用于遗传修饰和靶向的组合物和方法技术

本文描述了用于修饰和靶向基因的组合物和方法。本文还描述了用于修饰和靶向细胞或非人类哺乳动物中的基因的组合物和方法。人类哺乳动物中的基因的组合物和方法。人类哺乳动物中的基因的组合物和方法。

【技术实现步骤摘要】
用于遗传修饰和靶向的组合物和方法
援引并入
[0001]本说明书中所提及的所有出版物、专利和专利申请均通过引用并入本文，其程度犹如具体地且单独地指出每个单独的出版物、专利或专利申请均通过引用而并入。

技术介绍

[0002]治疗和预防病毒感染和疾病是现代医学最紧迫的挑战之一。病毒感染和疾病的损害范围广泛。例如，作物和牲畜的病毒感染和疾病每年导致数十亿美元的损失。
[0003]已经利用遗传修饰来对抗病毒感染。遗传修饰可涉及基因的操纵，包括在基因组内的单个或多个基因座处添加、缺失或替换靶基因或其一部分。通过遗传修饰编码病毒用来进入细胞的蛋白质的基因，这种方法可以赋予或增强对病毒感染的抗性。然而，通过基因编辑赋予或增强对病毒感染的抗性可能是昂贵的、耗时的，有时是无效的。另外，针对一种类型的病毒感染的抗性的遗传修饰不会防止其他类型的病毒感染。

技术实现思路

[0004]本公开提供了细胞、组织、器官和非人类哺乳动物，其包含导致增强的对病毒感染的抗性的遗传修饰。本文还公开了细胞、组织、器官和非人类哺乳动物，其包含遗传修饰以增强对多种病毒株引起的感染的抗性。
[0005]本文描述了一种遗传修饰的细胞，其与对照细胞相比表现出增强的对病毒感染的抗性，所述遗传修饰的细胞在编码CD163的基因中包含至少一个修饰的染色体序列，其中所述至少一个染色体序列选自：外显子1、外显子2、外显子3、外显子4、外显子5、外显子6、外显子10、外显子11、外显子12、外显子13、外显子14、外显子15、外显子16、外显子17、内含子1、内含子2、内含子3、内含子4、内含子5、内含子9、内含子10、内含子11、内含子12、内含子13、内含子14、内含子15和内含子16。在一些实施方案中，CD163的所述至少一个染色体序列选自：外显子1、外显子2、外显子3、外显子4、外显子5、外显子6、外显子10、外显子11、外显子12、外显子13、内含子1、内含子2、内含子3、内含子4、内含子5、内含子9、内含子10、内含子11、内含子12和内含子13。在一些实施方案中，CD163的所述至少一个染色体序列选自：外显子4、内含子3和内含子4。在一些实施方案中，所述遗传修饰的细胞表现出降低的CD163表达或活性。在一些实施方案中，CD163的所述至少一个修饰的染色体序列包含移码突变。在一些实施方案中，所述包含修饰的CD163的遗传修饰的细胞表现出增强的对PRRSV和ASFV的抗性。在一些实施方案中，所述包含修饰的CD163的遗传修饰的细胞表现出增强的对PRRSV的抗性。在一些实施方案中，所述包含修饰的CD163的遗传修饰的细胞表现出增强的对ASFV的抗性。
[0006]本文描述了一种遗传修饰的非人类哺乳动物，其表现出增强的对病毒感染的抗性，所述遗传修饰的非人类哺乳动物包含本文所述的包含修饰的CD163的遗传修饰的细胞。在一些实施方案中，所述遗传修饰的非人类哺乳动物是偶蹄动物。在一些实施方案中，所述偶蹄动物是猪。在一些实施方案中，所述遗传修饰的非人类哺乳动物表现出增强的对PRRSV
和ASFV的抗性。在一些实施方案中，所述包含修饰的CD163的遗传修饰的非人类哺乳动物表现出增强的对PRRSV的抗性。在一些实施方案中，所述包含修饰的CD163的遗传修饰的非人类哺乳动物表现出增强的对ASFV的抗性。
[0007]本文描述了一种遗传修饰细胞或非人类哺乳动物以诱导增强的对病毒感染的抗性的方法，所述方法包括在遗传修饰的细胞或非人类哺乳动物中生成CD163的至少一个修饰的染色体序列。在一些实施方案中，所述方法包括生成CD163的至少一个修饰的染色体序列，其中与CD163未修饰的对照细胞或非人类哺乳动物相比，在遗传修饰的细胞或非人类哺乳动物中，所述修饰的CD163增强对PRRSV和ASFV病毒感染的抗性。在一些实施方案中，所述方法包括生成CD163的至少一个修饰的染色体序列，其中与CD163未修饰的对照细胞或非人类哺乳动物相比，在遗传修饰的细胞或非人类哺乳动物中，所述修饰的CD163增强对PRRSV病毒感染的抗性。在一些实施方案中，所述方法包括生成CD163的至少一个修饰的染色体序列，其中与CD163未修饰的对照细胞或非人类哺乳动物相比，在遗传修饰的细胞或非人类哺乳动物中，所述修饰的CD163增强对ASFV病毒感染的抗性。
[0008]本文描述了一种遗传修饰的细胞，其与对照细胞相比表现出增强的对至少两个属的病毒引起的病毒感染的抗性，所述遗传修饰的细胞包含所述修饰细胞的一种或多种内源基因的修饰的遗传内容，该修饰的遗传内容赋予增强的抗性。在一些实施方案中，所述修饰的遗传内容包括染色体基因或其转录物。在一些实施方案中，所述一种或多种内源基因编码选自下组的一种或多种蛋白质：受体蛋白、肽酶蛋白、糖基转移酶蛋白、羟化酶蛋白和干扰素刺激基因(ISG)蛋白。在一些实施方案中，所述受体蛋白是CD163。在一些实施方案中，所述肽酶蛋白是ANPEP。在一些实施方案中，所述糖基转移酶蛋白是GGTA1。在一些实施方案中，所述糖基转移酶蛋白是CMAH。在一些实施方案中，所述羟化酶蛋白是B4HALNT2。在一些实施方案中，所述ISG蛋白是RELA。在一些实施方案中，所述一种或多种内源基因编码选自下组的至少两种蛋白质：CD163、ANPEP、GGTA1、CMAH、B4GALNT2和RELA。在一些实施方案中，所述一种或多种内源基因编码CD163和选自下组的一种或多种蛋白质：ANPEP、GGTA1、CMAH、B4GALNT2和RELA。在一些实施方案中，所述一种或多种内源基因编码ANPEP和选自下组的一种或多种蛋白质：CD163、GGTA1、CMAH、B4GALNT2和RELA。在一些实施方案中，所述一种或多种内源基因编码选自下组的一种或多种蛋白质：GGTA1、CMAH和B4GALNT2；以及CD163或ANPEP。在一些实施方案中，所述一种或多种内源基因编码选自下组的一种或多种蛋白质：RELA；和CD163或ANPEP。在一些实施方案中，与所述对照细胞相比，所述遗传修饰的细胞表现出增强的对至少三个属的病毒引起的病毒感染的抗性，并且其中所述一种或多种内源基因编码CD163、ANPEP和选自下组的一种或多种基因：GGTA1、CMAH、B4GALNT2和RELA。在一些实施方案中，所述遗传修饰的细胞表现出增强的对至少两个属的病毒引起的感染的抗性，所述病毒包括选自下组的两种或更多种病毒：猪繁殖与呼吸综合征病毒(Betaarterivirus，PRRSV)、甲型冠状病毒(Alphacoronavirus)(TGEV)和非洲猪瘟病病毒(Asfivirus)(ASFV)。
[0009]本文描述了一种遗传修饰的非人类哺乳动物，其表现出增强的对至少两个属的病毒引起的病毒感染的抗性，所述遗传修饰的非人类哺乳动物包含本文描述的遗传修饰的细胞。在一些实施方案中，所述遗传修饰的非人类哺乳动物是偶蹄动物。在一些实施方案中，所述偶蹄动物是猪。本文还描述了一种遗传修饰细胞或非人类哺乳动物以诱导增强的对至
少两个属的病毒引本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种遗传修饰的细胞，其与对照细胞相比表现出增强的对病毒感染的抗性，所述遗传修饰的细胞在编码CD163的基因中包含至少一个修饰的染色体序列，其中所述至少一个染色体序列选自：外显子1、外显子2、外显子3、外显子4、外显子5、外显子6、外显子10、外显子11、外显子12、外显子13、外显子14、外显子15、外显子16、外显子17、内含子1、内含子2、内含子3、内含子4、内含子5、内含子9、内含子10、内含子11、内含子12、内含子13、内含子14、内含子15和内含子16。2.根据权利要求1所述的遗传修饰的细胞，其中所述至少一个染色体序列选自：外显子1、外显子2、外显子3、外显子4、外显子5、外显子6、外显子10、外显子11、外显子12、外显子13、内含子1、内含子2、内含子3、内含子4、内含子5、内含子9、内含子10、内含子11、内含子12和内含子13。3.根据前述权利要求中任一项所述的遗传修饰的细胞，其中所述至少一个染色体序列选自：外显子4、内含子3和内含子4。4.根据前述权利要求中任一项所述的遗传修饰的细胞，其中所述遗传修饰的细胞表现出降低的CD163表达或活性。5.根据前述权利要求中任一项所述的遗传修饰的细胞，其中所述至少一个修饰的染色体序列包含移码突变。6.根据前述权利要求中任一项所述的遗传修饰的细胞，其中所述遗传修饰的细胞表现出增强的对PRRSV和ASFV的抗性。7.根据前述权利要求中任一项所述的遗传修饰的细胞，其中所述遗传修饰的细胞表现出增强的对PRRSV的抗性。8.根据前述权利要求中任一项所述的遗传修饰的细胞，其中所述遗传修饰的细胞表现出增强的对ASFV的抗性。9.一种遗传修饰的非人类哺乳动物，其表现出增强的对病毒感染的抗性，所述遗传修饰的非人类哺乳动物包含前述权利要求中任一项的遗传修饰的细胞。10.根据权利要求9所述的遗传修饰的非人类哺乳动物，其中所述遗传修饰的非人类哺乳动物是偶蹄动物。11.根据权利要求10所述的遗传修饰的非人类哺乳动物，其中所述偶蹄动物是猪。12.一种遗传修饰细胞或非人类哺乳动物以诱导增强的对病毒感染的抗性的方法，所述方法包括生成权利要求1
‑
8中任一项的至少一个修饰的染色体序列。13.一种遗传修饰的细胞，其与对照细胞相比表现出增强的对至少两个属的病毒引起的病毒感染的抗性，所述遗传修饰的细胞包含所述修饰细胞的一种或多种内源基因的修饰的遗传内容，该修饰的遗传内容赋予增强的抗性。14.根据权利要求13所述的遗传修饰的细胞，其中所述修饰的遗传内容包括染色体基因或其转录物。15.根据权利要求13所述的遗传修饰的细胞，其中所述一种或多种内源基因编码选自下组的一种或多种蛋白质：受体蛋白、肽酶蛋白、糖基转移酶蛋白、羟化酶蛋白和干扰素刺激基因(ISG)蛋白。16.根据权利要求15所述的遗传修饰的细胞，其中所述受体蛋白是CD163。17.根据权利要求15所述的遗传修饰的细胞，其中所述肽酶蛋白是ANPEP。
18.根据权利要求15所述的遗传修饰的细胞，其中所述糖基转移酶蛋白是GGTA1。19.根据权利要求15所述的遗传修饰的细胞，其中所述糖基转移酶蛋白是CMAH。20.根据权利要求15所述的遗传修饰的细胞，其中所述羟化酶蛋白是B4HALNT2。21.根据权利要求15所述的遗传修饰的细胞，其中所述ISG蛋白是RELA。22.根据权利要求13所述的遗传修饰的细胞，其中所述一种或多种内源基因编码选自下组的至少两种蛋白质：CD163、ANPEP、GGTA1、CMAH、B4GALNT2和RELA。23.根据权利要求13所述的遗传修饰的细胞，其中所述一种或多种内源基因编码CD163和选自下组的一种或多种蛋白质：ANPEP、GGTA1、CMAH、B4GALNT2和RELA。24.根据权利要求13所述的遗传修饰的细胞，其中所述一种或多种内源基因编码ANPEP和选自下组的一种或多种蛋白质：CD163、GGTA1、CMAH、B4GALNT2和RELA。25.根据权利要求13所述的遗传修饰的细胞，其中所述一种或多种内源基因编码选自下组的一种或多种蛋白质：a.GGTA1、CMAH和B4GALNT2；以及b.CD163或ANPEP。26.根据权利要求13所述的遗传修饰的细胞，其中所述一种或多种内源基因编码选自下组的一种或多种蛋白质：a.RELA；和b.CD163或ANPEP。27.根据权利要求13所述的遗传修饰的细胞，其中与所述对照细胞相比，所述遗传修饰的细胞表现出增强的对至少三个属的病毒引起的病毒感染的抗性，并且其中所述一种或多种内源基因编码CD163、ANPEP和选自下组的一种或多种基因：GGTA1、CMAH、B4GALNT2和RELA。28.根据权利要求13所述的遗传修饰的细胞，其中所述至少两个属的病毒包括选自下组的两种或更多...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨璐菡，高杨滨，
申请(专利权)人：杭州启函生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：