一种通过干扰UBA2表达抑制牛骨骼肌卫星细胞增殖和成肌分化的方法技术

本发明专利技术公开了一种通过干扰UBA2表达抑制牛骨骼肌卫星细胞增殖和成肌分化的方法，所述方法是通过干扰UBA2表达来实现抑制牛骨骼肌卫星细胞的增殖和成肌分化，其中，所述UBA2的基因组碱基序列为：SEQ NO.1。本发明专利技术方法利用改变UBA2表达对牛肌卫星细胞的增殖和成肌分化过程进行调控，可以为肌肉发育分化的泛素样修饰物活化酶研究提供启示，并为肌肉发育分化及损伤修复的临床研究及诊治提供新的思路和参考。参考。参考。

【技术实现步骤摘要】
一种通过干扰UBA2表达抑制牛骨骼肌卫星细胞增殖和成肌分化的方法


[0001]本专利技术属于生物、细胞、组织工程
，尤其是一种通过干扰UBA2表达抑制牛骨骼肌卫星细胞增殖和成肌分化的方法。

技术介绍

[0002]骨骼肌卫星细胞(skeletal muscle satellite cell)是骨骼肌中一种附着于肌纤维表面的扁平、有突起的细胞，通常以静息状态存在于肌纤维肌膜与基底膜之间，在一定的条件下可以被激活，肌卫星细胞可增殖、分化、融合成为成熟的肌管或肌纤维，肌卫星细胞在动物出生后肌肉的生长发育和再生过程中发挥着十分重要的作用。肌卫星细胞的体外增殖和成肌分化过程很好地模拟了体内的肌肉发育过程，是研究细胞分化和肌肉发育的良好细胞模型。肌卫星细胞的激活、增殖和成肌分化过程受多种因素的调控，了解骨骼肌卫星细胞的增殖和成肌分化调控模式，可以增加人为控制肌细胞形成的可能性。
[0003]肌肉的分化和生长发育过程是内在遗传、表观遗传和外在的各种信号互作的结果，骨骼肌发育分化过程涉及多基因的表达、信号途径及网络式调控，过程极其复杂，其中泛素样修饰物活化酶的调控作用受到越来越多的重视。泛素样修饰物活化酶2(ubiquit in like modifier activating enzyme 2,UBA2)也被称作SUMO活化酶2(SUMO
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activating enzyme 2,SAE2)，是SUMO系统中E1酶(由AOS1和UBA2构成异二聚体)的重要组分，能够直接影响人体内SUMO化水平。牛UBA2基因位于18号染色体，近年来多项研究报道了UBA2基因或UBA2蛋白异常与临床疾病的相关性。小泛素相关修饰物(small ubiquitin
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like modifiers，SUMO)是一种泛素样分子，能够可逆地修饰翻译后的蛋白，具有调节靶蛋白稳定性、定位及与其他蛋白相互作用的功能。此外，SUMO还参与DNA修复、细胞增殖与凋亡的调节和基因组完整性的维护等多个生理过程。本专利技术人在前期研究中对MSTN
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牛和野生型牛进行了肌肉蛋白组学分析发现UBA2在MSTN
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牛和野生型牛中存在显著性差异，提示UBA2可能对肌肉发育分化具有一定的调控作用。UBA2是SUMO系统中E1酶(由AOS1和UBA2构成异二聚体)的重要组分，SUMO化循环包括活化、结合、连接、修饰和解离等多个过程，包括SUMO活化酶E1(也称AOS1
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UBA2或SAE1
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SAE2)，SUMO结合酶E2(UBC9)，SUMO连接酶E3和SUMO蛋白酶(SUMO
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specific protease,SENPs)等多个酶的参与。已有研究表明，在直肠癌中，下调UBA2的表达能够抑制结直肠癌细胞的迁移和侵袭，也可以抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡。此外，抑制UBA2表达可诱导早幼粒细胞白血病(promyelocytic leukemia，PML)核体破裂，促进细胞凋亡或衰老。目前有关UBA2和SUMO化修饰的报道多在各种肿瘤中，而在牛肌卫星细胞的增殖和成肌分化中UBA2的相关研究未见报道。
[0004]通过检索，尚未发现与本专利技术专利申请相关的专利公开文献。

技术实现思路

[0005]本专利技术目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种通过干扰UBA2表达抑制牛骨
骼肌卫星细胞增殖和成肌分化的方法。
[0006]本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：
[0007]一种通过干扰UBA2表达抑制牛骨骼肌卫星细胞增殖和成肌分化的方法，所述方法是通过干扰UBA2表达来实现抑制牛骨骼肌卫星细胞的增殖和成肌分化，其中，所述UBA2的基因组碱基序列为：SEQ NO.1。
[0008]进一步地，具体步骤如下：
[0009]根据UBA2碱基序列，设计合成出UBA2的si
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RNA，以si
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RNA转染牛骨骼肌卫星细胞，调低UBA2的表达水平，实现抑制牛骨骼肌卫星细胞的增殖和成肌分化。
[0010]进一步地，所述si
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RNA的基因序列为：SEQ NO.2、SEQ NO.3或SEQ NO.4。
[0011]进一步地，所述干扰UBA2表达水平的方法包括：采用干扰UBA2表达的质粒、病毒载体或基因敲除。
[0012]本专利技术取得的优点和积极效果为：
[0013]1、本专利技术方法利用改变UBA2表达对牛肌卫星细胞的增殖和成肌分化过程进行调控，可以为肌肉发育分化的泛素样修饰物活化酶研究提供启示，并为肌肉发育分化及损伤修复的临床研究及诊治提供新的思路和参考。
[0014]2、利用本专利技术建立的通过改变UBA2表达来抑制牛骨骼肌卫星细胞的增殖和成肌分化过程的方法，可以有效地调控肌肉发育分化过程，借助此方法可以为肌肉发育分化及损伤修复中UBA2的利用提供一定的借鉴，并为肌肉发育分化及损伤修复的临床研究及诊治提供新的思路和参考。
[0015]3、鉴于目前UBA2对牛骨骼肌卫星细胞是否具有一定的调节作用，以及具体的作用效果还不清楚，本专利技术设计并合成UBA2的si
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RNA，然后采用lip3000试剂转染牛骨骼肌卫星细胞，干扰牛骨骼肌卫星细胞中UBA2的表达水平，通过改变牛骨骼肌卫星细胞中UBA2的表达，从而抑制牛骨骼肌卫星细胞的增殖和成肌分化过程。借助此方法可以为肌肉发育分化及损伤修复中UBA2的利用提供借鉴，并为肌肉发育分化及损伤修复的临床研究及诊治提供新的思路和方法。
[0016]4、本专利技术人在前期研究中对MSTN
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牛和野生型牛进行了肌肉蛋白组学分析发现泛素样修饰物活化酶UBA2(ubiquitin like modifier activating enzyme 2，UBA2)在MSTN
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牛和野生型牛中存在显著性差异，提示UBA2可能对肌肉发育分化具有一定的调控作用。本专利技术选取UBA2进行增殖和成肌分化调控研究，以期建立通过改变牛骨骼肌卫星细胞中UBA2的表达，从而影响牛骨骼肌卫星细胞的增殖和成肌分化过程的方法，为肌肉发育分化的泛素样修饰物活化酶调控研究提供新的思路和方法。
附图说明
[0017]图1为本专利技术中UBA2的si
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RNA在牛骨骼肌卫星细胞中对UBA2表达水平影响的定量qRT
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PCR检测结果图；qRT
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PCR检测牛骨骼肌卫星细胞中UBA2的mRNA表达水平；
[0018]图2为本专利技术中采用si
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RNA干扰UBA2表达对牛骨骼肌卫星细胞增殖的影响结果图；其中，A为EDU检测荧光显微镜下荧光图；B为EDU检测结果直观示意图；C为qRT
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PCR检测牛骨骼肌卫星细胞中增殖标志基因P本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种通过干扰UBA2表达抑制牛骨骼肌卫星细胞增殖和成肌分化的方法，其特征在于：所述方法是通过干扰UBA2表达来实现抑制牛骨骼肌卫星细胞的增殖和成肌分化，其中，所述UBA2的基因组碱基序列为：SEQ NO.1。2.根据权利要求1所述的通过干扰UBA2表达抑制牛骨骼肌卫星细胞增殖和成肌分化的方法，其特征在于：具体步骤如下：根据UBA2碱基序列，设计合成出UBA2的si
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RNA，以si
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RNA转染牛骨骼肌卫星细胞，调低...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁向彬，张钰婷，于州，王轶敏，张林林，李新，郭益文，郭宏，
申请(专利权)人：天津农学院，
类型：发明
国别省市：