所述感兴趣的区域包括所述结合的cmv的所述悬浮液；和
28、(iii)施加用于治疗所述感兴趣的区域的超声波束，所述治疗包括在所述感兴趣的区域中释放治疗活性物质。
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1.具有包含两亲性材料的稳定性包膜的标准化充气微泡的悬浮液，其中：
2.根据权利要求1所述的悬浮液，其中，所述阳离子脂质是连接至铵基团的饱和或不饱和烃链。
3.根据权利要求2所述的悬浮液，其中，所述阳离子脂质是阳离子磷脂，包含脂肪酸残基、烷基残基或烷氧基残基的铵结构部分。
4.根据权利要求3所述的悬浮液，其中，所述阳离子脂质是包含C8-C24脂肪酸的乙基磷脂酰胆碱、C8-C24脂肪酸三甲铵或键合至季铵基团或键合至质子化的叔铵基团的C8-C24烷基或烷氧基结构部分。
5.根据前述权利要求中任一项所述的悬浮液，其中，所述两亲性聚合物化合物包含聚乙二醇。
6.根据前述权利要求中任一项所述的悬浮液，其中，所述两亲性聚合物化合物具有1000至9000g/mol的分子量。
7.根据前述权利要求中任一项所述的悬浮液，其中，所述阳离子脂质为两亲性材料的总摩尔量的5％至65％的量。
8.根据前述权利要求中任一项所述的悬浮液，其中，所述两亲性聚合物化合物为两亲性材料的总摩尔量的至少5％的量。
9.根据前述
10.根据前述权利要求中任一项所述的悬浮液，其中，所述两亲性聚合物化合物是聚乙二醇与C12-C24脂肪酸的酯。
11.根据前述权利要求1至9中任一项所述的悬浮液，其中，所述两亲性聚合物化合物是包含氧亚丙基重复单元和氧亚乙基重复单元的嵌段共聚物。
12.根据前述权利要求中任一项所述的悬浮液，其中，所述两亲性材料另外包括中性脂质。
13.根据权利要求12所述的悬浮液，其中，所述中性脂质为磷脂酰胆碱的C12-C24脂肪酸衍生物或磷脂酰乙醇胺的C12-C24脂肪酸衍生物。
14.根据权利要求12或13所述的悬浮液，其中，所述中性脂质以两亲性材料的总摩尔量的30％至90％的量存在。
15.根据前述权利要求中任一项所述的悬浮液，其中，所述充气微泡的悬浮液具有10mV或更高的ζ电势。
16.根据前述权利要求中任一项所述的悬浮液，其另外包含结合至微泡表面的带负电的治疗活性物质。
17.根据权利要求16所述的悬浮液，其中，所述治疗活性物质包括遗传物质。
18.根据权利要求17所述的悬浮液，其中，所述遗传物质包括DNA、mRNA、saRNA、质粒或纳米质粒。
19.制造标准化充气微泡的悬浮液的方法，其包括：
20.标准化充气微泡的悬浮液，其根据权利要求19的制造方法来制备。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.具有包含两亲性材料的稳定性包膜的标准化充气微泡的悬浮液，其中：
2.根据权利要求1所述的悬浮液，其中，所述阳离子脂质是连接至铵基团的饱和或不饱和烃链。
3.根据权利要求2所述的悬浮液，其中，所述阳离子脂质是阳离子磷脂，包含脂肪酸残基、烷基残基或烷氧基残基的铵结构部分。
4.根据权利要求3所述的悬浮液，其中，所述阳离子脂质是包含c8-c24脂肪酸的乙基磷脂酰胆碱、c8-c24脂肪酸三甲铵或键合至季铵基团或键合至质子化的叔铵基团的c8-c24烷基或烷氧基结构部分。
5.根据前述权利要求中任一项所述的悬浮液，其中，所述两亲性聚合物化合物包含聚乙二醇。
6.根据前述权利要求中任一项所述的悬浮液，其中，所述两亲性聚合物化合物具有1000至9000g/mol的分子量。
7.根据前述权利要求中任一项所述的悬浮液，其中，所述阳离子脂质为两亲性材料的总摩尔量的5％至65％的量。
8.根据前述权利要求中任一项所述的悬浮液，其中，所述两亲性聚合物化合物为两亲性材料的总摩尔量的至少5％的量。
9.根据前述权利要求中任一项所述的悬浮液，其中，所述两亲性聚合物化合物为两亲性材料的总摩尔量的至少8％的量。
10.根据前述权利要求中任一项所述的悬浮液，...
【专利技术属性】
技术研发人员：A·拉苏斯，S·沙尔卡维，
申请(专利权)人：博莱科瑞士股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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